手足口病是肠道病毒引起的传染性、出疹性疾病，该病多发生于5岁以下的婴幼儿，可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡，个别手足口病患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症，而神经源性肺水肿、肺出血和心力衰竭被认为是导致死亡的主要原因。 　　引发手足口病的肠道病毒有20多种，包括柯萨奇病毒A组和B组、人肠道病毒71型（EV71）以及疱疹病毒、腺病毒等，其中以柯萨奇病毒A16型(CA16)和肠道病毒71型（EV71）最为常见。而绝大多数重症手足口病病例，均由EV71或CA16病毒感染所致。 EV71属于微小RNA病毒科，肠道病毒属，主要通过粪口传播，病毒最初定植于鼻咽部或胃肠道粘膜，侵入淋巴组织并在其中繁殖，进而引起第一次病毒血症。若机体免疫力差，病毒可扩散至全身组织器官，大量繁殖后再次入血，引起第二次病毒血症，最终侵犯靶器官，如脑、脑膜、脊髓、心肌和横纹肌以及皮肤黏膜组织，引起重症病变，尸检时主要病变为神经元坏死等。 日本学者指出PSGL-1蛋白是人的EV71病毒受体，在小鼠细胞内表达人PSGL-1蛋白可以提高小鼠细胞对EV71的敏感性。建立骨骼肌和神经组织表达人PSGL-1蛋白的转基因小鼠，可提高小鼠对病毒的敏感性，有望提高敏感小鼠的年龄，从而建立成年的EV71感染模型。

转基因小鼠构建 　　以人PSGL-1的mRNA为模板，经反转录获得人PSGL-1的cDNA，将其插入pCDNA3.1(+)载体的启动子下游，构建转基因载体。载体经测序验证正确后，将其线性化并经显微注射到C57BL/6J的受精卵中，用129做假孕受体，制备转基因小鼠。转基因小鼠提取鼠尾DNA进行基因鉴定（h-PSGL-F: 5’-CTACCAAAAGAGGTCTGTTC-3’；h-PSGL-R: 5’-ATGAGATGCAGACCATCTCG-3’），采用RT-PCR法检测组织内基因表达情况（h-PSGL-CF: 5’-GTGGTGCTGGCGGTCCG-3’；h-PSGL-CR: 5’-CAGGCCCCCATTGGCTGTG-3’），并用兔抗人PSGL-1的多克隆抗体检测组织内蛋白表达情况。 1、病毒制备 　　使用的临床分离株包括：1.FY0805a，2008年分离自安徽省阜阳市，GenBank存储号为HQ882182；2.JK2009,2009年分离自重庆市，GenBank存储号为HQ694982；使用的小鼠适应株为MP10，为FY0805a在小鼠体内连续传代10次后的小鼠适应株，GenBank存储号为HQ712020。EV71在人横纹肌瘤细胞（RD）中培养、繁殖，采用三次冻融法释放病毒，超速离心法富集病毒，病毒储存于超低温冰箱中，病毒储存液浓度为1×109 TCID50/ml。 2、实验动物 　　可使用SPF级别的10日龄乳鼠，品系为C57BL/6J-TgN(CMV-Homo-PSGL-1) -ZLFILAS，母鼠自然哺乳，在动物生物安全二级实验室内独立饲养。 3、病毒感染 　　根据预实验确定感染剂量，10日龄乳鼠经轻度麻醉后，经腹腔注射1×108 TCID50 的EV71JK2009,攻毒体积为100微升/只；小鼠适应株EV71 MP10的感染剂量为5×106 TCID50，注射体积为100微升/只，空白对照组注射等量RD细胞上清。

1.Jiangning Liu, Wei Dong, Xiongzhi Quan, Chunmei Ma, Chuan Qin, Lianfeng Zhang. Transgenic expression of human P-selectin glycoprotein ligand-1 is not sufficient for enterovirus 71 infection in mice. Arch Virol (2012) 157: 539-543.

