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艾滋病人源化小鼠模型 HIV infected humanized immune system mouse models

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1.  NRG小鼠饲养:NRG小鼠需要饲养在隔离器或者单独的房间IVC中。 2.纯化造血干细胞:用CD34纯化干细胞试剂盒,纯化脐带血中造血干细胞,纯化的细胞当天移植。 3.  将 4-6 周NRG小鼠提前2小时辐照,剂量是 1.5Gy。 4.将纯化的 CD34+造血干细胞尾静脉注入照射后的小鼠体内,每只小鼠注射1×105 细胞。 5.12周后,采血检测人细胞的比例:抗小鼠 PE-CD45;抗人 APC CY7-CD45;抗人 APC-CD3。 6.  麻醉小鼠,用HIV病毒,静脉感染。 7.感染4周后,检测HIV病毒的RNA

1. Cheng L, Yu H, Li G, Li F, Ma J, Li J, Chi L, Zhang L, Su L. (2017). "Type I interferons suppress viral replication but contribute to T cell depletion and dysfunction during chronic HIV-1 infection." JCI Insight 2(12). 2. Cheng L, Ma J, Li J, Li D, Li G, Li F, Zhang Q, Yu H, Yasui F, Ye C, Tsao LC, Hu Z, Su L, Zhang L. (2017). "Blocking type I interferon signaling enhances T cell recovery and reduces HIV-1 reservoirs." J Clin Invest 127(1): 269-279.

CSTR:16397.09.0G16000433 SHIV-KB9静脉途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intravenously infected with SHIV-KB9

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SHIV-KB9中国恒河猴细胞适应株,RT-PCR测定病毒拷贝数为4.8×108copies/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:4只恒河猴编号分别为A0423、A0424、A0425和A0426。病毒原液依次用无血清1640培养液做10倍系列稀释。经后肢静脉感染,每只猴注射1mL稀释好的病毒液。A0423-A0426分别注射10-1-10-4病毒液1mL。持续测定8个月。 4、 SHIV-KB9静脉感染猴样品采集和指标测定:在感染前和感染后3、7、10、14、17、21、28、35、42、49、56、70及84天采集猴静脉血6mL,3mL EDTA抗凝,用于病毒载量和CD4+/CD8+值测定。 5、 SHIV-KB9静脉感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SHIV-KB9静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数。

1. 王卫, 刘强,许琰,冯育芳,丛喆,佟巍,蒋虹,杨贵波,魏强,秦川。SHIV-KB9感染中国恒河猴动物模型的建立。中国比较医学杂志,2011,21(2):1-6。Establishment of a Chinese-Origin Rhesus Macaque Model of SHIV-KB9 Virus Infection. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE, 2011,21(2):1-6. 2. 丛喆,陶真,王卫,陈霆,金光,姚南,苏爱华,魏强。SHIV-KB9病毒中国恒河猴细胞适应株的制备。中国畜牧兽医,2012,39(3):23-27. The Propagation and Evaluation of SHIV-KB9 adapative virus stock in Chinese original Rhesus Macaques. CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE. 2012,39(3):23-27. 3. Yue Li,Qiang Liu,Zhenwu Luo,Yan meng Feng,Zhe Li,Qiang Wei and Y iming Shao. Partial Protection of SHIV-Infected Chinese Rhesus Macaques Against Super-Infection with Heterologous SHIV Isolate. Current HIV Research,2012,10,627-635. 4. Wang W, Cong Z, Jiang H, Chen T, Jin G, Xiong J, Qin C, Wei Q. Comparison of viral burden and disease progression in Chinese-origin rhesus macaques infected with common experimentally applied chimeric virus: SHIV-1157ipd3N4, SHIV-162P3, or SHIV-KB9. J Med Primatol.2014 Aug;43(4):247-57.

CSTR:16397.09.0G16000434 RT-SHIV/TC静脉途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intravenously infected with RT-SHIV/TC

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为RT-SHIV/TC中国恒河猴细胞适应株,中国恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度为5×103 TCID50/mL。 2、感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、感染方法:用200 TCID50的RT-SHIV/TC经后肢静脉感染恒河猴。 4、RT-SHIV/TC静脉感染猴样品采集和指标测定:在感染前和感染后3、7、10、14、17、21、28、35、42、50、66、84及98d采集EDTA抗凝血4mL,分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+细胞绝对数。  5、 RT-SHIV/TC静脉感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。  6、 RT-SHIV/TC静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数。

1. 姚南,王卫,丛喆,陈霆,金光,陶真,陈志伟,魏强。RT-SHIV 感染中国恒河猴及体内传代。中国比较医学杂志,2011,21(4):16-20。RT-SHIV Infected and Passaged in Chinese-Origin Rhesus Monkeys. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE, 2011,21(4):16-20. 2. Wang W, Yao N, Cong Z, Jiang H, Qin C, Wei Q. Prophylactic and therapeutic effect of AZT/3TC in RT-SHIV infected Chinese-origin rhesus macaques. AIDS Res Ther. 2014 Mar 4;11(1):12.

