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CSTR:16397.09.0C01000687 SARS-CoV小鼠模型

2002年在中国广东爆发的严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)波及全世界34个国家。2003年4月16日,世界卫生组织根据包括中国内地和香港地区,加拿大、美国在内的11个国家和地区的13个实验室通力合作研究的结果,宣布重症急性呼吸综合征的病因是一种新型的冠状病毒,称为SARS冠状病毒

  SARS-CoV病毒株为PUMC01(Sino-1, GenBank Acc. #; AY350750),分离自一个死于北京协和医院的典型的SARS患者(PUMCH)。SARS-CoV PUMC01病毒通过鼻腔喷雾方法感染动物。BALB/c小鼠、ICR小鼠、昆明小鼠,SCID鼠和裸鼠,每个品系分成4周龄和7周龄两个年龄组,每个年龄组又根据感染病毒剂量的不同,分为高剂量组和低剂量组。动物安乐死后,取肺、脾、肝、肠淋巴结和血液样品进行病毒拷贝数和病毒滴度检测。感染后第7、14、21、28天检测SARS-CoV的IgG抗体动物安乐死后,取肺、肝、脾、肾和肠淋巴结组织进行病理检查。

[1]秦川,鲍琳琳,邓巍等.血管紧张素转换酶2在SARS-CoV感染中的功能(第2部分)--SARS-CoV在ACE2表达细胞中的复制和ACE2基因敲除对小鼠SARS-CoV感染的保护作用[J].中国比较医学杂志,2005,15(6):330-334. [2]杨秀红,邓巍,童攒等.人ACE2转基因小鼠对SARS-CoV的易感性[J].中国实验动物学报,2007,15(6):453-457. [3]杨秀红,朱华,黄澜等.老龄ICR小鼠对SARS-CoV的易感性[J].中国实验动物学报,2007,15(3):195-197.

CSTR:16397.09.0G02001122 过敏性哮喘诱导模型

过敏性哮喘(以下简称哮喘)属于I型超敏反应又被称作变态反应,病变主要表现在肺支气管,是以可逆性支气管痉挛和气道高反应性为特点的慢性炎症。病理表现为以嗜酸性粒细胞为主的炎细胞在肺组织大量浸润,杯状细胞增生、黏液过度分泌及气道重塑等。近年来,世界范围内哮喘发病率逐年攀升,对人类健康危害极大,哮喘研究日益受到重视, 作为哮喘机理及药物等研究的必备工具—动物模型发挥着重要的作用,模型的发展直接影响哮喘研究的进步。过敏性哮喘发病机制即I型超敏反应是该病模型的造模基础,在此基础上研究者根据研究目的选择不同的模型动物,卵蛋白、尘螨、花粉等不同变应原,哮喘发作、气道高反应性等不同阶段和气道阻力、Penh等不同指标检测方法及麻醉、清醒等不同动物生理状态,构建多种类型的模型。目前过敏性哮喘动物模型多样化且各有利弊,合理的选择是获得优秀研究成果的保证。

1. 实验动物 雄性SPF级挪威褐鼠,6 ~ 8周龄,体重140 ~ 150 g。 2. 模型构建 1)抗原致敏 挪威褐鼠按OVA混合Al(OH)3干粉(10+100mg/只)致敏液于第0天(d 0)和第5天(d5)在每只动物背部选取2点进行皮下注射,每点均注射0.2ml。 3)抗原激发过敏反应 于致敏后第35天将挪威褐鼠一起放入雾化箱中,雾化箱放入二级生物安全柜中将5% OVA 5mL加入压缩雾化吸入机,雾化吸入10分钟完成激发。激发完成后立即将挪威褐鼠转移至体积描记器中开始记录呼吸参数,持续记录16 h。

陶婧婧,徐燕锋,韩云林,徐玉环,秦川,高虹,张星东 . 清醒挪威褐鼠过敏性哮喘发作全程记录模型. 中国比较医学杂志, 2015,06.

