SPF级1-10日龄乳鼠，ICR、C57或Balb/c均可。

　　CA16在人横纹肌瘤细胞（RD）中培养、繁殖，采用冻融法释放病毒，超速离心法富集病毒。毒株为shzh05-1，2008年分离自深圳市，GenBank存储号为EU262658。

　　可使用SPF级别的1-10日龄乳鼠，品系包括ICR、C57BL6J、Balb/c，母鼠自然哺乳，在动物生物安全二级实验室内独立饲养。

　　根据预实验确定感染剂量，10日龄乳鼠经轻度麻醉后，经腹腔注射2.5×10⁷ TCID₅₀ 的CA16 shzh05-1,攻毒体积为100微升/只，空白对照组注射等量RD细胞上清。

感染后动物观察14天，记录体重变化、症状和死亡率。根据症状严重程度，参照以下标准对动物进行打分：

0，未见异常；1，竖毛；2，后肢迟缓无力；3.单后肢瘫痪；4，双后肢瘫痪；5，死亡。

分别在感染后第1天、3天、5天和7天处死动物，分离主要组织器官，提取RNA，采用实时荧光定量PCR法检测组织内病毒载量，记录病毒复制情况。PCR引物序列为：CA16-F1: GAAAAACCCTCGACACACTAG；CA16-R1: ATCAGCGTCCTTGCAATACTCG  (1095)

分别在感染后第3天、5天处死动物，分离主要组织器官，HE染色观察病理改变。

　　动物自感染后第3天开始出现症状，表现为体重增长变缓、弓背竖毛、后肢行动迟缓至瘫痪、死亡等症状（图1）。感染后第4天时，动物全部表现出后肢瘫痪、停止进食等症状，感染后第5天动物开始出现死亡，在10天内全部死亡。

　　感染后最初在外周血中检测到CA16病毒，随后，血液中病毒载量逐渐下降。各组织中病毒载量在第3天和第5天达到高峰，其中骨骼肌内病毒载量最高，在第3天可达到10⁸ copies/mg组织，脑中病毒载量在第5天达到高峰，可达10⁶ copies/mg组织，表明了病毒感染引发病毒血症后，病毒经血液向组织扩散，并在组织内复制。脑内病毒的高峰期滞后于骨骼肌，表明病毒经肌肉内神经元逆向轴突传递至脑内，而非病毒经血液直接扩散至脑部（图2）。

此外，在心脏、肝脏、肺、肾脏和脾中均可检测到病毒核酸。

图1. CA16感染乳鼠后的症状观察。A, 小鼠在感染后第5天时状态；B，感染后动物体重随时间变化曲线；C，感染后动物的症状评分随时间变化曲线。

图2. CA16感染乳鼠后，第3天和第5天各组织内病毒载量。

　　感染第5天时，处死动物，观察各组织的病理改变。小鼠的肺、肾和脊髓内未见与病毒感染有关的病变。心脏内表现为局灶性心肌纤维变性坏死，少量炎细胞浸润；肝内局部肝细胞发生轻度空泡变性，可见肝实质中发生轻度的髓外造血；脾脏髓外造血增多；骨骼肌的肌纤维肿胀、坏死断裂、肌纤维之间可见大量炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，也可见巨噬细胞等炎性细胞、坏死性肌炎；脑内未见与病毒感染有关病变，发现轻度血管源性水肿，可能与缺血缺氧有关；部分肠上皮细胞出现空泡变性。

图3. 动物感染CA16后第5天时各组织内的病理改变情况。A,心脏；B，脑；C,小肠；D，肝脏；E，脾脏；F，骨骼肌.