APPswe/PS1dE9/TAU三转基因阿尔兹海默病大鼠模型。

背景品系为SD(Sprague Dawley, SD)大鼠 ，为大鼠（rat；rattus norregicus）的一个品系，属于动物界、脊索动物门、脊椎动物亚门、哺乳纲、啮齿目、鼠科、大家鼠属（Genus Rattus）、大家鼠种（Species rattus norvegicus）的动物，1925年，美国斯泼累格•多雷（Sprague Dawley）农场用Wistar大鼠培育而成。

PrP-hAPP695 K595N/M596L、PrP-hPS1dE9和PDGF-TAU转基因载体由本实验室构建，用显微注射法将线性化的转基因载体注射到SD大鼠的受精卵中，用SD大鼠作假孕受体，制备转基因大鼠。转基因大鼠在出生7 d，组织用碱裂解法提取基因组DNA。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。Western blot检测转基因大鼠脑组织中人APP、PS1和TAU蛋白的表达。（图1）

图1 APPswe/PS1dE9/TAU转基因大鼠的建立。A: APPswe、PS1dE9、TAU转基因表达载体;B：转基因大鼠的PCR鉴定，P,阳性对照；N，阴性对照；H，H2O；M，DL2000 DNA marker；泳道1-8为转基因大鼠鼠尾DNA，1、4、7为阳性首建鼠。C：western blot 检测人APPswe、PS1dE9、TAU蛋白在转基因大鼠脑组织中的表达。WT，同窝阴性对照鼠；33#、34#为阳性首建鼠。GAPDH 为加样一致性对照。

Morris水迷宫试验发现，与同月龄野生型大鼠相比，APPswe/PS1dE9/TAU转基因大鼠6月龄已经出现显著的行为学改变：学习记忆能力下降(P<0.05)（表1和图2）。经过检验前5 d学习有效，所有大鼠都能较快的找到平台。随后第6天撤出平台，进行空间探索实验。Ethovision XT监测分析软件记录大鼠在目标区域(即第4区和平台区)的穿梭次数和停留时间。

图2  Morris水迷宫第六天空间探索实验结果比较。A：6月龄野生型大鼠与转基因模型大鼠平台区域停留时间；B：6月龄野生型大鼠与转基因模型大鼠穿越平台区域次数。*，P<0．05。

表1 6月龄APPswe/PS1dE9/TAU转基因大鼠与野生大鼠在隐藏平台实验中搜索平台潜伏期

注：*，P <0.05 。Note：*，P <0.05.

APP免疫组织化学结果显示，转基因大鼠病理学改变表现为神经元胞浆内Aβ表达异常增加，但未有明显老年斑出现（图3）。同时，TAU5免疫组织化学结果显示，和野生对照相比，6月龄转基因大鼠脑组织中皮层总TAU蛋白的表达略有增加。PHF-TAU5免疫组织化学结果显示，野生对照皮层神经元内无磷酸化PHF-TAU免疫阳性，而转基因大鼠皮层神经元有大量磷酸化PHF-TAU免疫阳性着色，结构类似神经原纤维缠结（见图4）。

图3 免疫组织化学检测APPswe/PS1dE9/TAU转基因大鼠脑组织中APP的表达

A-C：6月龄野生大鼠脑皮层（A）、海马CA1 (B) 及齿状回DG (C) 切片Beta Amyloid (Aß) 6E10 单抗的免疫组化染色结果（100×）；D-F：6月龄APPswe/PS1dE9/TAU转基因大鼠脑皮层（C）、海马CA1 (D) 及齿状回DG (E) 切片Beta Amyloid (Aß) 6E10 单抗的免疫组化染色结果（100×）。

图4 IHC检测人TAU蛋白及磷酸化PHF-TAU蛋白在转基因大鼠脑皮层的表达（200×）