CSTR:16397.09.0G16000435 SHIV-1157ipd3N4阴道途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intravaginally infected with SHIV-1157ipd3N4

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株SHIV-1157ipd3N4,病毒原液滴度为1×106 TCID50/mL(TZM-bl细胞滴定)。 2、感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:将麻醉好的实验猴放在操作台上,动物采取俯卧位,后肢抬高,暴露阴道口。用2mL预冷的无菌PBS清洗阴道。再将稀释好的适当浓度的病毒液1mL缓慢推入。实验猴保持此姿势30min。 4、 SHIV-1157ipd3N4阴道感染猴样品采集和指标测定:感染采取小量多次的方法,共感染11次。前3次使用20TCID50的SHIV1157ipd3N4病毒,后8次使用10TCID50的病毒,间隔4-8d,进行阴道感染。在每次感染前及11次感染结束后定期采EDTA抗凝血3ml,分别测定CD348及血浆病毒载量。 5、 SHIV-1157ipd3N4阴道感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SHIV-1157ipd3N4阴道感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数

丛喆,蒋虹,金光,王卫,高虹,姚南,陶真,陈霆,杨志伟,Sylvain.Fleury,Anick Chalifour,Ruth.M.Ruprecht,魏强,秦川。SHIV1157ipd3N4小量多次阴道粘膜感染中国猕猴的初步研究。实验动物与比较医学,2011,31(1):38-42。Efficient Repeated Low-dose Intravaginal Infection with SHIV1157ipd3N4 inRhesus Monkey. Laboratory Animal and Comparati

CSTR:16397.09.0G16000436 SHIV-1157ipd3N4直肠途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intrarectally infected with SHIV-1157ipd3N4

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株SHIV-1157ipd3N4,病毒原液滴度为1×106 TCID50/mL(TZM-bl细胞滴定)。 2、感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:将麻醉好的实验猴放在操作台上,动物采取俯卧位以保证直肠粘膜充分暴露,缓慢将SHIV-1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株的稀释液注入肛窦处,实验猴保持此姿势30min。 4、 SHIV-1157ipd3N4直肠感染猴样品采集和指标测定:感染采取小量多次的方法,共接种13次,前3次接种的病毒浓度为10TCID50/mL,然后20TCID50/mL接种5次,再50TCID50/mL接种4次,最后对仍未感染的G1023R 100 TCID50/mL接种1次,每次接种间隔4-7d。在每次感染前及13次感染结束后定期采EDTA抗凝血3ml,分别测定CD348及血浆病毒载量。 5、 SHIV-1157ipd3N4直肠感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SHIV-1157ipd3N4直肠感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数

1. 赵长城,高锡强,吴芳新,张伟伦,薛婧,魏强,秦川. 白细胞介素21对SHIV 感染的恒河猴外周血CD8+T 细胞分泌γ干扰素的影响[J]. 中国比较医学杂志. 2012.22(4): 5-9. 2. 赵长城,高锡强,薛婧,丛喆,张伟伦,苏爱华,陈霆,魏强,秦川. IL-21对恒河猴SHIV 特异性CD8+ T细胞毒性效应的影响[J]. 中国实验动物学报. 2012. 20(5): 29-34. 3. Yue Li,Qiang Liu,Zhenwu Luo,Yan meng Feng,Zhe Li,Qiang Wei and Y iming Shao. Partial Protection of SHIV-Infected Chinese Rhesus Macaques Against Super-Infection with Heterologous SHIV Isolate. Current HIV Research,2012,10,627-635. 4. Zhao CC, Xue J, Cong Z, Gao XQ, Zhang WL, Chen T, Wu FX, Xiong J, Ju B, Su A, Wei Q, Qin C. Circulating IL-21 levels increase during early simian-human immunodeficiency virus infection in macaques. Arch Virol. 2013 Apr;158(4):853-8.

