胶质母细胞瘤（ＧＢＭ）是最常见的颅内原发肿瘤，致死率高、预后差，急需探索新的治疗手段。胶质母细胞瘤的恶性增殖往往伴随着血管的病变及增生。血管主要由基底膜内的内皮细胞和基底膜外的壁细胞（血管平滑肌细胞和周细胞）组成。壁细胞作为血脑屏障的重要组成部分，除了维护生理状态下血管的结构与稳态，还在调节功能性血流量、启动新生血管形成和促进血管成熟中发挥重要作用。胶质瘤干细胞能够生成壁细胞来促进肿瘤增殖；壁细胞作为肿瘤微环境中的一部分，与肿瘤干细胞的相互转分化促进了肿瘤的转移与定植；壁细胞在胶质瘤中参与形成血肿瘤屏障，过滤了大多数抗癌药物和免疫细胞对肿瘤的浸润，靶向敲除后能够促进化疗药物的浸润。

1.1 Tamoxifen诱导条件性敲除PDGFRβ-Cre+/-: Rosa26-tdTomato+/-小鼠的构建 将壁细胞特异性PDGFRβ-Cre+/+小鼠（购自美国杰克逊实验室，stock no. 030201）与Rosa26-tdTomato+/+小鼠（购自美国杰克逊实验室，stock no. 007914）杂交，产生Tamoxifen诱导下壁细胞特异性表达tdTomato红色荧光蛋白的PDGFRβ-Cre+/-: Rosa26-tdTomato+/-小鼠。在无Tamoxifen诱导的情况下，PDGFRβ-CreERT2在细胞质内处于无活性状态；当Tamoxifen诱导后，Tamoxifen的代谢产物4-OHT（雌激素类似物）与ERT结合，可使PDGFRβ-CreERT2进核发挥Cre重组酶活性，切掉LoxP位点之间的终止位点，诱导tdTomato红色荧光蛋白表达。Tamoxifen诱导Cre酶剪切LoxP的原理如图1所示。 图1 Tamoxifen诱导Cre酶剪切LoxP表达tdTomato荧光原理 1.2玻璃颅窗动物模型的手术制备 采用8-12周的PDGFRβ-Cre+/-: Rosa26-tdTomato+/-小鼠进行实验，用异氟烷气体麻醉诱导，术中麻醉采用腹腔注射氯胺酮、甲苯嗪和盐酸苯甲酸盐（注射剂量0.0375/0.0375/0.000125 mg/g）麻醉小鼠。皮下注射青霉素（40 mg/kg）减少感染。小鼠麻醉完全后，使用脱毛膏除净小鼠头部的毛发。随后将小鼠固定在立体定位仪上。使用眼膏以避免小鼠眼部脱水和刺激去头皮，使用颅钻轻轻磨去颅骨，用镊子挑去硬脑膜（图2-A）。用直径6 mm的透明颅窗覆盖大脑，并用牙科水泥乙基氰基丙烯酸酯液体（以下简称牙科水泥）密封（图2-B）。术后皮下注射4针镇痛药：每隔6小时注射一剂美洛昔康注射液（0.1 mg/kg）。 注：A：磨去小鼠颅骨的效果图；B：借助牙科水泥使用固定环与玻璃圆片替代小鼠的颅骨。 图2 小鼠的长期颅窗制备 1.3 双光子显微镜观察 图像采集使用徕卡TCS SP8 DIVE共聚焦显微镜，配备变色龙超激光系统（680-1300 nm）和25×水浸物镜（数值孔径0.95，徕卡）。单幅图像采集深度为0-300 μm, z-间隔为3 μm。FITC-dextran与TdTomato的激发波长为975 nm,为了显示脑血管，通过小鼠尾静脉注射10 mg/ml的FITC-dextran（2×106分子量，绿色，Sigma-Aldrich）0.2 ml。TdTomato的发射波长为570-640 nm，FITC-dextran的发射波长为500-550 nm。用异氟醚麻醉小鼠，以0.8% ~ 2.0%（根据小鼠身体状况尽可能低的流量）的恒定流量（1 ml/min）维持。激光功率也限制在最低百分比，尽量避免光毒性。  

