流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，它通过飞沫传播，能在短时间内迅速蔓延。2009年起源于北美的甲型H1N1流感曾经造成世界范围内的大流行，WHO曾将其警戒级别提升至最高级别6级，给人类社会和经济造成极大的负面影响。一项由WHO组织开展的研究显示，在2009至2010年的流感季中，全世界共有20%至27%的人被甲型H1N1病毒感染。尽管2010年8月WHO宣布全球已进入“流感大流行后期”，意味着“正常监测显示大多数国家的流感活动水平已恢复到季节性流感水平”，但同时指出，“局部地区仍有暴发甲型H1N1流感疫情的可能。” 本次疫情患者感染的是一种H1N1亚型流感病毒新毒株，它包含人流感病毒、北美禽流感病毒和北美、欧洲、亚洲三类H1N1流感病毒的基因片段。这种病毒已被证实经由人际传播，人感染后会出现高烧、精神不振、厌食、咳嗽等症状。科学家指出，打喷嚏、咳嗽和物理接触都有可能导致甲型H1N1流感病毒在人群间传播。这次甲型H1N1流感病毒呈现的另一大特点是对青壮年攻击性强，目前确诊甲型H1N1流感死者中大多数年龄都在25 ~ 45岁之间。

雪貂经过轻度麻醉后滴鼻感染甲型H1N1病毒。实验的观察期为10天。皮下植入体温芯片用于监测体温、体重变化。每日观察雪貂临床症变化，在感染后第5天处死动物，取组织样本用于监测病毒复制动力曲线和动物感染后组织炎症反应检查。

1.Lili Xu, Linlin Bao, Qi Lv, Wei Deng, Yila Ma, Fengdi Li, Lingjun Zhan, Hua Zhu, Chunmei Ma, and Chuan Qin. A single-amino-acid substitution in the HA protein changes the replication and pathogenicity of the 2009 pandemic A (H1N1) influenza viruses in vitro and in vivo. Virology Journal. 2010, 7:325.  2.Bao L, Xu L, Zhan L, Deng W, Zhu H, Gao H, Sun H, Ma C, Lv Q, Li F, Chen H, Zhang L, Qin C. Challenge and polymorphism analysis of the novel A (H1N1) influenza virus to normal animals. Virus Res. 2010; 151(1): 60-5. 3.Lili Xu, Linlin Bao, Jianfang Zhou, Dayan Wang, Wei Deng, Qi Lv, Yila Ma ,Fengdi Li, Huihui Sun, Lingjun Zhan, Hua Zhu, Chunmei Ma, Yuelong Shu , and Chuan Qin. Genomic polymorphism of the pandemic A (H1N1) influenza viruses correlates with viral replication, virulence, and pathogenicity in vitro and in vivo. PLoS ONE. 2011, 6(6): e20698. 4.Meng S, Liu Z, Xu L, Li L, Mei S, Bao L, Deng W, Li L, Lei R, Xie L, Qin C, Zhang L. Intranasal Immunization with Recombinant HA and Mast Cell Activator C48/80 Elicits Protective Immunity against 2009 Pandemic H1N1 Influenza in Mice. PLoS ONE. 2011, 6(5): e19863.

流感病毒是严重威胁人类健康的一种病原体，它能导致流感疫情甚至世界大流行，流感在各个年龄阶段的人群中都可能爆发而引起急性发热性呼吸道疾病。流感病毒为单股负链RNA病毒，属于正黏液病毒科，呈球形或丝状，直径80-120nm。病毒外层为两种不同糖蛋白构成的辐射状突起，即血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。根据HA和NA抗原的不同,又可分为许多亚型，H可分为16个亚型，N有9个亚型(N1～N9)。H3N2亚型流感病毒1968年最早出现于香港，后传播到日本、美国等地，引发了一场流感世界大流行，致死人数达到近100万人。此后，虽未再次引起世界大流行，但散发流行至今。近年来，世界范围的流感流行病学监控和调查分析显示，该亚型流感病毒在全球仍是流行优势株，仅1968-1992年间我国发生的10次流感小流行中就有7次都是由H3N2流感病毒所引起，并且在1998年和2002年我国也都发生了较大范围的H3N2流感流行，其中北京市1998年11-12月的人群总发病率高达10%，总发病人数达到了100万以上。

病毒株为A/Brisbane/10/07 (H3N2)，雪貂经轻度麻醉后滴鼻感染H3N2病毒。实验的观察期为5天。皮下植入体温芯片用于监测体温、体重变化。每日观察雪貂临床症变化，在感染后第5天安乐动物，取组织样本用于监测病毒复制动力曲线和动物感染后组织炎症反应检查。

1.鲍琳琳，占玲俊，秦川等.雪貂感染流感病毒H3N2动物模型的建立[J]，中国比较医学杂志,2011,21(8):5-9.

