SHIVchn19p4静脉途径感染恒河猴模型-

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标识符	CSTR:16397.09.0G16000431
资源中文名称	SHIVchn19p4静脉途径感染恒河猴模型
资源英文名称	Rhesus Macaques intravenously infected with SHIVchn19p4
疾病概述	艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至2015年5月31日，全国历年累计报告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题，艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。
实验动物背景信息	恒河猴又名孟加拉猴、猕猴或广西猴。学名为（Macaca mulatta），英文名rhesus macaque。分类所属为哺乳纲(Mammalia)，灵长目(Primates)，人猴猿亚目(Anthopoidea)，猴科(Cercopithecidae)，猕猴属(Macaca)。月经周期为28(1-4)天，发情期为11-12个月，怀孕期163天，产仔期3-6个月，胎产仔1-2只，出生重250-380g，哺乳期3-7个月。猕猴属中，恒河猴使用最广。因分子生物学进展，栗色猕猴用于生理、生化、遗传、血型及免疫等方面的研究更多，病理研究也不少，常用于医疗和药物实验等。在生物学研究方面可用于生理学、心理学、遗传学的各种研究。在生理学研究方面可用于脑功能、血液循环、呼吸生理、生殖生理、内分泌和老年学等各项实验。在医学研究方面可用于感染人类所特有的传染病，特别是其他动物不能复制的传染病药物学研究方面，预防小儿麻痹的糖丸，恒河猴是唯一的试验对象，人类避孕药物的研究，用恒河猴作试验是极为理想的，此外，恒河猴还常用于放射病出血和骨髓移植的实验。（一）传染病学研究（二）药理学和毒理学研究（三）生殖生理研究（四）口腔医学研究（五）行为学和高级神经活动研究（六）营养、代谢研究（七）老年病研究（八）器官移植和眼科研究（九）内分泌病和畸胎学研究（十）肿瘤学和环保研究 20世纪60年代出版的《猕猴文献录》中，涉及论文的多达五百余篇；在12种猕猴中，使用栗色猕猴的几乎占一半；试加分析，解剖文章占半数，生理学和生态学其次，再次是分类、地理分布、胚胎、进化、遗传和生化病理各有二十余篇，最少的是古生物和畜养、管理的文章。
模型制作方法	1、实验用病毒：感染毒株为SHIVchn19p4中国恒河猴细胞适应株，TZM-bl细胞检测病毒感染效价为1.5×10⁴ TCID₅₀/mL。 2、感染动物：选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A01、Mamu-A02、Mamu-B08、Mamu-B17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、感染方法：猴G0601V和G0602V经后肢静脉感染1ml (1×10⁴ TCID₅₀/ml)病毒。 4、 SHIVchn19p4静脉感染猴样品采集和指标测定：在感染前和感染后4、7、9、11、14、18、21、28、35、42、49、56、70、84及120d采集猴静脉血3ml（EDTA抗凝），用于外周血病毒载量、CD4+细胞绝对数及总结合抗体滴度测定。 5、 SHIVchn19p4静脉感染猴血浆病毒载量的测定：提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA，使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SHIVchn19p4静脉感染猴外周血CD4+绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+T细胞绝对数。 7、 SHIVchn19p4静脉感染恒河猴外周血总结合抗体滴度检测：恒河猴血浆样品从1：2开始2倍连续稀释后，用“人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）”检测交叉性体液免疫反应，高于Cut-off值的最大血浆稀释度定义为SHIV特异性总结合抗体滴度
模型表型数据	1、SHIVchn19p4静脉感染恒河猴外周血病毒载量结果 G0601V猴和G0602V猴均在感染后9d检测出病毒载量约为10⁵copies/mL，两只猴分别于19d和16d出现病毒载量高峰，峰值约为10⁶copies/mL。G0601V猴在感染后40d载量下降至最低，至感染后84d载量维持在10⁴ copies/ mL。G0602V猴在感染后33d-84的载量维持在10⁴ copies/ mL（图1）。图1 SHIVchn19p4静脉感染中国恒河猴外周血病毒载量结果 Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIVchn19p4 2、SHIVchn19p4静脉感染恒河猴CD4+细胞绝对数结果 G0601V猴CD4+ T 细胞数在SHIVchn19p4感染后围绕1300个/ul水平波动；G0602V猴 CD4+T细胞数在SHIVchn19p4感染后围绕1550个/ul水平上下波动（图2）。图2 SHIVchn19p4静脉感染中国恒河猴外周血CD4+T淋巴细胞绝对数 Fig.2 The CD4+ T cell counts (per l blood) in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIVchn19p4 3、SHIVchn19p4静脉感染恒河猴外周血总结合抗体滴度测定 G0601V猴的抗体在感染后19d开始出现，于感染后40d达到峰值，随后维持在较高水平；G0602V猴的抗体在感染后12d开始出现，随后抗体水平不断增高，直至感染后84d与G0601V猴的抗体水平较为接近（图3）。图3 SHIVchn19p4静脉感染中国恒河猴外周血总结合抗体滴度测定 Fig.3 The binding antibody in peripheral blood in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIVchn19p4
动物模型的评价与验证	通过静脉途径，病毒直接感染血液中的靶细胞，制备静脉途径艾滋病恒河猴感染模型，用于艾滋病研究。
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合作方式	合作研究
相关文章	1. 丛喆，陶真，刘浩，姚南，金光，陈霆，魏强. SHIVchn19p7中国恒河猴细胞适应株的制备和生物特性研究[J]. 医学动物防制. 2010. 26(8): 690-691. 2. 刘浩，刘强，丛喆，王卫，乔红伟，陈志伟，魏强。C亚型SHIVCHN19P4强毒株在中国恒河猴体内的传代研究。中国比较医学杂志，2011，21（4）：6-11。Serial Passages of Virus Clade C SHIVCHN19P4 inChinese Rhesus Macaque. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE, 2011，21（4）：6-11.
备注	所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。
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