马铖延，杨星九，史旭东，等．双光子显微镜技术下胶质瘤-壁细胞在体多荧光示踪小鼠模型的建立及应用［J］．中国实验动物学报，2024，32（6）：702-711．

胶质母细胞瘤（ＧＢＭ）是最常见的颅内原发肿瘤，致死率高、预后差，急需探索新的治疗手段。胶质母细胞瘤的恶性增殖往往伴随着血管的病变及增生。血管主要由基底膜内的内皮细胞和基底膜外的壁细胞（血管平滑肌细胞和周细胞）组成。壁细胞作为血脑屏障的重要组成部分，除了维护生理状态下血管的结构与稳态，还在调节功能性血流量、启动新生血管形成和促进血管成熟中发挥重要作用。胶质瘤干细胞能够生成壁细胞来促进肿瘤增殖；壁细胞作为肿瘤微环境中的一部分，与肿瘤干细胞的相互转分化促进了肿瘤的转移与定植；壁细胞在胶质瘤中参与形成血肿瘤屏障，过滤了大多数抗癌药物和免疫细胞对肿瘤的浸润，靶向敲除后能够促进化疗药物的浸润。

1.1玻璃颅窗动物模型的手术制备 采用8-12周的小鼠进行实验，用异氟烷气体麻醉诱导，术中麻醉采用腹腔注射氯胺酮、甲苯嗪和盐酸苯甲酸盐（注射剂量0.0375/0.0375/0.000125 mg/g）麻醉小鼠。皮下注射青霉素（40 mg/kg）减少感染。小鼠麻醉完全后，使用脱毛膏除净小鼠头部的毛发。随后将小鼠固定在立体定位仪上。使用眼膏以避免小鼠眼部脱水和刺激。剪去头皮，使用颅钻轻轻磨去颅骨，用镊子挑去硬脑膜（图1-A）。用直径6 mm的透明颅窗覆盖大脑，并用牙科水泥乙基氰基丙烯酸酯液体（以下简称牙科水泥）密封（图1-B）。术后皮下注射4针镇痛药：每隔6小时注射一剂美洛昔康注射液（0.1 mg/kg）。 1.2胶质瘤活体动物模型制备方法 制备使用玻璃颅窗替代颅骨的小鼠，4周后除去小鼠脑表的玻璃片与固定环，用PBS制备2500 个/ μl的浓度GL261-CFP细胞悬液，使用10 µl的汉密尔顿微量注射器和2 pt型针头，与水平面成60°的方向将2 µl含5×103 GL-261-CFP细胞的细胞悬液以0.5 mm/min的速度立体定向注射到小鼠脑内（图1-C），进针深度1.5 mm，停留2分钟后，退至1 mm深度，以0.5 μl/min注射2 μl 肿瘤细胞悬液，注射完停针5 min后缓慢退针。注射点位于矢状窦外侧约1 mm，前囟前方约2 mm，脑实质内深度1 mm（图1-D）。注射完毕后停留5分钟后，以1 mm/min的速度退针。使用生理盐水清洁脑表，使用牙科水泥粘住玻璃圆片与固定环。术后皮下注射4针镇痛药：每隔6小时注射一剂美洛昔康注射液（0.1 mg/kg）。使用CFP慢病毒感染的GL261细胞用500 μg/ml G418筛选至CFP稳定表达，GL261-CFP在荧光显微镜下发出青蓝色荧光（图1-E）。 1.3 双光子显微镜观察 图像采集使用徕卡TCS SP8 DIVE共聚焦显微镜，配备变色龙超激光系统（680-1300 nm）和25×水浸物镜（数值孔径0.95，徕卡）。单幅图像采集深度为0-300 μm, z-间隔为3 μm。为了显示脑血管，通过小鼠尾静脉注射10 mg/ml的FITC-dextran（2×106分子量，绿色，Sigma-Aldrich）0.2 ml。FITC-dextran激发波长为975 nm, GL261-CFP激发波长为860 nm，1024×1024像素。FITC-dextran的发射波长为500-550 nm, GL261-CFP肿瘤细胞的发射波长为450-490 nm。用异氟醚麻醉小鼠，以0.8% ~ 2.0%（根据小鼠身体状况尽可能低的流量）的恒定流量（1 ml/min）维持。激光功率也限制在最低百分比，尽量避免光毒性。

