肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明确，大量资料表明，长期大量吸烟与肺癌的发生有非常密切的关系。已有的研究证明：长期大量吸烟者患肺癌的概率是不吸烟者的10～20倍，开始吸烟的年龄越小，患肺癌的几率越高。此外，吸烟不仅直接影响本人的身体健康，还对周围人群的健康产生不良影响，导致被动吸烟者肺癌患病率明显增加。城市居民肺癌的发病率比农村高，这可能与城市大气污染和烟尘中含有致癌物质有关。因此应该提倡不吸烟，并加强城市环境卫生工作。

模型制作采用C57/BL小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：Lewis肺癌细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-eGFP 图1绿色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染Lewis细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。 图2绿色荧光标记的Lewis细胞系（200×） 稳定高表达GFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明确，大量资料表明，长期大量吸烟与肺癌的发生有非常密切的关系。已有的研究证明：长期大量吸烟者患肺癌的概率是不吸烟者的10～20倍，开始吸烟的年龄越小，患肺癌的几率越高。此外，吸烟不仅直接影响本人的身体健康，还对周围人群的健康产生不良影响，导致被动吸烟者肺癌患病率明显增加。城市居民肺癌的发病率比农村高，这可能与城市大气污染和烟尘中含有致癌物质有关。因此应该提倡不吸烟，并加强城市环境卫生工作。

模型制作采用C57/BL小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：Lewis肺癌细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter 图1荧光素酶表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染Lewis细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达荧光素酶的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行小鼠尾静脉接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明确，大量资料表明，长期大量吸烟与肺癌的发生有非常密切的关系。已有的研究证明：长期大量吸烟者患肺癌的概率是不吸烟者的10～20倍，开始吸烟的年龄越小，患肺癌的几率越高。此外，吸烟不仅直接影响本人的身体健康，还对周围人群的健康产生不良影响，导致被动吸烟者肺癌患病率明显增加。城市居民肺癌的发病率比农村高，这可能与城市大气污染和烟尘中含有致癌物质有关。因此应该提倡不吸烟，并加强城市环境卫生工作。

模型制作采用C57/BL小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：Lewis肺癌细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-DsRed 图1红色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染Lewis细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达RFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。 图2 红色荧光标记的Lewis细胞系（200×） 稳定高表达DsRed的细胞，在荧光显微镜下呈强荧光，并且荧光均匀分布于整个细胞内。单克隆DsRed细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达DsRed（图2）。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行小鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。

模型制作采用BALB/cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：SMMC-7721细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-LUC 图1荧光素酶表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染SMMC-7721细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达LUC的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。 图2荧光素酶标记的SMMC-7721细胞系的阳性克隆检测 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠膀胱异位移植，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。

模型制作采用BALB/cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：SMMC-7721细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-eGFP 图1绿色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染SMMC-7721细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。 图2绿色荧光标记的SMMC-7721细胞系（200×） 稳定高表达GFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

扩张型心肌病（Dilated cardiomyopathy, DCM）以心腔扩张、心肌收缩功能受损为主要特征，其为原发性心肌病的主要类型

1、选取8-10周龄小鼠，称重，连续两周隔日腹腔注射给予阿霉素（针剂，生理盐水溶解，给药剂量为 4mg∙kg-1，给药容积为 0.2ml/10g体重），停药恢复两周后进行超声分析； 2、分析超声参数，以左室舒张末期内径（left ventricular diameter at end-diastole, LVEDD）的95% 可信区间（confidence interval, CI）为准选取成模小鼠。

1）Lu D, Ma Y, Zhang W, Bao D, Dong W, Lian H, Huang L, Zhang L. Knockdown of Cytochrome P450 2E1 Inhibits Oxidative Stress and Apoptosis in the cTnTR141W Dilated Cardiomyopathy Transgenic Mice. Hypertension. 2012 Jul; 60(1): 81-89. 2） Lu D, Zhang L, Bao D, Lu Y, Zhang X, Liu N, Ge W, Gao X, Li H, Zhang L. Calponin 1 inhibits dilated cardiomyopathy development in mice through the εPKC pathway. Int J Cardiol. 2014 May 1; 173(2): 146-153.

扩张型心肌病（Dilated cardiomyopathy, DCM）

扩增并经测序比对正确的CNN1片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达CNN1表达载体。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。PCR法鉴定小鼠基因型，Western Blot分析CNN1蛋白的表达情况（图1）。实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准(ILAS-GC-2012-001)。   图1. CNN1转基因小鼠模型的建立及鉴定 将CNN1基因片段插入α-MHC心脏组织特异性启动子下游构建转基因表达载体(A), Western Blot分析CNN1蛋白表达(B)及灰度扫描定量分析(C, n=3, **P <0.01 versus NTG).