阿尔茨海默症（Alzheimer disease，AD）是一种常见的中枢神经系统退行性变性疾病，其临床表现以退行性大脑认知，识别功能障碍为特征，有明显记忆力降低并伴随个性和行为的改变。AD约占全部痴呆病人的70%，位于心脏病、癌症和中风之后的第四位死亡性疾病，目前已成为发达国家主要社会问题之一。AD主要神经病理特征包括细胞外大量由β淀粉样蛋白（Aβ）组成的老年斑（Senile Plaques，SP）、神经细胞内神经原纤维丝缠结（Neurofibrillary Tangles，NFT）、神经细胞丢失，皮质动脉和小动脉的血管淀粉样变性及大脑皮质萎缩。

启动子为：Mouse prion protein（PrP） 靶基因信息：Human presenilin 1delta E9 mutation，PS1 deltaE9 构建信息： PrP-hPS1dE9转基因载体由本实验室构建，用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J的受精卵中，所得新生小鼠1周内剪鼠尾，提取基因组DNA，PCR鉴定hPS1dE9转基因动物的基因表型鉴定。

阿尔茨海默症（Alzheimer disease，AD）是一种常见的中枢神经系统退行性变性疾病，其临床表现以退行性大脑认知，识别功能障碍为特征，有明显记忆力降低并伴随个性和行为的改变。AD约占全部痴呆病人的70%，位于心脏病、癌症和中风之后的第四位死亡性疾病，目前已成为发达国家主要社会问题之一。AD主要神经病理特征包括细胞外大量由β淀粉样蛋白（Aβ）组成的老年斑（Senile Plaques，SP）、神经细胞内神经原纤维丝缠结（Neurofibrillary Tangles，NFT）、神经细胞丢失，皮质动脉和小动脉的血管淀粉样变性及大脑皮质萎缩。

启动子为：Mouse prion protein（PrP） 靶基因信息：（突变点）Mo/Hu APP Swedish mutations（K595N/M596L）+Hu PS1 deltaE9 构建信息： 利用PrP-hAPPK595N/M596L痴呆症模型小鼠和PrP-hPS1dE9痴呆症模型小鼠杂交培育而成。所得新生小鼠1周内剪鼠尾，提取基因组DNA，PCR鉴定APP/PS1转基因动物的基因表型鉴定，其中APP 基因PCR产物长344Kb，PS1基因PCR产物长608 Kb，保留阳性小鼠。

1. 宗园媛，王晓映，王海林，刘亚莉，黄澜，马春梅，张连峰，秦川。APP/PS双转基因阿尔茨海默病小鼠模型的老年斑及行为学动态分析。中国比较医学杂志，2008, 18（9）:8-12.

手足口病（hand, foot, and mouth disease, HFMD）是由肠道病毒引起的，以发热和手、足、口腔、臀部等部位出现皮疹、疱疹或疱疹性咽峡炎为主要特征的一种常见于小儿的急性传染病。手足口病多发生于入学前儿童，尤其是3岁以内的婴幼儿，少数患者会发展为重症，并发无菌性脑膜炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿、急性弛缓性麻痹和心肌炎等，死亡率和致残率较高。肠道病毒71型（enterovirus 71, EV71）是导致手足口病暴发的主要病原体，是一种高度嗜神经病毒，易导致神经系统感染，发展成重症，对重症死亡患者尸检表明脑干是其最易感染的部位，因此，重症手足口病患者表现出严重的神经系统并发症，以及肺出血、循环障碍、心脏损害等。

　　根据前期预实验结果确定攻毒量，建立重症EV71小鼠模型，9日龄BALB/c乳鼠轻度麻醉后，经腹腔注射104.5 TCID50临床分离株NX10-147 (GenBank登录号KJ004556)，攻毒剂量为250 μl/只；空白对照组乳鼠(n=12)腹腔注射等量RD细胞上清，其中3只取其血清作为对照组血清。分别在3、6、12 hpi 和1、2、3、5、7、9 dpi采集每组各3只乳鼠血清以备检测血清中的细胞因子。在3 dpi和5 dpi每组各剖杀3只乳鼠，立即取其脑干、脊髓、肺脏、后肢骨骼肌和空肠固定在4 %多聚甲醛中，以备组织病理学检测；同时，每组另剖杀3只乳鼠取以上组织冻存，以备病毒RNA提取和组织内病毒定载量测定。