马铖延，杨星九，史旭东，等．双光子显微镜技术下胶质瘤-壁细胞在体多荧光示踪小鼠模型的建立及应用［J］．中国实验动物学报，2024，32（6）：702-711．

microRNAs（miRNAs）通过抑制靶基因的表达，在机体许多生理和病理过程中发挥重要作用。miR-146a是一种在脂多糖（LPS）刺激和病毒感染下诱导的miRNA，在类风湿性关节炎、舍格伦综合征和银屑病等免疫性疾病患者中也有高表达。miR-146a充当负反馈调节剂，并通过靶向各种先天细胞（如单核细胞、肺上皮肺泡细胞和小胶质细胞）中的IRAK 1/2和TRAF 6来抑制Toll样受体信号传导途径。这些研究表明，miR-146a在炎症和过继性免疫应答期间起着强大的“刹车”作用。

包含广泛表达启动子和绿色荧光报告基因的慢病毒载体（FUGW-miR146a)注射到BALB/c小鼠的受精卵中，待小鼠出生后，通过RT-PCR的办法进行筛选，获得高表达miR146a的转基因小鼠。

Li Z, Zhang S, Wan Y, Cai M, Wang W, Zhu Y, Li Z, Hu Y, Wang H, Chen H, Cui L, Zhang X, Zhang J*, He W*. MicroRNA-146a Overexpression Impairs the Positive Selection During T Cell Development. Front Immunol. 2018 Jan 23;8:2006. doi: 10.3389/fimmu.2017.02006. PMID: 29410664; PMCID: PMC5787067.

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。包括单纯性脂肪肝（SFL）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）及其相关肝硬化。随着肥胖及其相关代谢综合征全球化的流行趋势，非酒精性脂肪性肝病现已成为欧美等发达国家和我国富裕地区慢性肝病的重要病因。NAFLD可直接导致失代偿期肝硬化、肝细胞癌和移植肝复发外，还可影响其他慢性肝病的进展，并参与2型糖尿病和动脉粥样硬化的发病。代谢综合征相关恶性肿瘤、动脉硬化性心脑血管疾病以及肝硬化为影响非酒精性脂肪性肝病患者生活质量和预期寿命的重要因素。 高甘油三酯血症是一种异族性甘油三酯蛋白合成或降解障碍。它是冠心病、高血压、糖尿病等代谢综合征相关疾病发生的重要危险因素，积极控制高甘油三酯是代谢综合征相关疾病一级预防的重要环节。

为了构建ApoA5基因缺陷的仓鼠模型，我们设计了针对仓鼠Apoa5基因第2外显子(NW_024429203)的sgRNA。通过显微注射受精卵，然后移植到代孕鼠的输卵管中。测序数据显示Apoa5基因缺失131个核苷酸。 基因型鉴定：引物为ApoA5 F: GTGCAGTCTGAGTTCCAGGC, ApoA5 R: TGCTTTGCAGCCATGTAGGG，以基因组DNA为模板，野生型（WT）和纯合子（ApoA5-/-）仓鼠PCR产物电泳分别显示378 bp和247 bp的条带，而杂合子敲除（ApoA5+/-）动物则同时显示了这两个条带。

（1）Guo J, Miao G, Zhang W, Shi H, Lai P, Xu Y, Zhang L, Chen G, Han Y, Zhao Y, Liu G, Zhang L, Wang Y, Huang W, Xian X. Depletion of ApoA5 aggravates spontaneous and diet-induced nonalcoholic fatty liver disease by reducing hepatic NR1D1 in hamsters. Theranostics. 2024 Feb 24;14(5):2036-2057. doi: 10.7150/thno.91084. eCollection 2024. PMID: 38505614

脂代谢紊乱是指体内脂肪合成、分解或转运过程出现异常，常导致高脂血症、肥胖或脂肪肝等健康问题。其原因通常包括不良饮食、缺乏运动、遗传因素和某些疾病。预防和改善脂代谢紊乱通常需通过调整饮食、增加锻炼和必要时进行药物治疗。 非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。包括单纯性脂肪肝（SFL）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）及其相关肝硬化。随着肥胖及其相关代谢综合征全球化的流行趋势，非酒精性脂肪性肝病现已成为欧美等发达国家和我国富裕地区慢性肝病的重要病因。NAFLD可直接导致失代偿期肝硬化、肝细胞癌和移植肝复发外，还可影响其他慢性肝病的进展，并参与2型糖尿病和动脉粥样硬化的发病。代谢综合征相关恶性肿瘤、动脉硬化性心脑血管疾病以及肝硬化为影响非酒精性脂肪性肝病患者生活质量和预期寿命的重要因素。

