p53结合蛋白1基因剔除小鼠

C57BL/6J背景

C57BL/6J小鼠53BP1基因的外显子被PGK-neor 基因替换，构建基因打靶载体，电转入ES细胞获得经基因修饰的打靶干细胞克隆，显微注射ES细胞到C57小鼠的受精卵中，移植到假孕小鼠，获得崁合体后代小鼠，再和C57小鼠杂交，最终获得可以传代的53BP1-/-小鼠（图1）。

图1 53BP1-/-小鼠的建立

A. 53BP1基因打靶载体构建；B，EcoRI消化基因组DNA的southern blot检测；C，PCR鉴定基因型。

1. p53结合蛋白1基因剔除小鼠生长受阻

与同龄的53BP1+/-及53BP1+/+小鼠相比，53BP1-/-小鼠体重显著降低。但是雌、雄性53BP1-/-小鼠均可育。

图1  5月龄野生鼠与53BP1-/-小鼠体重比较

2. p53结合蛋白1基因剔除小鼠存在免疫缺陷

与同龄小鼠，53BP1-/-小鼠胸腺细胞减少40%，6周龄53BP1-/-小鼠CD4+阳性成熟胸腺细胞减少60%。外周血的CD4+阳性T淋巴细胞减少50%。

3. p53结合蛋白1基因剔除小鼠对辐射更加敏感

53BP1-/-小鼠对辐射高度敏感，8Gy的红外辐射（IR）下暴露14天致死，而同龄的53BP1+/+小鼠在同等剂量辐射下2个月后方可死亡（图2）。

图2. 53BP1+/+小鼠和53BP1-/-小鼠接受全身辐射30天内生存分析

4. p53结合蛋白1基因剔除小鼠易发肿瘤。

在检测的101个小鼠，有8只小鼠4-7月龄发展成巨大胸腺淋巴瘤（图3）。1-7龄之间有9只死亡，而没有可见肿瘤形成。

图3 53BP1-/-小鼠巨大胸腺淋巴瘤

A，两个不同的胸腺淋巴瘤来源细胞的CD4 和CD8流式细胞分析；B，4月龄53BP1-/-小鼠巨大胸腺淋巴瘤；C，巨大胸腺淋巴瘤53BP1-/-小鼠的胸腺、肾脏、脾脏组织切片的H&E染色；D，0-10月内53BP1+/+和53BP1-/-小鼠的生存分析。