过敏性紫癜（allegric puprura，AP），又称亨-舒综合症（Henoch-Schönlein purpura，HSP），是一种常见的血管变态反应性出血性疾病，以广泛的小血管炎为病理基础，皮肤紫癜、消化道粘膜出血、关节肿胀和肾炎等症状为其主要临床特征，是儿童中发病率最高的血管炎性病。流行病学研究提示，HSP的发病率为（10~22）/10万，好发年龄为3~10岁，并发症多，过敏性紫癜性肾炎（Henoch-Schönlein purpura nephritis，HSPN）是最严重的并发症。该病复发率高，病程迁延，患病率逐年升高，现代医学对其治疗无满意效果。 鉴于直接进行人体实验的局限性，在很大程度上需要通过动物实验进行，所以HSP动物模型在整个HSP的研究中具有举足轻重的作用。目前，关于过敏性紫癜动物模型构建的报道很少，因此对该病病因、发病机制、临床治疗评价和药物开发在一定程度上受到限制。

1．实验动物 1.5月龄日本大耳白兔24只，12只雌雄各半为模型组，12只雌雄各半为对照组，体重1.2～1.4kg，普通级动物房饲养。 2.模型构建 1）过敏体质的构建 中医热性药物干姜、荜茇、胡椒水煎剂以1:1:1的比例混合成15%的水溶液，4℃保存备用。动物适应1周后，模型组口服给药，1次/日，连续3周，对照组给以等量生理盐水，其它条件相同。 2）抗原致敏 腹腔注射卵白蛋白生理盐水与弗氏完全佐剂以1:1比例混合的乳化溶液1 mL，1次/周，连续3 周。对照组腹腔注射等量的生理盐水。 3）抗原激发过敏反应 腹腔注射致敏3周后，动物耳缘静脉和皮内分别注射1%和0.3%卵白蛋白生理盐水，激发过敏反应。之后观察动物皮肤红肿状况，照相存档。

1.李彦红，朱华，隋小龙，徐艳峰，杨亚军，孙井江，黄澜，徐玉环，韩云林，冯晓纯，秦川*.初步探讨过敏性紫癜兔模型的构建，中国实验动物学报，2013,21(5):36-41 2.李彦红，朱华，徐艳峰，黄澜，隋小龙，徐玉环，冯晓纯，秦川*.过敏性紫癜兔模型的免疫学改变及机制初探，中国实验动物学报，2013,21(6):65-69 3.Yanhong Li, Xiaochun Feng, Lan Huang, Hua Zhu, Yanfeng Xu, Xiaolong Sui, Yuhuan Xu, Yunlin Han, Chuan Qin*. Hematologic and immunological characteristics of Henoch-Scho¨nlein purpura in rat and rabbit models induced with ovalbumin based on type III hypersensitivity, Scientific Reports，2015，5(8862)：1- 6.

过敏性紫癜（allegric puprura，AP），又称亨-舒综合症（Henoch-Schönlein purpura，HSP），是一种常见的血管变态反应性出血性疾病，以广泛的小血管炎为病理基础，皮肤紫癜、消化道粘膜出血、关节肿胀和肾炎等症状为其主要临床特征，是儿童中发病率最高的血管炎性病。流行病学研究提示，HSP的发病率为（10~22）/10万，好发年龄为3~10岁，并发症多，过敏性紫癜性肾炎（Henoch-Schönlein purpura nephritis，HSPN）是最严重的并发症。该病复发率高，病程迁延，患病率逐年升高，现代医学对其治疗无满意效果。 目前关于HSP的不少研究仍处在低水平阶段，鉴于直接进行人体实验的局限性，在很大程度上需要通过动物实验进行，所以HSP动物模型在整个HSP的研究中具有举足轻重的作用。目前，关于过敏性紫癜动物模型构建的报道很少，因此对该病病因、发病机制、临床治疗评价和药物开发在一定程度上受到限制。

