标识符 | CSTR:16397.09.0H01000927 |
---|---|
资源中文名称 | 人神经母细胞瘤SHSY5Y荧光素酶标记肿瘤模型 |
资源英文名称 | SHSY5Y-LUC |
疾病概述 | 神经母细胞瘤(neuroblastoma)是儿童最常见的颅外肿瘤,是婴幼儿最常见的肿瘤。有将近一半的神经母细胞瘤发生在2岁以内的婴幼儿。神经母细胞瘤约占6-10%的儿童肿瘤,15%的儿童肿瘤死亡率。对于4岁以下儿童,每一百万人口的死亡率为10;对于4-9岁儿童,每一百万人口的死亡率为4例。神经母细胞瘤属于神经内分泌性肿瘤,可以起源于交感神经系统的任意神经脊部位。其最常见的发生部位是肾上腺,但也可以发生在颈部、胸部、腹部以及盆腔的神经组织。目前已知有少数几种人类肿瘤,可自发性地从未分化的恶性肿瘤退变为完全良性肿瘤, 神经母细胞瘤就属于其中之一。 |
实验动物背景信息 | SHSY5Y 细胞来自ATCC,衍生于人的神经母细胞瘤细胞系SK2N 2SH,表达儿茶酚胺能神经元特有的酪氨酸羟化酶、多巴胺2B2羟化酶和多巴胺转运体, 该细胞系被广泛运用于PD 发病机制的研究。 裸鼠(Nude Mouse), 先天性胸腺缺陷的突变小鼠,是由于第Ⅶ连锁群(Linkage group)内裸体位点的等位基因发生纯合而形成的突变小鼠新品种。裸鼠(纯合子nu/nu突变鼠)主要表现为无毛(但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡)以及缺乏正常胸腺。杂合子小鼠(nu-/+)各方面表现都正常。 |
模型制作方法 | 1.表达载体构建chicken β-actin-luc-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒(the cytomegalovirus,CMV)早期增强子(early enhancer element)和鸡β-肌动蛋白( chicken beta-actin )启动子组成,用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达(图1)。
图1 带有荧光素酶基因表达载体的构建 2. SHSY5Y-luc荧光细胞的获得:采用脂质体2000转染SHSY5Y细胞,转染后24 h,用含有G418的培养液筛选细胞三周,获得稳定表达luciferase的细胞株,选择其中高表达的克隆株扩大培养。 3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像:收集处于生长对数期的转染细胞,稀释至5×106/mL。取BALB/CA- nu裸鼠进行脑部接种,1×106个细胞/只。分别在接种的第7、14、21和28天四个时间点观察肿瘤的生长及转移情况情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5mg/10 g),饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像,Slide Book 4.0软件进行分析。 |
模型表型数据 | 本模型将luc基因转染到SHSY5Y中得到了高表达luc细胞株。收集处于生长对数期的转染细胞,稀释至5×106/mL。BALB/CA- nu裸鼠脑部接种,1×106个细胞/只。先麻醉小鼠,脑立体定位仪固定小鼠头部,脑区定位,注射神经母细胞瘤细胞。接种后第7、14、21和28天,活体荧光成像系统观察,发现SHSY5Y-luc细胞在裸鼠脑部7天即能够成瘤,且随时间增长而肿瘤体积变大、荧光强度增加(图2)。
图2 人神经母细胞瘤SHSY5Y-luc脑原位接种 |
动物模型的评价与验证 | |
保存方式 | 液氮冻存 |
合作方式 | |
相关文章 | |
备注 | 保存地点:中国医学科学院实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室 |