本模型为基因工程动物模型。

脂代谢紊乱是指体内脂肪合成、分解或转运过程出现异常，常导致高脂血症、肥胖或脂肪肝等健康问题。其原因通常包括不良饮食、缺乏运动、遗传因素和某些疾病。预防和改善脂代谢紊乱通常需通过调整饮食、增加锻炼和必要时进行药物治疗。 动脉粥样硬化是一种慢性疾病，主要表现为动脉壁内脂肪、胆固醇和其他物质的积聚，形成斑块，导致血管腔变窄、硬化，进而影响血流。该病通常与高血压、高胆固醇、吸烟和糖尿病等风险因素相关，可能引发心脏病、中风和其他严重的心血管疾病。预防和治疗包括健康饮食、规律锻炼、控制体重及必要时使用药物。

低密度脂蛋白受体基因敲除（LDLR-/-）仓鼠和卵磷脂酰基转基酶基因敲除（LCAT-/-）仓鼠在我们的实验室通过CRISPR/Cas9基因编辑系统制备，通过杂交获得LDLR-/-和LCAT-/-双基因敲除仓鼠模型。相关基因信息如下： LDLR，low density lipoprotein receptor [ Mesocricetus auratus (golden hamster) ]，Gene ID: 101828208, updated on 8-Mar-2024。 Lcat lecithin-cholesterol acyltransferase [ Mesocricetus auratus (golden hamster) ]，Gene ID: 101823034, updated on 8-Mar-2024。

（1）Lin X, Zhang W, Yang C, Ma P, He K, Chen G, Tao Y, Yan H, Yang Z, Zhang L, Fan J, Cui Q, Huang W, Liu G, Xian X, Wang Y. Depleting LCAT Aggravates Atherosclerosis in LDLR-deficient Hamster with Reduced LDL-Cholesterol Level. J Adv Res. 2024 Sep;63:187-194. doi: 10.1016/j.jare.2023.10.016. Epub 2023 Nov 2. PMID: 37923248 （2）Guo X, Gao M, Wang Y, Lin X, Yang L, Cong N, An X, Wang F, Qu K, Yu L, Wang Y, Wang J, Zhu H, Xian X, Liu G. LDL Receptor Gene-ablated Hamsters: A Rodent Model of Familial Hypercholesterolemia With Dominant Inheritance and Diet-induced Coronary Atherosclerosis. EBioMedicine. 2018 Jan;27:214-224. doi: 10.1016/j.ebiom.2017.12.013. Epub 2017 Dec 15. PMID: 29289533 （3）Dong Z, Shi H, Zhao M, Zhang X, Huang W, Wang Y, Zheng L, Xian X, Liu G. Loss of LCAT activity in the golden Syrian hamster elicits pro-atherogenic dyslipidemia and enhanced atherosclerosis. Metabolism. 2018 Jun;83:245-255. doi: 10.1016/j.metabol. 2018.03.003. Epub 2018 Mar 9. PMID: 29526535

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。包括单纯性脂肪肝（SFL）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）及其相关肝硬化。随着肥胖及其相关代谢综合征全球化的流行趋势，非酒精性脂肪性肝病现已成为欧美等发达国家和我国富裕地区慢性肝病的重要病因。NAFLD可直接导致失代偿期肝硬化、肝细胞癌和移植肝复发外，还可影响其他慢性肝病的进展，并参与2型糖尿病和动脉粥样硬化的发病。代谢综合征相关恶性肿瘤、动脉硬化性心脑血管疾病以及肝硬化为影响非酒精性脂肪性肝病患者生活质量和预期寿命的重要因素。

2型糖尿病（T2DM）是一种胰岛素使用不足或效率降低导致的慢性疾病，常见于成年人，也叫成人发病型糖尿病。这种疾病是由遗传，环境因素如生活方式，营养过剩，体力活动不足等因素共同导致。往往初期症状轻微，许多人直到出现并发症或在常规体检中才被发现。