2013 年3 月31 日，依据《国际卫生条例（2005）》，中国政府报告上海和安徽发现3 例人感染新型甲型H7N9 禽流感病毒（以下简称H7N9）病例。在随后的几个月内，以华东地区为代表的我国多个省市陆续确诊并报道多例H7N9禽流感病毒感染人造成重症肺炎甚至死亡的病例，这是世界首次发现的新型重配H7N9禽流感病毒所致的人感染疫情，引起了全球广泛关注。 H7N9禽流感病毒是由H7 的HA 基因，N9 的NA 基因以及H9N2 病毒的6 个内部基因片段重配而成的新型病毒。对目前已公布了全基因组的若干H7N9禽流感患者分离株的序列分析结果显示，该病毒具有与之前其他亚型甲型流感病毒类似的遗传特征，包括对禽类低致病性，感染哺乳动物的能力增强，对金刚烷胺类抗病毒药物耐药，以及对神经氨酸酶抑制剂（如奥司他韦和扎那米韦）敏感。

病毒株为A/Anhui/1/2013 (H7N9)，雪貂经过轻度麻醉后滴鼻感染H7N9病毒。实验的观察期为14天。皮下植入体温芯片用于监测体温、体重变化。每日观察雪貂临床症变化，在感染后第5天处死动物，取组织样本用于监测病毒复制动力曲线和动物感染后组织炎症反应检查。

1.Xu L, Bao L, Deng W, Zhu H, Chen T, Lv Q, Li F, Yuan J, Xiang Z, Gao K, Xu Y, Huang L, Li Y, Liu J, Yao Y, Yu P, Yong W, Wei Q, Zhang L, Qin C. The mouse and ferret models for studying the novel avian-origin human influenza A (H7N9) virus. Virology Journal, 2013, 10:253. 2.Xu L, Bao L, Deng W, Dong L, Zhu H, Chen T, Lv Q, Li F, Yuan J, Xiang Z, Gao K, Xu Y, Huang L, Li Y, Liu J, Yao Y, Yu P, Li X, Huang W, Zhao X, Lan Y, Guo J, Yong W, Wei Q, Chen H, Zhang L, Qin C. The Novel Avian-Origin Human A (H7N9) Influenza Virus Could be Transmitted between Ferrets via Respiratory Droplets. Journal of Infectious Disease. 2014, 15; 209(4):551-6. 3.邓巍，许黎黎，鲍琳琳，朱华，陈霆，吕琦，李枫棣，袁静，向志光，高凯，徐艳峰，黄澜，李彦红，刘江宁，姚艳丰，于品，秦川.雪貂感染H7N9禽流感动物模型的建立[J].中国比较医学杂志, 2014, 24(1):68-71. 4.邓巍，许黎黎，鲍琳琳，朱华，陈霆，李枫棣，吕琦，袁静，向志光，高凯，徐艳峰，黄澜，李彦红，姚艳丰，于品，雍卫东，张连峰，秦川.H7N9禽流感病毒对雪貂的致病性及传播力研究[J].中国实验动物学报, 2014,22(1):32-37. 5.邓巍，李彦红，朱华，徐艳峰，陈霆，李枫棣，鲍琳琳，许黎黎，黄澜，吕琦，袁静，向志光，高凯，姚艳丰，于品，秦川.小鼠和雪貂感染H7N9禽流感病毒后的动态病理学变化[J].中国实验动物学报, 2014,22(1):13-17.