1.王书美，吕丹，陈炜，张晓娟，曹兴水，张连峰. 心脏特异表达Calponin1转基因小鼠的心脏功能分析[J]．中国比较医学杂志, 2011, 21(1): 59-63. 2.Lu D, Zhang L, Bao D, Lu Y, Zhang X, Liu N, Ge W, Gao X, Li H, Zhang L. Calponin 1 inhibits dilated cardiomyopathy development in mice through the εPKC pathway. Int J Cardiol. 2014 May 1; 173(2): 146-153.

肥厚型心肌病（Hypertrophic cardiomyopathy, HCM）

扩增并经测序比对正确的cTnIR145G突变片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达cTnIR145G表达载体。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。PCR法鉴定小鼠基因型，Western Blot分析cTnIR145G突变蛋白的表达情况（图1）。实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准（GC05004）。 图1. cTnIR145G转基因小鼠模型的建立及鉴定 将cTnIR145G突变基因片段插入α-MHC心脏组织特异性启动子下游构建转基因表达载体(A). PCR法鉴定小鼠基因型(B), M: 分子量标记; 1: 阳性对照; 2: 阴性对照; 3: 空白对照;  5,8: cTnIR145G阳性转基因小鼠; 4,6,7: 阴性转基因小鼠. Western Blot分析LMNAE82K突变蛋白表达(C), WT: 同龄阴性对照小鼠; F028,24,4,45: 首建鼠28,24,4,45号; GAPDH: 内参.灰度扫描定量分析蛋白表达情况(D).

1.邵海涛, 张丽, 向志光, 陈炜, 张晓娟, 曹兴水, 吕丹．心脏特异表达cTnIR145G转基因小鼠的建立及表型分析[J]．中国分子心脏病学杂志，2011,11 (1): 42-46.

肥厚型心肌病（Hypertrophic cardiomyopathy, HCM）

扩增并经测序比对正确的cTnTR92Q突变片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达cTnTR92Q表达载体。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。PCR法鉴定小鼠基因型。实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准（GC-07-2001）。

1.董伟，冯娟，全雄志，陈炜，祝梅香，刘亚莉，张连峰. cTnTR92Q转基因小鼠肥厚型心肌病模型的建立[J]．中国比较医学杂志,2008,18(5):5-8. 2.Lu D, Dong W, Zhang X, Quan X, Bao D, Lu Y, Zhang L. WIF1 causes dysfunction of heart in transgenic mice. Transgenic Res. 2013 Dec; 22(6): 1179-1189. 3.Bao D, Lu D, Liu N, Dong W, Lu YD, Qin C, Zhang LF. Tomoregulin-1 inhibits cardiac hypertrophy after pressure overload via TAK1-JNK pathways in mice. Dis Model Mech. 2015 Jun 18. pii: dmm.021303. [Epub ahead of print]

扩张型心肌病（Dilated cardiomyopathy, DCM）

扩增并经测序比对正确的cTnTR141W突变片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达cTnTR141W表达载体（图1A）。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。PCR法鉴定小鼠基因型（图1B），Northern Blot法分析cTnTR141W的表达情况（图2）。实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准(GC-07-2001)   图1. cTnTR141W转基因小鼠模型的建立及鉴定 (A) 将cTnTR141W突变基因片段插入α-MHC心脏组织特异性启动子下游构建转基因表达载体. (B) PCR法鉴定小鼠基因型. 1: 阳性对照；2: 分子量标记；20:阴性对照；21:空白对照；3,15,18: cTnTR141W阳性转基因小鼠；其余为阴性转基因小鼠.   图2. Northern Blot法分析cTnTR141W转基因小鼠心肌组织cTnT的表达 (A) Northern Blot法观察内源及转基因外源cTnT基因RNA的表达情况. (B) PCR法分析未经及经酶消化后cTnT的表达，1,2:野生小鼠基因组对照；3,4:首建鼠1号；5,6:首建鼠13号；7,8:首建鼠16号.