CSTR:16397.09.0I02001121 a1 Na,K-ATPase转基因大鼠

高血压的症状因人而异。早期可能无症状或症状不明显,仅仅会在劳累、精神紧张、情绪波动后发生血压升高,并在休息后恢复正常。随着病程延长,血压明显的持续升高,逐渐会出现各种症状。此时被称为缓进型高血压病。缓进型高血压病常见的临床症状有头痛、头晕、注意力不集中、记忆力减退、肢体麻木、夜尿增多、心悸、胸闷、乏力等。当血压突然升高到一定程度时甚至会出现剧烈头痛、呕吐、心悸、眩晕等症状,严重时会发生神志不清、抽搐。这就属于急进型高血压和高血压危重症,多会在短期内发生严重的心、脑、肾等器官的损害和病变,如中风、心梗、肾衰等。症状与血压升高的水平并无一致的关系。

  构建wta1 Na,K-ATPase cDNA表达载体(图1)。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到Dahl Salt-sensitive大鼠的受精卵中,用Wistar大鼠作假孕受体,制备转基因大鼠。转基因大鼠出生后,提取基因组DNA。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。Southern blot检测转基因大鼠组织中wta1 Na,K-ATPase的表达(图2)。 图1 R-alpha1NK转基因载体构建 图2 R-alpha1NK转基因大鼠首建鼠southern blot鉴定 泳道1: 首建鼠Tg(wtα1)37;泳道2: 首建鼠Tg(wtα1)48;泳道3: 首建鼠Tg(wtα1)24.

1.Herrera VL, Xie HX, Lopez LV, Schork NJ, Ruiz-Opazo N., The a1 Na, K-ATPase Gene Is a Susceptibility Hypertension Gene in the Dahl Salt-sensitive HSD Rat. J. Clin. Inv. 1998 Sep 15; 102(6):1102-11.

CSTR:16397.09.0C01000900 人食管癌细胞EC9706红色荧光标记肿瘤模型 EC9706-DsRed

食管癌是常见的消化道肿瘤,全世界每年约有30万人死于食管癌。其发病率和死亡率各国差异很大。我国是世界上食管癌高发地区之一,每年平均病死约15万人。男多于女,发病年龄多在40岁以上。食管癌典型的症状为进行性咽下困难,先是难咽干的食物,继而是半流质食物,最后水和唾液也不能咽下。

  模型制作采用BALB/CA-nu裸小鼠,鼠龄5周,体重15—18 g,在无特定病原体(specific—pathogen free,SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养:EC9706细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体:chicken-β-actin- promoter-DsRed 图1红色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选:采用Lipofectamine 2000 Reagent转染EC9706细胞。转染后,用含G418的培养液筛选细胞,获得稳定表达RFP的细胞株,选择其中高表达的克隆株扩大培养(图2)。 图2红色荧光标记的EC9706细胞系(200×)   稳定高表达RFP的细胞,在荧光显微镜下均呈强荧光,并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆RFP细胞在无G418筛选压力下,传代数次后仍能稳定高水平表达RFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像:收集处于生长对数期的高表达细胞株,进行裸鼠皮下接种,采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

CSTR:16397.09.0C01000901 人食管癌细胞EC9706绿色荧光标记肿瘤模型 EC9706-eGFP

食管癌是常见的消化道肿瘤,全世界每年约有30万人死于食管癌。其发病率和死亡率各国差异很大。我国是世界上食管癌高发地区之一,每年平均病死约15万人。男多于女,发病年龄多在40岁以上。食管癌典型的症状为进行性咽下困难,先是难咽干的食物,继而是半流质食物,最后水和唾液也不能咽下。

  模型制作采用BALB/CA-nu裸小鼠,鼠龄5周,体重15—18 g,在无特定病原体(specific—pathogen free,SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养:EC9706细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体:chicken-β-actin- promoter-eGFP 图1绿色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选:采用Lipofectamine 2000 Reagent转染EC9706细胞。转染后,用含G418的培养液筛选细胞,获得稳定表达GFP的细胞株,选择其中高表达的克隆株扩大培养(图2)。 图2绿色荧光标记的EC9706细胞系(200×)   稳定高表达GFP的细胞,在荧光显微镜下均呈强荧光,并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下,传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像:收集处于生长对数期的高表达细胞株,进行裸鼠皮下接种,采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