禽流感依据其对禽类的致病能力大小可以分为三个程度：高致病性、低致病性和无致病性。其中高致病性禽流感包括H5和H7 两个亚型。但并非所有的H5 和H7 都是强毒株。人高致病性禽流感是由高致病性禽流感病毒某些亚型的毒株引起的人急性呼吸道传染病。由H5N1亚型禽流感引起的症状较重，病死率高。1997年，香港一名3岁的男童因感染禽流感而死亡，在随后的几个月中，共有18个人感染禽流感病毒，其中6人死亡。之后相继有 H9N2、H7N7 亚型禽流感感染人类和 H5N1 亚型再次感染人类的报道,禽流感与人禽流感的关系开始倍受关注。2003年12 月中旬开始至今,朝鲜、越南、泰国、韩国、日本和中国等10 余个亚洲国家先后暴发H5N1高致病性禽流感疫情, 并且再越南、泰国、柬埔寨以及印度尼西亚出现了人感染高致病性禽流感病毒病例。据最新资料报道，世界卫生组织已证实泰国、越南和柬埔寨以及印度尼西亚自2004年1月起截至到2005年8月20日共有112人感染，其中导致57人死亡。而H7N7感染引起的症状相对较轻仅以眼角结膜炎和轻微的呼吸道症状为主。追溯历史，有报道的第一次禽流感感染人的事件发生在上个世纪的70-80年代的几例以自限性结膜炎为临床特征的H7N7感染病患。最近的一次发生在2003年荷兰一家农场有近80名工人及家属被确诊为H7N7感染,他们以眼部感染和呼吸道症状为主,其中一名兽医死亡,他的家人未接触病禽但也被证实H7N7感染。这起事件具有有限的人传人的证据。

病毒株为H5N1 A/ Vietnam/1203/2004，小鼠经过轻度麻醉后滴鼻感染病毒。小鼠感染后观察14天，监测体重变化率。感染后分时间段处死小鼠，每个时间点收集相同数量小鼠肺、脾、脑、心等组织，进行病毒滴度测定和组织病理学检查。

1.Bao L, Xu L, Zhu H, Deng W, Chen T, Lv Q, Li F, Yuan J, Xu Y, Huang L, Li Y, Liu J, Yao Y, Yu P, Chen H, Qin C. Transmission of H7N9 influenza virus in mice by different infective routes. Virology Journal, 2014, 11:185 2.Xu L, Bao L, Yuan J, Li F, Lv Q, Deng W, Xu Y, Yao Y, Yu P, Chen H, Yuen KY, Qin C. Antigenicity and transmissibility of a new clade 2.3.2.1 avian influenza H5N1 virus. Journal of General Virology. 2013, 94, 2616–2626

2013 年3 月31 日，依据《国际卫生条例（2005）》，中国政府报告上海和安徽发现3 例人感染新型甲型H7N9 禽流感病毒（以下简称H7N9）病例。在随后的几个月内，以华东地区为代表的我国多个省市陆续确诊并报道多例H7N9禽流感病毒感染人造成重症肺炎甚至死亡的病例，这是世界首次发现的新型重配H7N9禽流感病毒所致的人感染疫情，引起了全球广泛关注。 H7N9禽流感病毒是由H7 的HA 基因，N9 的NA 基因以及H9N2 病毒的6 个内部基因片段重配而成的新型病毒。对目前已公布了全基因组的若干H7N9禽流感患者分离株的序列分析结果显示，该病毒具有与之前其他亚型甲型流感病毒类似的遗传特征，包括对禽类低致病性，感染哺乳动物的能力增强，对金刚烷胺类抗病毒药物耐药，以及对神经氨酸酶抑制剂（如奥司他韦和扎那米韦）敏感。

病毒株为A/Anhui/1/2013 (H7N9)，BALB/c小鼠经过轻度麻醉后滴鼻感染病毒。小鼠感染后观察14天，监测存活率及体重变化率。感染后分时间段安乐小鼠，每个时间点收集相同数量小鼠肺、脾、脑、心等组织，进行病毒滴度测定和组织病理学检查。

