动脉粥样硬化（Atherosclerosis）是一组动脉硬化的血管病中常见的最重要的一种，其特点是受累动脉病变从内膜开始。一般先有脂质和复合糖类积聚、出血及血栓形成，纤维组织增生及钙质沉着，并有动脉中层的逐渐蜕变和钙化，病变常累及弹性及大中等肌性动脉，一旦发展到足以阻塞动脉腔，则该动脉所供应的组织或器官将缺血或坏死。由于在动脉内膜积聚的脂质外观呈黄色粥样，因此称为动脉粥样硬化。

利用CRISPR/Cas9技术建立的ApoE 基因敲除大鼠，用显微注射法将Cas9 mRNA (20 ng/μl)和ApoE靶点sgRNAs (10 ng/μl)注射到SD大鼠的受精卵中，用SD大鼠作假孕受体，制备基因敲除大鼠(图1)。 图1. ApoE 基因敲除大鼠的建立和鉴定 a.敲除大鼠PCR鉴定；b.敲除大鼠PCR产物利用T7EN1实验分析靶点基因修饰情况；c.敲除大鼠ApoE核酸序列缺失；d.敲除大鼠与野生大鼠基础血生化检测。

女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌（breast cancer）是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%。乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。

1.表达载体构建：构建chicken β-actin-luc-NEO载体CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。 2. 66c14-Luc荧光细胞系的获得：采用脂质体2000转染小鼠乳腺癌细胞66c14细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达luciferase的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。 3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取0.1 mL细胞悬液接种于BALB／c小鼠（5周龄，体重15-18 g）右侧第二对乳腺脂肪垫内。1×106个细胞/只，接种后每隔一周，采用活体荧光影像系统摄像动态观察肿瘤的生长和转移情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5 mg/10 g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放人活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4．0软件进行分析。

1. 李小颖,马元武,张连峰.三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移的比较[J].中国比较医学杂志, 2013, 23(4):1-4.

阿尔茨海默症（Alzheimer disease，AD）是一种常见的中枢神经系统退行性变性疾病，其临床表现以退行性大脑认知，识别功能障碍为特征，有明显记忆力降低并伴随个性和行为的改变。AD约占全部痴呆病人的70%，位于心脏病、癌症和中风之后的第四位死亡性疾病，目前已成为发达国家主要社会问题之一。

PrP-hAPP695 K595N/M596L、PrP-hPS1dE9和PDGF-TAU转基因载体由本实验室构建，用显微注射法将线性化的转基因载体注射到SD大鼠的受精卵中，用SD大鼠作假孕受体，制备转基因大鼠。转基因大鼠在出生7 d，组织用碱裂解法提取基因组DNA。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。Western blot检测转基因大鼠脑组织中人APP、PS1和TAU蛋白的表达。（图1） 图1 APPswe/PS1dE9/TAU转基因大鼠的建立。A: APPswe、PS1dE9、TAU转基因表达载体;B：转基因大鼠的PCR鉴定，P,阳性对照；N，阴性对照；H，H2O；M，DL2000 DNA marker；泳道1-8为转基因大鼠鼠尾DNA，1、4、7为阳性首建鼠。C：western blot 检测人APPswe、PS1dE9、TAU蛋白在转基因大鼠脑组织中的表达。WT，同窝阴性对照鼠；33#、34#为阳性首建鼠。GAPDH 为加样一致性对照。

1. 张丽，陈炜，张旭，孙彩显，张连峰。APPswe/PS1dE9/TAU三转基因阿尔兹海默病大鼠模型的建立。中国比较医学杂志，2014, 24（3）:61-66.

帕金森病（Parkinson's disease，PD）是最常见的慢性神经系统退行性病变之一, 其主要症状是运动功能的改变，如运动过缓、静止震颤、步态畸形和姿势不稳等病变，最后导致运动能力丧失。流行病学调查显示，随着年龄增长PD患病率逐渐增高，55岁以上的人群中，帕金森病的患病率超过1%，65岁以上约为2%，是威胁老年社会人类健康的重大疾病。

将人类α–syn A53T突变基因插入到脑组织特异启动子PDGF的下游，构建α –syn A53T表达载体。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到SD大鼠的受精卵中，用Wistar大鼠作假孕受体，制备转基因大鼠。转基因大鼠在出生7 d，用碱裂解法提取基因组DNA。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。Western blot检测转基因大鼠脑组织中人α –synuclein蛋白的表达。（图1） 图1 α –synA53T转基因大鼠的建立 a. PDGF-α –syn A53T表达载体的构建 b. α –syn A53T转基因阳性鼠PCR检测。M，DL2000 DNA marker；泳道1-5、8、10-11、13为阴性；泳道6、7、9、12分别为1、8、10、36号阳性首建鼠。 c. western blot 检测转基因首建鼠脑组织中α –synuclein蛋白的表达。WT，同窝阴性对照鼠；36#、1#、8#为阳性首建鼠。GAPDH 为加样一致性对照。

1. 张丽；陈炜；张旭；孙秀萍；杨亚军；张连峰。携带A53T突变人α突触核蛋白转基因帕金森病大鼠模型的建立。中国比较医学杂志，2013，23（10）：1-6.2。 2. 张丽；张连峰。α突触核蛋转基因帕金森疾病模型和致病机制研究进展。中国比较医学杂志，2012,22（11）:63-67.