CSTR:16397.09.0C01000919 人大细胞肺癌H460绿色荧光标记肿瘤模型 H460-eGFP

大细胞肺癌起源于支气管粘膜上皮,局限于基底膜内者称为原位癌。癌肿可向支气管腔内或和临近的肺组织生长,并可通过淋巴、血行或经支气管转移扩散。其生长速度和转移扩散的情况与具体的组织学类型、分化程度等生物学特性有一定关系。大细胞肺癌常发生于肺上叶,多为周围型,体积较大,边界清楚,分叶,少见空洞。根据其病理类型可分为4类:(1)大细胞神经内分泌癌 这是一类显示神经内分泌分化的大细胞癌。细胞较大,呈多角形,胞质嗜酸,核多形,核仁较明显,核分裂像多见,常见大面积坏死。免疫组化染色,神经内分泌标记阳性,电镜下可见神经内分泌颗粒;(2)基底细胞样癌 细胞较大,立方形或梭形,分叶状或实性巢状排列,周边部癌细胞呈栅栏状排列;(3)淋巴上皮瘤样癌 罕见。组织形态与鼻咽部淋巴上皮瘤样癌相同。癌细胞打,泡状核,核仁明显,细胞成片或呈巢状,癌巢内及间质中有淋巴细胞侵润;(4)透明细胞癌罕见。瘤细胞打,多角形,胞质透明或泡沫状,无粘液,伴或不伴糖原。伴横纹肌样表型的大细胞癌罕见。细胞核大,多形性,胞质丰富,有嗜酸性小球,免疫组织化学既表达上皮性抗原,也显示横纹肌表型。

  模型制作采用BALB/CA-nu裸小鼠,鼠龄5周,体重15—18 g,在无特定病原体(specific—pathogen free,SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养:H460细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体:chicken-β-actin- promoter-eGFP 图1绿色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选:采用Lipofectamine 2000 Reagent转染H460细胞。转染后,用含G418的培养液筛选细胞,获得稳定表达GFP的细胞株,选择其中高表达的克隆株扩大培养(图2)。 图2绿色荧光标记的H460-eGFP细胞系(200×)   稳定高表达GFP的细胞,在荧光显微镜下均呈强荧光,并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下,传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像:收集处于生长对数期的高表达细胞株,进行裸鼠皮下接种,采用活体荧光影像系统摄像动态观察。  

CSTR:16397.09.0C01000918 人大细胞肺癌H460红色荧光标记肿瘤模型 H460-DsRed

  大细胞肺癌起源于支气管粘膜上皮,局限于基底膜内者称为原位癌。癌肿可向支气管腔内或和临近的肺组织生长,并可通过淋巴、血行或经支气管转移扩散。其生长速度和转移扩散的情况与具体的组织学类型、分化程度等生物学特性有一定关系。大细胞肺癌常发生于肺上叶,多为周围型,体积较大,边界清楚,分叶,少见空洞。根据其病理类型可分为4类:(1)大细胞神经内分泌癌 这是一类显示神经内分泌分化的大细胞癌。细胞较大,呈多角形,胞质嗜酸,核多形,核仁较明显,核分裂像多见,常见大面积坏死。免疫组化染色,神经内分泌标记阳性,电镜下可见神经内分泌颗粒;(2)基底细胞样癌 细胞较大,立方形或梭形,分叶状或实性巢状排列,周边部癌细胞呈栅栏状排列;(3)淋巴上皮瘤样癌 罕见。组织形态与鼻咽部淋巴上皮瘤样癌相同。癌细胞打,泡状核,核仁明显,细胞成片或呈巢状,癌巢内及间质中有淋巴细胞侵润;(4)透明细胞癌罕见。瘤细胞打,多角形,胞质透明或泡沫状,无粘液,伴或不伴糖原。伴横纹肌样表型的大细胞癌罕见。细胞核大,多形性,胞质丰富,有嗜酸性小球,免疫组织化学既表达上皮性抗原,也显示横纹肌表型。