1.Xu L, Bao L, Deng W, Zhu H, Chen T, Lv Q, Li F, Yuan J, Xiang Z, Gao K, Xu Y, Huang L, Li Y, Liu J, Yao Y, Yu P, Yong W, Wei Q, Zhang L, Qin C. The mouse and ferret models for studying the novel avian-origin human influenza A (H7N9) virus. Virology Journal, 2013, 10:253. 2.Bao L, Xu L, Zhu H, Deng W, Chen T, Lv Q, Li F, Yuan J, Xu Y, Huang L, Li Y, Liu J, Yao Y, Yu P, Chen H, Qin C. Transmission of H7N9 influenza virus in mice by different infective routes. Virology Journal, 2014, 11:185. 3.Xu L, Bao L, Li F, Gu S, Lv Q, Yuan J, Xu Y, Zhu H, Deng W, Li Y, Yao Y, Yu P, Gao Z, Qin C. Combinations of Oseltamivir and Fibrates Prolong the Mean Survival Time of Mice Infected with the Lethal H7N9 Influenza Virus. J Gen Virol. 2015, 96:46-51. 4.朱华，许黎黎，鲍琳琳，邓巍，陈霆，吕琦，李枫棣，袁静，徐艳峰，黄澜，李彦红，刘江宁，姚艳丰，于品，雍伟东，魏强，张连峰，秦川.H7N9禽流感病毒小鼠感染动物模型的建立[J].中国实验动物学报, 2014,22(1):18-21. 5.李枫棣，鲍琳琳，朱华，邓巍，许黎黎，吕琦，秦川.H7N9禽流感病毒在小鼠体内的适应性研究[J].中国比较医学杂志.2014, 24(1):56-58. 6.陈霆，鲍琳琳，朱华，邓巍，许黎黎，吕琦，李枫棣，秦川.禽流感病毒H7N9对小鼠的致病性和传播性研究[J].中国比较医学杂志, 2014,24(1):52-55. 7.鲍琳琳，朱华，邓巍，许黎黎，陈霆，吕琦，李枫棣，袁静，徐艳峰，黄澜，李彦红，刘江宁，姚艳丰，于品，秦川，索勋.新型H7N9禽流感病毒在同居小鼠中传播途径的研究[J].中国实验动物学报, 2014,22(1):27-31. 8.邓巍，李彦红，朱华，徐艳峰，陈霆，李枫棣，鲍琳琳，许黎黎，黄澜，吕琦，袁静，向志光，高凯，姚艳丰，于品，秦川.小鼠和雪貂感染H7N9禽流感病毒后的动态病理学变化[J].中国实验动物学报, 2014,22(1):13-17. 9.吕琦，鲍琳琳，许黎黎，邓巍，李枫棣，袁静，于品，姚艳丰，秦川.季节性流感疫苗免疫血清与H7N9禽流感病毒交叉反应研究[J].中国比较医学杂志, 2014,24(1):59-61. 10.吕琦，鲍琳琳，许黎黎，邓巍，李枫棣，袁静，于品，姚艳丰，秦川.季节性流感疫苗对小鼠感染H7N9禽流感病毒的保护效力研究[J].中国实验动物学报, 2014.22(1):44-47.

临床症状主要表现为记忆、认知、理解、判断推理能力以及社会适应能力、个人生活能力慢性进行性减退，最终发展为严重痴呆。

利用PrP-hAPPK595N/M596L和PrP-hPS1δE9双转基因培育而成。背景品系是C57BL/6J，启动子为Mouse prion protein（PrP）, 靶基因信息：Human presenilin 1 and APP。

临床症状主要表现为震颤、肌强直、运动减少、姿势及步态不稳等。

构建带有神经特异性启动子的质粒PDGF-h-α-synuclein-A53T，用显微注射法将线性化转基因质粒注射到C57BL/6J小鼠受精卵中，以C57BL/6J小鼠作假孕受体。

高宁，全雄志，陈炜，李万波，刘鹏，冯娟，张连峰，秦川. 帕金森病α-Synuclein转基因小鼠模型的建立[J]. 中国比较医学杂志. 2008. 18(5).

临床症状主要表现为震颤、肌强直、运动减少、姿势及步态不稳等。

构建带有神经特异性启动子的质粒PDGF-h-α-synuclein，用显微注射法将线性化转基因质粒注射到C57BL/6J小鼠受精卵中，以C57BL/6J小鼠作假孕受体。

高宁，全雄志，陈炜，李万波，刘鹏，冯娟，张连峰，秦川. 帕金森病α-Synuclein转基因小鼠模型的建立[J]. 中国比较医学杂志. 2008. 18(5).