1 实验材料 实验动物  选择无特定病原体（SPF）级C57BL/6J小鼠，雄性8-10周龄，体质量20-25g，对照组和糖尿病组各12只，单笼饲养于SPF 级屏障系统中，温度( 22±2)℃，湿度50%～60%，12h循环照明，小鼠自由摄取食、水。 1.2 人类粪便样本 受试者拟参与样本采集和信息采集一次，排除消化系统其它器质性疾病、消化道进行过手术者，排除有酗酒史、糖尿病、癌症、肾衰、中风等其它影响肠道菌群的疾病者，排除取样前4周服用益生菌、抗生素、非甾体类药物者。 将BMI值在18.5-23.9 kg/m2范围内，生化指标正常的健康志愿者，作为对照组；将空腹血糖≥7.0 mmol/L，或葡萄糖负荷试验2小时血糖≥11.1 mmol/L，未用降糖药物的糖尿病受试者作为糖尿病组。采集受试者新鲜粪便，按照使用说明书用粪便微生物基因组保护液套装采集后存储于-80℃，离心取上清液作为粪便移植液。 2 实验方法 2.1 动物模型制备 将健康对照组和非酒精性脂肪肝组人类粪便移植液，以400ul/天，连续三天经口灌胃，接种无菌小鼠，得到菌群移植小鼠。移植周期为10周，饲养在隔离环境内。 2.2标本采集及处理 实验期间每周称量小鼠体重，每周记录进食量、进水量，每2周取粪便进行16SRNA测定。每两周测一次空腹血糖，第2周、第4周、第6周测小鼠糖耐量，在实验结束后，小鼠称重，异氟烷吸入性麻醉，下腔静脉采血至死亡。室温静置30 min后，3,000 rpm，4℃离心15 min，分离血清，测定血清葡萄糖、胰岛素。胰腺和肾脏部分组织进行福尔马林固定，后续进行HE染色；剩余部分胰腺和肾脏，-80℃低温保存。

[1] Khalili L, Alipour B, Asghari Jafarabadi M, et al. Probiotic assisted weight management as a main factor for glycemic control in patients with type 2 diabetes: a randomized controlled trial [J]. Diabetol Metab Syndr, 2019, 11: 5. [2] Saeedi P, Petersohn I, Salpea P, et al. Global and regional diabetes prevalence estimates for 2019 and projections for 2030 and 2045: Results from the International Diabetes Federation Diabetes Atlas, 9(th) edition [J]. Diabetes Res Clin Pract, 2019, 157: 107843. [3] Constantino M I, Molyneaux L, Limacher-Gisler F, et al. Long-term complications and mortality in young-onset diabetes: type 2 diabetes is more hazardous and lethal than type 1 diabetes [J]. Diabetes Care, 2013, 36(12): 3863-3869.

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是代谢综合征在肝脏的表现形式，与肥胖 、胰岛素抵抗(IR) 、空腹高血糖症、血脂异常、脂肪因子变异等机体代谢异常明显相关，是目前慢性肝病最常见的病因。NAFLD是以过量的脂质在肝细胞内堆积为特征的连续疾病谱，可由单纯的肝脂肪性变性发展为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，严重时可发展为肝纤维化和肝硬化 ，NASH一旦合并肝纤维化或肝硬化则可进一步增加肝细胞癌(HCC)的发生风险。 到目前为止，NAFLD的确切发病机制尚不清楚，也缺乏特异性的治疗措施，因此针对发病机制和潜在治疗药物的研究是目前该领域的热点。动物模型可通过模拟不同的病因以及NAFLD每个阶段的组织病理学和病理生理学改变，为了解NAFLD发病机制和进展提供关键性的指导。