  模型制作采用BALB/CA-nu裸小鼠,鼠龄5周,体重15—18 g,在无特定病原体(specific—pathogen free,SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养:H460细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体:chicken-β-actin- promoter-DsRed 图1红色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选:采用Lipofectamine 2000 Reagent转染H460细胞。转染后,用含G418的培养液筛选细胞,获得稳定表达RFP的细胞株,选择其中高表达的克隆株扩大培养(图2)。 图2红色荧光标记的H460细胞系(200×)   稳定高表达RFP的细胞,在荧光显微镜下均呈强荧光,并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆RFP细胞在无G418筛选压力下,传代数次后仍能稳定高水平表达RFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像:收集处于生长对数期的高表达细胞株,进行裸鼠皮下接种,采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

CSTR:16397.09.0G16000430 SIVmac251-THC--BG颅内感染恒河猴模型 Rhesus Macaques Intracranially infected with SIVmac239

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SIVmac251-THC--BG,使用中国恒河猴PBMCs扩增制备,CEMx174细胞滴定TCID50为1×104/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:将SIVmac251-THC--BG病毒原液稀释至1 mL,经颅内接种恒河猴。 4、SIVmac251-THC--BG颅内感染猴样品采集和指标测定:在感染前和感染后10、17、24、28、42、56、84天采集EDTA抗凝血4mL,分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+细胞绝对数。 5、 SIVmac251-THC--BG颅内感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、SIVmac251-THC--BG颅内感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数。

CSTR:16397.09.0G16000431 SHIVchn19p4静脉途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intravenously infected with SHIVchn19p4

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SHIVchn19p4中国恒河猴细胞适应株,TZM-bl细胞检测病毒感染效价为1.5×104 TCID50/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:猴G0601V和G0602V经后肢静脉感染1ml (1×104 TCID50/ml)病毒。 4、 SHIVchn19p4静脉感染猴样品采集和指标测定:在感染前和感染后4、7、9、11、14、18、21、28、35、42、49、56、70、84及120d采集猴静脉血3ml(EDTA抗凝),用于外周血病毒载量、CD4+细胞绝对数及总结合抗体滴度测定。 5、 SHIVchn19p4静脉感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SHIVchn19p4静脉感染猴外周血CD4+绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数。 7、 SHIVchn19p4静脉感染恒河猴外周血总结合抗体滴度检测:恒河猴血浆样品从1:2开始2倍连续稀释后,用“人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)”检测交叉性体液免疫反应,高于Cut-off值的最大血浆稀释度定义为SHIV特异性总结合抗体滴度

1. 丛喆,陶真,刘浩,姚南,金光,陈霆,魏强. SHIVchn19p7中国恒河猴细胞适应株的制备和生物特性研究[J]. 医学动物防制. 2010. 26(8): 690-691. 2. 刘浩,刘强,丛喆,王卫,乔红伟,陈志伟,魏强。C亚型SHIVCHN19P4强毒株在中国恒河猴体内的传代研究。中国比较医学杂志,2011,21(4):6-11。Serial Passages of Virus Clade C SHIVCHN19P4 inChinese Rhesus Macaque. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE, 2011,21(4):6-11.

CSTR:16397.09.0G16000432 SHIV KU-1静脉途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intravenously infected with SHIV KU-1

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SHIV KU-1中国恒河猴细胞适应株,中国恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度为103.75 TCID50/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:用0.4ml SHIV KU-1病毒原液经后肢静脉接种恒河猴。 4、 SHIV KU-1静脉感染猴样品采集和指标测定:感染前和感染后按指定时间点采集EDTA抗凝血4mL,分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+细胞绝对数。 5、 SHIV KU-1静脉感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SHIV KU-1静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数