1.Juan F, Wei D, Xiongzhi Q, Ran D, Chunmei M, Lan H, Chuan Q, Lianfeng Z. The changes of the cardiac structure and function in cTnTR141W transgenic mice. Int J Cardiol. 2008; 128(1):83-90. 2.Zhao H, Lv D, Zhang W, Dong W, Feng J, Xiang Z, Huang L, Zhang L. Ginsenoside-Rb1 attenuates dilated cardiomyopathy in cTnT(R141W) transgenic mouse. J Pharmacol Sci. 2010; 112(2): 214-222. 3.Zhao HP, Lü D, Zhang W, Zhang L, Wang SM, Ma CM, Qin C, Zhang LF. Protective action of tetramethylpyrazine phosphate against dilated cardiomyopathy in cTnT(R141W) transgenic mice. Acta Pharmacol Sin. 2010; 31(3): 281-288. 4.Zhang W, Lu D, Dong W, Zhang L, Zhang X, Quan X, Ma C, Lian H, Zhang L. Exprssion of CYP2E1 increases oxidative stress and induces apoptosis of cardiomyocytes in transgenic mice. FEBS J. 2011 May; 278(9): 1484-1492. 5.Zhang L, Lu D, Zhang W, Quan X, Dong W, Xu Y, Zhang L. Cardioprotection by Hepc1 in cTnT(R141W) transgenic mice. Transgenic Res. 2012 Aug; 21(4): 867-878. 6.Lu D, Shao HT, Ge WP, Liu N, Zhang X, Ma CM, Qin C, Zhang LF. Ginsenoside-Rb1 and Tetramethylpyrazine Phosphate Act synergistically to Prevent Dilated Cardiomyopathy in cTnTR141W Transgenic Mice. J Cardiovasc Pharmacol. 2012 May; 59(5): 426-433. 7.Lu D, Ma Y, Zhang W, Bao D, Dong W, Lian H, Huang L, Zhang L. Knockdown of Cytochrome P450 2E1 Inhibits Oxidative Stress and Apoptosis in the cTnTR141W Dilated Cardiomyopathy Transgenic Mice. Hypertension. 2012 Jul; 60(1): 81-89. 8.朱皓，吕丹，高凯，张连峰. 磁共振成像对扩张型心肌病转基因模型小鼠左右心室对比分析[J]．中国实验动物学报. 2013, 21(2): 28-33. 9.Lu D, Zhang L, Bao D, Lu Y, Zhang X, Liu N, Ge W, Gao X, Li H, Zhang L. Calponin 1 inhibits dilated cardiomyopathy development in mice through the εPKC pathway. Int J Cardiol. 2014 May 1; 173(2): 146-153. 10.Lu D, Dong W, Zhang X, Quan X, Bao D, Lu Y, Zhang L. WIF1 causes dysfunction of heart in transgenic mice. Transgenic Res. 2013 Dec; 22(6): 1179-1189.

扩张型心肌病（Dilated cardiomyopathy, DCM）

扩增并经测序比对正确的CYP2E1片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达CYP2E1表达载体。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。PCR法鉴定小鼠基因型，Western Blot分析CYP2E1蛋白的表达情况（图1）。实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准(GC08-2027)。   图1. CYP2E1转基因小鼠的建立及鉴定 CYP2E1表达载体构建图(A)及Western Blot分析CYP2E1蛋白的表达情况(B).

1.Zhang W, Lu D, Dong W, Zhang L, Zhang X, Quan X, Ma C, Lian H, Zhang L. Exprssion of CYP2E1 increases oxidative stress and induces apoptosis of cardiomyocytes in transgenic mice. FEBS J. 2011 Feb 25. 2.张伟，李小颖，张连峰.小鼠CYP2E1基因靶向miRNA表达载体的构建及鉴定[J]. 中国比较医学杂志，2009, 19(6):9-12.

QT间期延长综合症（long QT syndrome，LQTS）

扩增并经测序比对正确的KCNQ1V180L突变片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达KCNQ1V180L表达载体。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。PCR法鉴定小鼠基因型，Western Blot分析KCNQ1V180L突变蛋白的表达情况（图1）。实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准（ILAS-GC-2012-001）。 图1. KCNQlV180L转基因小鼠的建立 (A) 将靶基因KCNQlV180L插入心脏特异表达的α-MHC启动子下游，构建KCNQlV180L转基因表达载体；(B) PCR鉴定KCNQlV180L转基因小鼠基因型，M: DNA分子量标记；1：阳性对照；2：阴性对照；3：空白对照；6，8：阳性转基因小鼠；4，5，7：阴性转基因小鼠；(C) Western Blot分析KCNQl蛋白在转基因小鼠心脏组织中的表达。

1.吕丹, 鲍丹, 董伟, 陈炜, 张旭, 曹兴水, 张连峰. 心脏特异性表达KCNQ1V180L转基因小鼠的建立及表型分析[J]．中国比较医学杂志, 2012, 22(11): 16-22.