1．实验动物 SD大鼠，4周龄，体重75~95g，22只，雌雄各半，SPF级动物房饲养。 2．模型构建 1）过敏体质的构建 中医热性药物干姜、荜茇、胡椒水煎剂以1:1:1的比例混合成15%的水溶液，4℃保存备用。动物适应1周后，模型组口服给药，1次/日，连续3周，对照组给以等量生理盐水，其它条件相同。 2）抗原致敏 模型动物腹腔注射卵白蛋白生理盐水与弗氏完全佐剂以1:1比例混合的乳化溶液0.5mL，1次/周，连续3 周。对照组腹腔注射等量的生理盐水。 3）抗原激发过敏反应 腹腔注射致敏3周后，动物尾静脉和皮内分别注射1%和0.3%卵白蛋白生理盐水，激发过敏反应。之后观察动物皮肤红肿状况，照相存档。

1.李彦红，黄澜，朱华，徐艳峰，隋小龙，徐玉环，韩云林，冯晓纯，秦川*.血液免疫学指标在过敏性紫癜大鼠和兔模型及患儿体内的比较，中国比较医学杂志，2014,24(1)：62-67. 2.Yanhong Li, Xiaochun Feng, Lan Huang, Hua Zhu, Yanfeng Xu, Xiaolong Sui, Yuhuan Xu, Yunlin Han, Chuan Qin*. Hematologic and immunological characteristics of Henoch-Scho¨nlein purpura in rat and rabbit models induced with ovalbumin based on type III hypersensitivity, Scientific Reports，2015，5(8862)：1-6.

慢性炎症性皮肤病常见的有银屑病、湿疹、神经性皮炎、斑秃、系统性红斑狼疮（SLE)等。发病原因很多，如：感染、环境、内分泌、代谢、免疫功能异常及遗传等。 发病范围广，发病率高，仅银屑病的发病率就占世界人口的0.1%～3%，且反复发作，难以治愈，给患者带来极大的痛苦，严重影响生活质量，是医学上仍未解决的难题之一，越来越受到人们的关注。 目前对慢性炎症性皮肤病的研究多集中在基因工程小鼠模型，主要通过皮肤上皮细胞角蛋白启动子构建的转基因和基因敲除小鼠模型，这种模型通常仅基于单基因操作，而此类疾病被认为是多基因位点共同作用的结果，因此用这种小鼠模型来研究人类复杂炎症性皮肤病是有缺陷的。 也有一些自发突变模型小鼠，如：斑秃模型小鼠C3H /HeJ，狼疮模型小鼠MRL /lpr、NZB/W.F1等，银屑病样表型的自发突变小鼠鳞状皮肤小鼠（Ttc7fsn / Ttc 7fsn)、慢性增生性皮炎突变小鼠（Sharpincpdm/ Sharpincpdm)、纯合皮质突变小鼠（Scd1ab /Scd1ab)等，其表型及病理改变各不相同，均只能反映人类炎症性皮肤病复杂的病理生理改变的一部分，且在应用过程中有一定的局限性。如斑秃模型小鼠外显率低，发病不稳定；狼疮模型小鼠来源困难，价格昂贵；银屑病模型小鼠在皮损浸润的炎细胞中缺乏T细胞，并且抗银屑病的药物治疗无效，因此它们也不是理想的动物模型。

　　KM突变小鼠种鼠F0与KM小鼠杂交繁殖得到F1代杂合小鼠；再用F1代杂合小鼠自交得到F2代；然后用F1杂合雌鼠与F2代突变雄鼠交配得到F3代；同样用同窝F3代突变雄鼠与杂合雌鼠交配得到F4代小鼠等，自F3代开始同窝互交，连续繁殖至20代，培育KM突变小鼠的近交系，使群体基因达到高度纯合和稳定遗传。

1.李彦红，刘颖，黄澜，等.KM突变小鼠慢性炎症性皮肤病的免疫学改变[J]. 中国实验动物学报.2012, 20 (2):54-58.