胰腺癌（pancreatic cancer）是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。胰腺癌临床表现取决于癌的部位、病程早晚、有无转移以及邻近器官累及的情况。其临床特点是整个病程短、病情发展快和迅速恶化。最多见的是上腹部饱胀不适、疼痛。虽然有自觉痛，但并不是所有病人都有压痛，如果有压痛则和自觉痛的部位是一致的。其它表现有黄疸、食欲不振消化道症状、消瘦乏力、腹部包块、腹水、症状性糖尿病、血栓性静脉炎等及其它。

1.表达载体构建：构建chicken β-actin-GFP-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（chicken beta-actin）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。 2. PANC-1-eGFP荧光细胞系的获得：采用脂质体2000转染PANC-1细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。 3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取BALB／CA- nu裸鼠进行皮下接种，1×106个细胞/只。分别在接种的第7、14、21和28天四个时间点观察肿瘤的生长及转移情况情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5mg/10 g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4.0软件进行分析。

胰腺癌（pancreatic cancer）临床表现取决于癌的部位、病程早晚、有无转移以及邻近器官累及的情况。其临床特点是整个病程短、病情发展快和迅速恶化。最多见的是上腹部饱胀不适、疼痛。虽然有自觉痛，但并不是所有病人都有压痛，如果有压痛则和自觉痛的部位是一致的。其它表现有黄疸、食欲不振消化道症状、消瘦乏力、腹部包块、腹水、症状性糖尿病、血栓性静脉炎等及其它。 胰腺癌的病因尚不十分清楚。其发生与吸烟、饮酒、高脂肪和高蛋白饮食、过量饮用咖啡、环境污染及遗传因素有关；近年来的调查报告发现糖尿病人群中胰腺癌的发病率明显高于普通人群；也有人注意到慢性胰腺炎病人与胰腺癌的发病存在一定关系，发现慢性胰腺炎病人发生胰腺癌的比例明显增高。

1.表达载体构建：构建chicken β-actin-luc-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（ chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。 2. SW1990-LUC荧光细胞系的获得：采用脂质体2000转染SW1990细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达luciferase的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。 3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取BALB／CA- nu裸鼠麻醉，0.1mL/只接种于胰腺被膜。分别在接种的第7、14、21和28天四个时间点观察肿瘤的生长及转移情况情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5mg/10 g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4.0软件进行分析。

1. 李小颖,董伟,张连峰. 人胰腺癌裸鼠异种移植瘤模型的生物发光成像和超声成像比较[J]. 中国比较医学杂志,2011,07:13-16. 2. 李小颖,苏卫,张连峰. SW1990和Capan-2红色荧光标记胰腺癌移植肿瘤模型的建立和比较[J]. 中国比较医学杂志,2010,03:12-14.

女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%。乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。 早期乳腺癌往往不具备典型的症状和体征，不易引起重视，常通过体检或乳腺癌筛查发现。乳腺肿块、乳头溢液、皮肤改变、乳头、乳晕异常、腋窝淋巴结肿等为乳腺癌的典型体征。

将大鼠c-neu (ErbB2)基因插入到鼠乳腺瘤病毒(mouse mammary tumor virus，MMTV)启动子下游构建ErbB2表达载体。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到FVB/N小鼠的受精卵中，移植于假孕受体，制备转基因小鼠。转基因小鼠在出生7 d，用碱裂解法提取鼠尾基因组DNA。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。

Muller WJ; Sinn E; Pattengale PK; Wallace R; Leder P. Single-step induction of mammary adenocarcinoma in transgenic mice bearing the activated c-neu oncogene [J]. Cell，1988，54(1):105-115. 2. 马志坤, 冯笑山, 侯建峰,等. 乳腺癌MMTV-ErbB-2转基因小鼠模型的培育观察[J]. 肿瘤基础与临床, 2009, 22(2):119-120. 3. C T Guy, M A Webster, M Schaller, T J Parsons, R D Cardiff, and W J Muller. Expression of the neu protooncogene in the mammary epithelium of transgenic mice induces metastatic disease [J]. Proc Natl Acad Sci，1992，89(22): 10578–10582.