1. 丛喆,蒋虹,苏爱华,王卫,陈霆,薛婧,魏强。CXCR4嗜性SHIVKU-1病毒静脉感染中国恒河猴初步研究。中国比较医学杂志,2013,23(6):53-57.Characterization of a Chinese-origin rhesus macaque model of X4-tropic pathogenic SHIVKU-1 infection by intravenous injection. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE. 2013,23(6):53-57. 2. 丛喆,徐珮,董志会,陈霆,蒋虹,魏强.SHIVKU-1感染猴感染晚期血浆病毒分离结果分析.医学动物防制,2014,30(12):1361-1367.Analysis of the Virus Isolation Result from Late-stage Plasma of Rhesus Macaques Infected with SHIVKU-1. J Med Pest Control,2014,30(12):1361-1367.

CSTR:16397.09.0G16000447 基于HAART治疗的艾滋病潜伏感染恒河猴模型 Latent Infected Animal Model for AIDS with HAART

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、实验材料:SIVmac239病毒;选用体重4-6 kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 2、 静脉途径SIV恒河猴感染模型制作方法: 先用宠物用电推剪推去猴上肢采血部位的猴毛,左手抓住一侧后肢跗关节部位,使后肢皮下静脉怒张。用75%酒精酒精棉球消毒。右手拿吸取病毒液的注射器,针头沿静脉平行方向向向心端刺入血管,见回血后,左手放松,不再紧压,右手缓慢将病毒液推入。完毕后用干棉球压迫止血,将注射器拔出,弃在利器专用桶内。 3、 给药方法:将建立稳定的SIVmac239慢性感染的恒河猴,经皮下注射TFV/FTC/DTG,每天给药一次,连续给药6个月。 4、 样本收集和检测:定期收集外周血样本,提取病毒RNA和病毒DNA,测定血浆病毒载量、总病毒DNA、ALU-PCR和Q-VOA。

CSTR:16397.09.0G16000448 基于HIV融合抑制剂的艾滋病潜伏感染恒河猴模型 Latent Infected Animal Model for AIDS with HIV Fusion Inhibitor

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、实验材料:SHIVSF162P3病毒;选用体重4-6 kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 2、静脉途径SHIV恒河猴感染模型制作方法: 先用宠物用电推剪推去猴上肢采血部位的猴毛,左手抓住一侧后肢跗关节部位,使后肢皮下静脉怒张。用75%酒精酒精棉球消毒。右手拿吸取病毒液的注射器,针头沿静脉平行方向向向心端刺入血管,见回血后,左手放松,不再紧压,右手缓慢将病毒液推入。完毕后用干棉球压迫止血,将注射器拔出,弃在利器专用桶内。 3、给药方法:将建立稳定的SHIVSF162P3慢性感染的恒河猴,经肌肉注射3mg/kg的HIV融合抑制剂,每周给药一次,连续给药6个月。 4、样本收集和检测:定期收集外周血样本,提取病毒RNA和病毒DNA,测定血浆病毒载量和总病毒DNA

[1] Chong H, Xue J, Xiong S, Cong Z, Ding X, Zhu Y, Liu Z, Chen T, Feng Y, He L, Guo Y, Wei Q, Zhou Y, Qin C*, He Y*. A Lipopeptide HIV-1/2 Fusion Inhibitor with Highly Potent In Vitro, Ex Vivo, and In Vivo Antiviral Activity. J Virol. 2017 May 12;91(11):e00288-17. [2] Chong H, Xue J, Zhu Y, Cong Z, Chen T, Guo Y, Wei Q, Zhou Y, Qin C*, He Y*. Design of Novel HIV-1/2 Fusion Inhibitors with High Therapeutic Efficacy in Rhesus Monkey Models. J Virol. 2018 Jul 31;92(16):e00775-18. [3]Chong H, Xue J, Zhu Y, Cong Z, Chen T, Wei Q, Qin C*, He Y*. Monotherapy with a low-dose lipopeptide HIV fusion inhibitor maintains long-term viral suppression in rhesus macaques. PLoS Pathog. 2019 Feb 4;15(2):e1007552.