手足口病（hand, foot, and mouth disease, HFMD）是由肠道病毒引起的，以发热和手、足、口腔、臀部等部位出现皮疹、疱疹或疱疹性咽峡炎为主要特征的一种常见于小儿的急性传染病。手足口病多发生于入学前儿童，尤其是3岁以内的婴幼儿，肠道病毒71型（enterovirus 71, EV71）是导致手足口病暴发的主要病原体，EV71 手足口病是急性自限性疾病，绝大多数病人会自然痊愈，少数患者会发展为重症，并发无菌性脑膜炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿、急性弛缓性麻痹和心肌炎等，死亡率和致残率较高。

　　采用EV71临床分离株（NX10-36）病毒建立轻症小鼠模型，用104.5 TCID50/ml的病毒滴度经腹腔注射感染9日龄BALB/c乳鼠，6 dpi轻症小鼠发生竖毛的临床表现；对轻症EV71小鼠模型连续观察14天，绘制生存率（图1A），体重增长曲线（图1B），临床评分（图1C）。所有小鼠存活到14 dpi，并且其体重增长与空白对照组小鼠无差异（p > 0.05）。

银屑病（牛皮癣，Psoriasis）是一种以表皮过度增生和真皮慢性炎症反应为特征的常见皮肤病。白色人种发病率较高约为2-5%，黄种人发病率较低约为0.5%, 难根治，易复发。目前发病原因不明，与呼吸道感染，胃炎，饮食习惯，精神紧张、忧虑，不当使用激素药物等有关。

　　用PCR的方法克隆人PLAU，PLAUR及鼠STAT3三种基因的开放阅读框，均插入表皮特异性表达启动子下游构建人PLAU，PLAUR及鼠STAT3三种表达载体。用显微注射法将三种混合后的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，制备三转基因银屑病小鼠。

高祥,刘宁,葛文萍,潘烁,张海涛,张连峰,董伟.三转基因银屑病小鼠模型建立与表型分析[J].中国比较医学杂志,2015,25(7):11~15.

高血压是以体循环动脉压增高为主要表现的临床综合征，是严重危害人类健康的常见心血管病之一，目前全球高血压患者约有10亿，如不采取积极有效的预防措施，预计到2025年，全球的高血压患者可能会再增加80%。此外，高血压还是脑卒中、心肌梗死等心血管疾病以及慢性肾脏疾病等最主要的危险因素。因此，高血压已经成为威胁人类生命健康的重要的公共卫生问题，其防治具有重要的现实意义。

　　用PCR的方法克隆人GRK4γ野生型、GRK4γR65L、GRK4γA142V和GRK4γA486V四种基因的开放阅读框，，均插入系统性表达的启动子下游构建人GRK4γ野生型、GRK4γR65L、GRK4γA142V和GRK4γA486V四种表达载体。用显微注射法将四种转基因载体分别注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，制备四种转基因小鼠。

鲍丹,董伟,刘宁,张旭,吕丹,张连峰.三种突变GRK4转基因的血压动态分析[J].中国实验动物学报,2013,21(5):

2002年在中国广东爆发的严重急性呼吸综合征（Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS）波及全世界34个国家。2003年4月16日，世界卫生组织根据包括中国内地和香港地区，加拿大、美国在内的11个国家和地区的13个实验室通力合作研究的结果，宣布重症急性呼吸综合征的病因是一种新型的冠状病毒，称为SARS冠状病毒。