女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌（breast cancer）是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%。乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。 早期乳腺癌往往不具备典型的症状和体征，不易引起重视，常通过体检或乳腺癌筛查发现。乳腺肿块、乳头溢液、皮肤改变、乳头、乳晕异常、腋窝淋巴结肿等为乳腺癌的典型体征。

1.表达载体构建：构建chicken β-actin-GFP-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（chicken beta-actin）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。 2. 4T1-eGFP荧光细胞系的获得：采用脂质体2000转染小鼠乳腺癌细胞4T1细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。 3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取BALB/C小鼠进行皮下接种，1×106个细胞/只。分别在接种的第7、14、21和28天四个时间点观察肿瘤的生长及转移情况情况。观察前每只小鼠腹腔注射饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4.0软件进行分析。

女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌（breast cancer）是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%。乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。早期乳腺癌往往不具备典型的症状和体征，不易引起重视，常通过体检或乳腺癌筛查发现。乳腺肿块、乳头溢液、皮肤改变、乳头、乳晕异常、腋窝淋巴结肿等为乳腺癌的典型体征。

1.表达载体构建：构建chicken β-actin-DsRed-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（ chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。 2. 4T1-DsRed荧光细胞的获得：采用脂质体2000转染小鼠乳腺癌细胞4T1细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。 3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取BALB/c小鼠进行皮下接种，1×106个细胞/只。分别在接种的第7、14、21和28天四个时间点观察肿瘤的生长及转移情况情况。观察前每只小鼠腹腔注射饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4.0软件进行分析。

女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌（breast cancer）是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%。乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。

1.表达载体构建：构建chicken β-actin-luc-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（ chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达（图1）。 图1 荧光素酶基因表达载体的构建 2. 4T1-LUC荧光细胞系的获得：采用脂质体2000转染小鼠乳腺癌细胞4T1细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达luciferase的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。 3.肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取0.1 mL细胞悬液接种于BALB／c小鼠（5周龄，体重15-18 g）右侧第二对乳腺脂肪垫内。1×106个细胞/只，接种后每隔一周，采用活体荧光影像系统摄像动态观察肿瘤的生长和转移情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5 mg/10 g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放人活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4．0软件进行分析。

1. 李小颖,马元武,张旭等.不同接种量荧光素酶标记小鼠乳腺癌细胞4T1在小鼠体内生长及肺转移的比较[J].中国实验动物学报,2012,20(1):14-17。 2. 李小颖,马元武,张连峰.三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移的比较[J].中国比较医学杂志, 2013, 23(4):1-4。

女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌（breast cancer）是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%。乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。

1.细胞：小鼠乳腺癌细胞4TO7来自ATCC；载体：构建chicken β-actin-luc-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（ chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。 2. 细胞稳定转染：采用脂质体2000转染小鼠乳腺癌细胞4TO7细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达luciferase的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。 3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取0.1 mL细胞悬液接种于BALB／c小鼠（5周龄，体重15-18 g）右侧第二对乳腺脂肪垫内。1×106个细胞/只，接种后每隔一周，采用活体荧光影像系统摄像动态观察肿瘤的生长和转移情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5 mg/10 g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放人活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4．0软件进行分析。

1. 李小颖,马元武,张连峰.三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移的比较[J].中国比较医学杂志, 2013, 23(4):1-4。

神经母细胞瘤（neuroblastoma）是儿童最常见的颅外肿瘤，是婴幼儿最常见的肿瘤。有将近一半的神经母细胞瘤发生在2岁以内的婴幼儿。神经母细胞瘤约占6-10%的儿童肿瘤，15%的儿童肿瘤死亡率。对于4岁以下儿童，每一百万人口的死亡率为10；对于4-9岁儿童，每一百万人口的死亡率为4例。神经母细胞瘤属于神经内分泌性肿瘤，可以起源于交感神经系统的任意神经脊部位。其最常见的发生部位是肾上腺，但也可以发生在颈部、胸部、腹部以及盆腔的神经组织。目前已知有少数几种人类肿瘤，可自发性地从未分化的恶性肿瘤退变为完全良性肿瘤, 神经母细胞瘤就属于其中之一。

1.表达载体构建chicken β-actin-luc-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（ chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达（图1）。 图1 带有荧光素酶基因表达载体的构建 2. SHSY5Y-luc荧光细胞的获得：采用脂质体2000转染SHSY5Y细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达luciferase的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。 3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取BALB/CA- nu裸鼠进行脑部接种，1×106个细胞/只。分别在接种的第7、14、21和28天四个时间点观察肿瘤的生长及转移情况情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5mg/10 g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4.0软件进行分析。