CSTR:16397.09.0G16000437 SHIV-1157ipd3N4静脉途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intravenously infected with SHIV-1157ipd3N4

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SHIV-1157ipd3N4,中国恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度为5×102 TCID50/mL。 2、感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:10只恒河猴随机分为6个剂量组,由10-1至10-6,分别经后肢静脉感染稀释好的病毒液1mL。G1005V、G1006V、G1007V(10-1 ,50TCID50),G1008V、G1009V 、G1010V(10-2,5TCID50),G1011V、G1012V、G1013V(10-3,0.5TCID50),G1014V(10-4,0.05TCID50)。 4、 SHIV-1157ipd3N4静脉感染猴样品采集和指标测定:在感染前和感染后7、14、21、28、42、56、70及84d采集EDTA抗凝血4mL,分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+细胞绝对数和血浆结合抗体水平。  5、 SHIV-1157ipd3N4静脉感染猴血浆病毒载量的测定:TRIzol法提取血浆中病毒RNA,Quantitect SYBR Green RT-PCR Kit测定血浆病毒RNA载量。 6、 SHIV-1157ipd3N4静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数。 7、 SHIV-1157ipd3N4静脉感染恒河猴外周血总结合抗体滴度检测:恒河猴血浆样品灭活后系列稀释,用“人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)”检测交叉性体液免疫反应,高于Cut-off值的最大血浆稀释度定义为SHIV特异性总结合抗体滴度

1. 丛喆,蒋虹,金光,陈霆,王卫,陶真,姚南,熊竞,吴芳新,陈志伟,魏强。SHIV1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株静脉感染中国恒河猴有效浓度的确定。中国比较医学杂志,2011,21(4):12-15。Titration of a Stock by Intravenous Inoculation of Chinese-Origin Rhesus Macaques. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE, 2011,21(4):12-15. 2. Xue J, Cong Z, Xiong J, Wang W, Jiang H, Chen T, Wu F, Liu K, Su A, Ju B, Chen Z, Couto MA, Wei Q, Qin C. Repressive effect of primary virus replication on superinfection correlated with gut-derived central memory CD4(+) T cells in SHIV-infected Chinese rhesus macaques. PLoS One. 2013 Sep 2;8(9):e72295. 3. Wang W, Cong Z, Jiang H, Chen T, Jin G, Xiong J, Qin C, Wei Q. Comparison of viral burden and disease progression in Chinese-origin rhesus macaques infected with common experimentally applied chimeric virus: SHIV-1157ipd3N4, SHIV-162P3, or SHIV-KB9. J Med Primatol.2014 Aug;43(4):247-57.

CSTR:16397.09.0G16000438 SHIVSF162P3阴道途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intravaginally infected with SHIVSF162P3

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SHIVSF162p3中国恒河猴细胞适应株,中国恒河猴PBMCs滴定病毒原液TCID50滴度为1×104 TCID50/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:将麻醉好的实验猴放在操作台上,动物采取俯卧位,后肢抬高,暴露阴道口。用2mL预冷的无菌PBS清洗阴道。再将稀释好的适当浓度的病毒液1mL缓慢推入。实验猴保持此姿势30min。 4、 SHIVSF162p3阴道感染猴样品采集和指标测定:感染采取小量多次的方法,共感染13次。前6次使用20TCID50的SHIVSF162p3,后7次使用30TCID50的SHIVSF162p3,间隔4-7d,进行阴道感染。在每次感染前及13次感染结束后,采EDTA抗凝血3mL,分别测定外周血CD4+/CD8+比值及血浆病毒载量。 5、 SHIVSF162p3阴道感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SHIVSF162p3阴道感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数。

1. 丛喆,刘浩,朵建英,王卫,蒋虹,高虹,杨志伟,Sylvain Fleury,魏强,秦川。B亚型SHIVSF162p3中国恒河猴小剂量多次阴道粘膜感染。中国比较医学杂志,2011,21(2):44-48。Efficient Repeated Low-Dose Intravaginal Infection with SHIVSF162p3 inChinese-Origin Rhesus Macaques. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE, 2011,21(2):36-43. 2. Bomsel M, Tudor D, Drillet AS, Alfsen A, Ganor Y, Roger MG, Mouz N, Amacker M, Chalifour A, Diomede L, Devillier G, Cong Z, Wei Q, Gao H, Qin C, Yang GB, Zurbriggen R, Lopalco L, Fleury S. Immunization with HIV-1 gp41 subunit virosomes induces mucosal antibodies protecting nonhuman primates against vaginal SHIV challenges. Immunity. 2011 Feb 25;34(2):269-80.