　　SARS-CoV病毒株为PUMC01（Sino-1, GenBank Acc. #：AY350750），分离自一个死于北京协和医院的典型的SARS患者（PUMCH）。该病毒株通过RT-PCR、序列分析和电子显微镜方法鉴定为SARS-CoV。通过鼻腔喷雾方法感染动物。 感染后，每天检测肛温、血液学指标和胸部放射线。每日观察咳嗽、鼻腔分泌物、呕吐、皮疹、呼吸衰竭、呼吸困难、腹泻和食欲降低等情况。克他命（Ketamine）安乐死后取样检测。

[1]鲍琳琳,涂新明,蒋虹等.SARS冠状病毒分离培养和鉴定的实验研究[J].病毒学报,2005,21(1):31-34.DOI:10.3321/j.issn:1000-8721.2005.01.007. [2]秦川,佘铭鹏,朱华等.SARS-CoV恒河猴模型动物中组织病理学动态变化[J].中国实验动物学报,2005,13(3):132-135.DOI:10.3969/j.issn.1005-4847.2005.03.002. [3]魏强,王健伟,张扬清等.恒河猴感染SARS-CoV的病毒学、血清学检测[J].中国实验动物学报,2005,13(3):144-146.DOI:10.3969/j.issn.1005-4847.2005.03.005. [4]魏强,高虹,蒋虹等.SARS恢复猴和灭活疫苗免疫实验猴再次感染SARS-CoV研究[J].中国比较医学杂志,2006,16(11):641-644,封二.DOI:10.3969/j.issn.1671-7856.2006.11.001. [5]蒋虹,鲍琳琳,涂新明等.SARS-CoV感染猴模型病毒学研究[J].医学动物防制,2006,22(6):409-411.DOI:10.3969/j.issn.1003-6245.2006.06.007. [6]秦川,魏强,高虹等.SARS-CoV病毒抗体对恒河猴SARS-CoV的感染保护作用[J].中国比较医学杂志,2005,15(6):323-326.DOI:10.3969/j.issn.1671-7856.2005.06.001. [7]秦川,佘铭鹏,朱华等.SARS-CoV恒河猴模型动物中组织病理学动态变化[C].//中国实验动物学会第六届学术年会论文集.2004:38-45. [8]魏强,王健伟,张扬清等.SARS冠状病毒感染恒河猴的病毒、血清学检测[C].//中国实验动物学会第六届学术年会论文集.2004:46-48. [9]秦川,王建伟,魏强等.SARS冠状病毒感染恒河猴模型的建立[C].//中华医学会病理学分会第八次全国学术大会论文汇编.2004:80-81. [10]Liu L, Wei Q, Alvarez X, et al. Epithelial Cells Lining Salivary Gland Ducts Are Early Target Cells of Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus Infection in the Upper Respiratory Tracts of Rhesus Macaques . Journal of Virology. 2011;85(8):4025-4030. doi:10.1128/JVI.02292-10.

2002年在中国广东爆发的严重急性呼吸综合征（Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS）波及全世界34个国家。2003年4月16日，世界卫生组织根据包括中国内地和香港地区，加拿大、美国在内的11个国家和地区的13个实验室通力合作研究的结果，宣布重症急性呼吸综合征的病因是一种新型的冠状病毒，称为SARS冠状病毒。

　　SARS-CoV病毒株为PUMC01（Sino-1, GenBank Acc. #; AY350750），分离自一个死于北京协和医院的典型的SARS患者（PUMCH）。SARS-CoV PUMC01病毒通过鼻腔喷雾方法感染动物。Wistar大鼠、SD大鼠和Lewis大鼠三个品系的动物，每个品系分成4周龄和7周龄两个年龄组，每个年龄组又根据感染病毒剂量的不同，分为高剂量组和低剂量组。动物安乐死后，取肺、脾、肝、肠淋巴结和血液样品进行病毒拷贝数和病毒滴度检测。感染后第7、14、21、28天检测SARS-CoV的IgG抗体动物安乐死后，取肺、肝、脾、肾和肠淋巴结组织进行病理检查。

[1]朱华,高虹,邓巍等.SARS冠状病毒感染Lewis大鼠的实验研究[C].//中国实验动物学会第七届学术年会论文集.2006:170-174.