实验材料 1.1实验动物 选择无特定病原体（SPF）级C57BL/6J小鼠，8-10周龄，体质量20-25g，按体重随机分组，对照组14只，非酒精性脂肪肝组11只，5只/盒饲养于SPF级屏障系统中，温度( 22±2) ℃，湿度50%～60%，12 h 循环照明，小鼠自由摄取食、水。 1.2人类粪便样本 受试者拟参与样本采集和信息采集一次，排除消化系统其它器质性疾病、消化道进行过手术者，排除有酗酒史、糖尿病、癌症、肾衰、中风等其它影响肠道菌群的疾病者，排除取样前4周服用益生菌、抗生素、非甾体类药物者。 将BMI值在18.5-23.9 kg/m2范围内，生化指标正常的健康志愿者，作为对照组；将非酒精性脂肪肝患者作为非酒精性脂肪肝组。采集受试者新鲜粪便，按照使用说明书用粪便微生物基因组保护液套装采集后存储于-80℃，离心取上清液作为粪便移植液。 2.实验方法 2.1动物模型制备 将健康对照组和非酒精性脂肪肝组人类粪便移植液，以400ul/天，连续三天经口灌胃，接种无菌小鼠，得到菌群移植小鼠。移植周期为10周，饲养在隔离环境内。 2.2标本采集及处理 实验期间每周称量小鼠体重，每周记录进食量、进水量，每2周取粪便进行16SRNA测定。实验结束后，对照组和非酒精性脂肪肝组小鼠脱毛照B超。三溴乙醇腹腔注射麻醉，腹主静脉采血至死亡。全血EDTA抗凝，室温静置30 min后，3,000 rpm，4°C离心15 min分离血清，-80℃冰箱冻存。 解剖小鼠腹腔，PBS心脏灌流，取心、肝、脾、肺、肾，滤纸吸干后称重、拍照。脾脏进行免疫学检测，心、肝、肺、肾部分组织福尔马林固定，后续石蜡包埋进行HE染色；剩余部分提取蛋白和RNA，-80℃冰箱冻存进行后续检测。部分肝脏组织冰冻切片包埋剂包埋并切片，进行病理染色。

[1] Flessa CM, Nasiri-Ansari N, Kyrou I, Leca BM, Lianou M, Chatzigeorgiou A,Kaltsas G, Kassi E, Randeva HS. Genetic and Diet-Induced Animal Models for Non-Alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD) Research. Int J Mol Sci. 2022 Dec 13;23(24):15791. [2] Denk, H.; Abuja, P.M.; Zatloukal, K. Animal models of NAFLD from the pathologist’s point of view. Biochim. Biophys. Acta Mol.Basis Dis. 2019, 1865, 929–942. [3] Santhekadur, P.K.; Kumar, D.P.; Sanyal, A.J. Preclinical models of non-alcoholic fatty liver disease. J. Hepatol. 2018, 68, 230–237.

肥胖症(obesity)是一种由多种因素引起的慢性代谢性疾病,以体内脂肪细胞的体积和细胞数增加,从而导致体脂占体重的百分比异常增高并在某些局部过多沉积脂肪为特点,早在1948年,WHO已将肥胖症列入疾病分类名单,2000年,WHO将吸烟,肥胖和艾滋病列为人类的三大杀手。

1.实验材料 1.1实验动物 选择无特定病原体（SPF）级C57BL/6J小鼠，8-10周龄，体质量20-25g，按体重随机分组，对照组14只，肥胖组12只，5只/盒饲养于SPF 级屏障系统中，温度( 22±2) ℃，湿度50%～60%，12 h循环照明，小鼠自由摄取食、水。 1.2人类粪便样本 受试者拟参与样本采集和信息采集一次，排除消化系统其它器质性疾病、消化道进行过手术者，排除有酗酒史、糖尿病、癌症、肾衰、中风等其它影响肠道菌群的疾病者，排除取样前4周服用益生菌、抗生素、非甾体类药物者。 将BMI值在18.5-23.9 kg/m2范围内，生化指标正常的健康志愿者，作为对照组；将BMI值≥28.0kg/m2的肥胖者作为肥胖组。采集受试者新鲜粪便，按照使用说明书用粪便微生物基因组保护液套装采集后存储于-80℃，离心取上清液作为粪便移植液。 2.实验方法 2.1动物模型制备 将健康对照组和肥胖组人类粪便移植液，以400ul/天，连续三天经口灌胃，接种无菌小鼠，得到菌群移植小鼠。移植周期为10周，饲养在隔离环境内。 2.2标本采集及处理 实验期间每周称量小鼠体重，每周记录进食量、进水量，每2周取粪便进行16SRNA测定。实验结束后，对照组和肥胖组小鼠量体长、腹围。三溴乙醇腹腔注射麻醉，腹主静脉采血至死亡。全血EDTA抗凝，室温静置30 min后，3,000 rpm，4°C离心15 min分离血清，-80℃冰箱冻存。 解剖小鼠腹腔，PBS心脏灌流，取心、肝、脾、肺、肾和脂肪（睾丸、肾周围、腹股沟和背部脂肪），滤纸吸干后称重、拍照。脾脏进行免疫学检测，心、肝、肺、肾部分组织福尔马林固定，后续石蜡包埋进行HE染色；剩余部分提取蛋白和RNA，-80℃冰箱冻存进行后续检测。脂肪组织冰冻切片包埋剂包埋并切片，进行油红O染色。