肿瘤（tumour）是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物（neogrowth），因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物（neoplasm）。根据新生物的细胞特性及对机体的危害性程度，又将肿瘤分为良性肿瘤和恶性肿瘤两大类，而癌症即为恶性肿瘤的总称。

C57BL/6J小鼠53BP1基因的外显子被PGK-neor 基因替换，构建基因打靶载体，电转入ES细胞获得经基因修饰的打靶干细胞克隆，显微注射ES细胞到C57小鼠的受精卵中，移植到假孕小鼠，获得崁合体后代小鼠，再和C57小鼠杂交，最终获得可以传代的53BP1-/-小鼠（图1）。 图1 53BP1-/-小鼠的建立 A. 53BP1基因打靶载体构建；B，EcoRI消化基因组DNA的southern blot检测；C，PCR鉴定基因型。

1．Ward IM, Minn K, van Deursen J, Chen J. p53 Binding protein 53BP1 is required for DNA damage responses and tumor suppression in mice. Mol Cell Biol. 2003 Apr;23(7):2556-63.

动脉粥样硬化（Atherosclerosis）是一组动脉硬化的血管病中常见的最重要的一种，其特点是受累动脉病变从内膜开始。一般先有脂质和复合糖类积聚、出血及血栓形成，纤维组织增生及钙质沉着，并有动脉中层的逐渐蜕变和钙化，病变常累及弹性及大中等肌性动脉，一旦发展到足以阻塞动脉腔，则该动脉所供应的组织或器官将缺血或坏死。由于在动脉内膜积聚的脂质外观呈黄色粥样，因此称为动脉粥样硬化。

利用CRISPR/Cas9技术建立的ApoE 基因敲除大鼠，用显微注射法将Cas9 mRNA (20 ng/μl)和ApoE靶点sgRNAs (10 ng/μl)注射到SD大鼠的受精卵中，用SD大鼠作假孕受体，制备基因敲除大鼠(图1)。 图1. ApoE 基因敲除大鼠的建立和鉴定 a.敲除大鼠PCR鉴定；b.敲除大鼠PCR产物利用T7EN1实验分析靶点基因修饰情况；c.敲除大鼠ApoE核酸序列缺失；d.敲除大鼠与野生大鼠基础血生化检测。

女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌（breast cancer）是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%。乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。

1.表达载体构建：构建chicken β-actin-luc-NEO载体CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。 2. 66c14-Luc荧光细胞系的获得：采用脂质体2000转染小鼠乳腺癌细胞66c14细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达luciferase的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。 3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取0.1 mL细胞悬液接种于BALB／c小鼠（5周龄，体重15-18 g）右侧第二对乳腺脂肪垫内。1×106个细胞/只，接种后每隔一周，采用活体荧光影像系统摄像动态观察肿瘤的生长和转移情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5 mg/10 g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放人活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4．0软件进行分析。

1. 李小颖,马元武,张连峰.三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移的比较[J].中国比较医学杂志, 2013, 23(4):1-4.

阿尔茨海默症（Alzheimer disease，AD）是一种常见的中枢神经系统退行性变性疾病，其临床表现以退行性大脑认知，识别功能障碍为特征，有明显记忆力降低并伴随个性和行为的改变。AD约占全部痴呆病人的70%，位于心脏病、癌症和中风之后的第四位死亡性疾病，目前已成为发达国家主要社会问题之一。

PrP-hAPP695 K595N/M596L、PrP-hPS1dE9和PDGF-TAU转基因载体由本实验室构建，用显微注射法将线性化的转基因载体注射到SD大鼠的受精卵中，用SD大鼠作假孕受体，制备转基因大鼠。转基因大鼠在出生7 d，组织用碱裂解法提取基因组DNA。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。Western blot检测转基因大鼠脑组织中人APP、PS1和TAU蛋白的表达。（图1） 图1 APPswe/PS1dE9/TAU转基因大鼠的建立。A: APPswe、PS1dE9、TAU转基因表达载体;B：转基因大鼠的PCR鉴定，P,阳性对照；N，阴性对照；H，H2O；M，DL2000 DNA marker；泳道1-8为转基因大鼠鼠尾DNA，1、4、7为阳性首建鼠。C：western blot 检测人APPswe、PS1dE9、TAU蛋白在转基因大鼠脑组织中的表达。WT，同窝阴性对照鼠；33#、34#为阳性首建鼠。GAPDH 为加样一致性对照。

1. 张丽，陈炜，张旭，孙彩显，张连峰。APPswe/PS1dE9/TAU三转基因阿尔兹海默病大鼠模型的建立。中国比较医学杂志，2014, 24（3）:61-66.