CSTR:16397.09.0G16000439 SHIVSF162P3直肠途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intrarectally infected with SHIVSF162P3

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SHIVSF162p3中国恒河猴细胞适应株,中国恒河猴PBMCs滴定病毒原液TCID50滴度为1×104 TCID50/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:将麻醉好的实验猴放在操作台上,动物采取俯卧位以保证直肠粘膜充分暴露,缓慢将SHIVSF162p3中国恒河猴细胞适应株的稀释液注入肛窦处,实验猴保持此姿势30min。 4、 SHIVSF162p3直肠感染猴样品采集和指标测定:感染采取小量多次的方法,共感染21次。前3次接种的病毒浓度为1 TCID50/mL,然后2 TCID50/mL接种3次,10 TCID50/mL接种3次,20 TCID50/mL接种3次,最后30 TCID50/mL接种5次,每次接种间隔4-7d。在每次感染前及21次感染结束后,采EDTA抗凝血3mL,分别测定外周血CD4+/CD8+比值及血浆病毒载量。 5、 SHIVSF162p3直肠感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SHIVSF162p3直肠感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数。

1. 熊竞,丛喆,王卫, 陈霆,吴芳新,刘克剑,苏爱华,鞠斌,魏强。SHIVSF162P3病毒感染急性期复制水平与慢性期CD4+T细胞亚群分布及频度相关性分析。中国病毒病杂志,2012,2(5):354-359。Experimental infection of SHIVSF162p3 inrhesus macaques: correlation analysis of the viral RNA levels in the acute phase and the distribution of CD4+T cell subsets in the chronic phase. Chin J Viral Dis, 2012,2(5):354-359. 2. Xue J, Cong Z, Xiong J, Wang W, Jiang H, Chen T, Wu F, Liu K, Su A, Ju B, Chen Z, Couto MA, Wei Q, Qin C. Repressive effect of primary virus replication on superinfection correlated with gut-derived central memory CD4(+) T cells in SHIV-infected Chinese rhesus macaques. PLoS One. 2013 Sep 2;8(9):e72295.

CSTR:16397.09.0G16000440 SHIVSF162P3静脉途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intravenously infected with SHIVSF162P3

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SHIVSF162p3中国恒河猴细胞适应株,中国恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度为5×103 TCID50/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:10只恒河猴随机分为6个剂量组,由10-1至10-6,分别经后肢静脉感染稀释好的病毒液1mL。G0802V(10-1,500TCID50)、G0803V、G0804V(10-2,50TCID50),G0805V、G0806V(10-3,5TCID50),G0807V、G0808V(10-4,0.5TCID50),G0809V、G0810V(10-5,0.05TCID50),G0811V(10-6,0.005TCID50)。 4、 SHIVSF162p3静脉感染猴样品采集和指标测定:在感染前和感染后7、14、21、28、42、56、70及84d采集EDTA抗凝血4mL,分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+细胞绝对数。 5、 SHIVSF162p3静脉感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SHIVSF162p3静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数。

1. 丛喆,蒋虹,王卫,陈霆,金光,陶真,姚南,熊竞,吴芳新,耿祥飞,魏强. SHIVSF162p3中国恒河猴细胞适应株静脉感染中国恒河猴有效浓度的确定[J]. 医学动物防制. 2010. 26(10): 883-884. 2. 熊竞,丛喆,王卫, 陈霆,吴芳新,刘克剑,苏爱华,鞠斌,魏强。SHIVSF162P3病毒感染急性期复制水平与慢性期CD4+T细胞亚群分布及频度相关性分析。中国病毒病杂志,2012,2(5):354-359。Experimental infection of SHIVSF162p3 inrhesus macaques: correlation analysis of the viral RNA levels in the acute phase and the distribution of CD4+T cell subsets in the chronic phase. Chin J Viral Dis, 2012,2(5):354-359. 3. Xue J, Cong Z, Xiong J, Wang W, Jiang H, Chen T, Wu F, Liu K, Su A, Ju B, Chen Z, Couto MA, Wei Q, Qin C. Repressive effect of primary virus replication on superinfection correlated with gut-derived central memory CD4(+) T cells in SHIV-infected Chinese rhesus macaques. PLoS One. 2013 Sep 2;8(9):e72295. 4. Wang W, Cong Z, Jiang H, Chen T, Jin G, Xiong J, Qin C, Wei Q. Comparison of viral burden and disease progression in Chinese-origin rhesus macaques infected with common experimentally applied chimeric virus: SHIV-1157ipd3N4, SHIV-162P3, or SHIV-KB9. J Med Primatol.2014 Aug;43(4):247-57.