[1] Aron-Wisnewsky J, Clément K, Nieuwdorp M. Fecal Microbiota Transplantation: A future therapeutic option for obesity/diabetes? Curr Diab Rep. 2019 Jun 27;19(8):51. [2]Turnbaugh, P. J. et al. An obesity-associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest. Nature 444, 1027–1031 (2006). [3]Burcelin, R., Serino, M., Chabo, C., Blasco-Baque, V. & Amar, J. Gut microbiota and diabetes: from pathogenesis to therapeutic perspective. Diabetologica 48,257–273 (2011).

肌萎缩侧索硬化是一种慢性神经元性疾病，主要是由运动皮质上运动神经元和脊髓及脑干下运动神经元损伤造成的，该病导致四肢、躯干、胸部、腹部肌肉逐渐无力并萎缩，从而影响运动、交流、吞咽和呼吸功能，最终致死。

利用CRISPR/Cas9构建Sqstm1基因点突变小鼠，删除该基因第7外显子1149位碱基。                      图1 sqstm1基因突变小鼠构建模式图

脓肿分枝杆菌是一种快速生长的非结核分枝杆菌, 是引起非结核分枝杆菌病中最常见的病原菌之一。对患有肺部疾病如慢性阻塞性肺病、囊性纤维化和肺气肿的患者，常造成严重的呼吸道和粘膜感染。据统计，非结核分枝杆菌感染引起的疾病中，肺部脓肿分枝杆菌复合体的感染率为2.6-13.0%，但只有45.6%的患者可以成功治愈，表明目前脓肿分枝杆菌感染的治疗仍缺乏有效的策略。流行病学相关研究也表明，脓肿分枝杆菌常引起医院院内感染，这对医疗系统的卫生健康构成了重大的威胁。目前关于脓肿分枝杆菌感染的动物模型的报道较少，我们通过雾化感染SCID小鼠，建立了脓肿分枝杆菌的感染模型。

1.实验材料 1.1 实验动物 SCID小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。 1.2 主要实验仪器 Nikon光学显微镜 BIO-RAD电泳仪 Tanon电泳槽 Tanon数码凝胶图像处理系统 Incucell恒温培养箱温控 TAITEC振荡箱 Eppendorf 离心机 Eppendorf 移液器 2.实验操作规程和动物处理伦理 模型制作中涉及动物的操作程序已获得首都医科大学附属北京胸科医院实验动物伦理委员会的批准，批准号为XK2023-117，简要步骤如下： 2.1 脓肿分枝杆菌的感染 将SPF级6‐8周龄雌性SCID小鼠（质量16-20g）随机分为5组，每组5只。感染剂量为2×104CFU，感染方式为雾化感染，感染时长28天。 2.2 标本的收集 动物安乐死后摘眼球取血，解剖取肺、脾组织样本。肺组织用剪刀剪碎，加胶原酶在37摄氏度摇床中消化20-30 min。用筛网过滤后加PBS洗一遍，离心后加红细胞裂解液处理5 min，若细胞沉淀仍有红色，可再裂解一次。加PBS重悬细胞，计数。将脾组织倒在筛网上，用注射器的尾部研磨，加PBS冲洗筛网，离心后加红细胞裂解液处理5min，加PBS重悬细胞，计数。 2.3 小鼠肺脏、脾脏内菌落计数 小鼠处死后在无菌的条件下取部分肺脏和脾脏用于组织病理学观察。对剩余的肺脏和脾脏用研磨器研磨后，用无菌的生理盐水分别按照1：10，1:100，1:1000，1:10000，1:100000五个梯度进行稀释，每份稀释液涂布两块７Ｈ１０平板，涂布完毕后将平板包好装袋，置于37°Ｃ培养箱培养3-4周至长处肉眼可见的清晰菌落。观察结果，选择合适的浓度梯度（菌落数在30-300个之间）进行计数。