CSTR:16397.09.0G16000441 SIVmac239直肠途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intrarectally infected with SIVmac239

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SIVmac239中国恒河猴细胞适应株,使用中国恒河猴PBMCs扩增制备,CEMx174细胞滴定TCID50为3×105/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:将麻醉好的实验猴放在操作台上,动物采取俯卧位以保证直肠粘膜充分暴露,缓慢将SIVmac239中国恒河猴细胞适应株的稀释液注入肛窦处,实验猴保持此姿势30min。 4、 SIVmac239直肠感染猴样品采集和指标测定:用DMEM培养基稀释成100TCID50/3mL和1000TCID50/3mL两种浓度,采用小剂量多次直肠暴露的方式感染,3mL/只。共接种10次,2次/周。在每次感染前及10次感染结束后定期采EDTA抗凝血3ml,分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+和CD8+细胞绝对数。 5、 SIVmac239直肠感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SIVmac239直肠感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+和CD8+细胞绝对数。

1. 刘浩,刘强,丛喆,王卫,乔红伟,陈志伟,魏强. 模拟HIV性传播特点的SIVmac239恒河猴直肠粘膜感染[J]. 中国实验动物学报. 2010,18(2):100-104. 2. Chen S, Lai C, Wu X, Lu Y, Han D, Guo W, Fu L, Andrieu JM, Lu W. Variability of bio-clinical parameters in Chinese-origin Rhesus macaques infected with simian immunodeficiency virus: a nonhuman primate AIDS model. PLoS One. 2011;6(8):e23177. 3. 高锡强,傅春燕,薛婧,王卫,陈霆,魏强. SIVmac239 病毒经不同途径感染恒河猴急性期CD4 + T细胞数量与其细胞表面CD95表达量的变化关系[J]. 中国比较医学杂志. 2012. 22(10): 14-18. 4. 王卫,刘克剑,吴芳新,丛喆,陈霆,魏强。猴免疫缺陷病毒(SIVmac239)多次直肠暴露对机体细胞免疫的影响。中国比较医学杂志,2014,24(8):1-6. Effect of repeated rectal exposure of low-dose simian immunodeficiency virus on the systemic cellular immunity in monkeys. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE. 2014,24(8): 1-6.

CSTR:16397.09.0G16000442 SIVmac239静脉途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intravenously infected with SIVmac239

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SIVmac239中国恒河猴细胞适应株,使用中国恒河猴PBMCs扩增制备,CEMx174细胞滴定TCID50为3×105/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:将SIVmac239病毒原液1:100稀释至1 mL,经后肢静脉接种恒河猴。 4、 SIVmac239静脉感染猴样品采集和指标测定:在感染前和感染后10、17、24、28、42、56、84天采集EDTA抗凝血4mL,分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+细胞绝对数。 5、 SIVmac239静脉感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SIVmac239静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数。

1. Chen S, Lai C, Wu X, Lu Y, Han D, Guo W, Fu L, Andrieu JM, Lu W. Variability of bio-clinical parameters in Chinese-origin Rhesus macaques infected with simian immunodeficiency virus: a nonhuman primate AIDS model. PLoS One. 2011;6(8):e23177. 2. 高锡强,傅春燕,薛婧,王卫,陈霆,魏强. SIVmac239 病毒经不同途径感染恒河猴急性期CD4 + T细胞数量与其细胞表面CD95表达量的变化关系[J]. 中国比较医学杂志. 2012. 22(10): 14-18.

CSTR:16397.09.0G16000443 SIVmac251阴道途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intravaginally infected with SIVmac251

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SIVmac251中国恒河猴细胞适应株,病毒原液TCID50为2×107/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:将麻醉好的实验猴放在操作台上,动物采取俯卧位,后肢抬高,暴露阴道口。用2mL预冷的无菌PBS清洗阴道。再将1mL SIVmac251病毒原液缓慢推入。实验猴保持此姿势30min。 4、 SIVmac251阴道感染猴样品采集和指标测定:在感染前和感染后3、7、10、14、17、21、28、42、56天采集EDTA抗凝血4mL,分别测定血浆病毒载量、CD4+/CD8+比值及血浆抗体测定。 5、 SIVmac251阴道感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SIVmac251阴道感染猴外周血CD4+/CD8+比值测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值。 7、 SIVmac251阴道感染猴血浆抗体测定:免疫荧光法(IFA)检测感染猴血浆中的抗体水平。

冯育芳,王卫,许琰,等.SIVmac251不同途径感染恒河猴急性期实验研究[J].中国比较医学杂志,2007,17(2): 80-83.