肥胖症(obesity)是一种由多种因素引起的慢性代谢性疾病,以体内脂肪细胞的体积和细胞数增加,从而导致体脂占体重的百分比异常增高并在某些局部过多沉积脂肪为特点,早在1948年,WHO已将肥胖症列入疾病分类名单,2000年,WHO将吸烟,肥胖和艾滋病列为人类的三大杀手。

利用TALENs和显微注射技术,获得一只在Leptin编码区418- 425位碱基缺失的大鼠，由于同时产生了TGA终止密码子(图1b)，导致该蛋白C末端缺失了28个氨基酸。             图1, western blot检测Leptin+/+大鼠和Leptin-/-大鼠肝脏中leptin的表达。

1, 关菲菲 张旭 陈炜等, 利用TALENs技术制备瘦素基因敲除的大鼠,中国比较医学杂志,2013年8期23卷,44-48页。 2, 张丽 关菲菲 张旭等, 瘦素基因敲除肥胖大鼠的血糖及病理长期观察, 中国比较医学杂志, 2014年3期24卷,45-49页。

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤。原位癌高发年龄为30～35岁，浸润癌为45～55岁，近年来其发病有年轻化的趋势。常见有鳞癌、腺癌和腺鳞癌三种类型。（1）鳞癌：按照组织学分化分为Ⅲ级。Ⅰ级为高分化鳞癌，Ⅱ级为中分化鳞癌（非角化性大细胞型），Ⅲ级为低分化鳞癌（小细胞型），多为未分化小细胞。（2）腺癌：占宫颈癌15%～20%。主要组织学类型有2种。①黏液腺癌：最常见，来源于宫颈管柱状黏液细胞，镜下见腺体结构，腺上皮细胞增生呈多层，异型性增生明显，见核分裂象，癌细胞呈乳突状突入腺腔。可分为高、中、低分化腺癌。②恶性腺瘤：又称微偏腺癌，属高分化宫颈管黏膜腺癌。癌性腺体多，大小不一，形态多变，呈点状突起伸入人宫颈间质深层，腺上皮细胞无异型性，常有淋巴结转移。（3）腺鳞癌：占宫颈癌的3%～5%。是由储备细胞同时向腺细胞和鳞状细胞分化发展而形成。癌组织中含有腺癌和鳞癌两种成分。

模型制作采用BALB／cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：Hela细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin-promotor-eGFP 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent 转染Hela细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。 图1 表达GFP的Hela细胞株（200×） 稳定高表达GFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图1)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。每周观察一次，裸鼠麻醉后放入活体荧光系统摄像，Slide Book 4.0软件进行分析 4.5肿瘤体积测定：在接种的14、21、28和35d，分别用游标卡尺测量肿瘤块3个互相垂直直径A、B、C，代入下式计算肿瘤块的体积V：V=1／6πABC(V为体积，A、B、C为瘤体的3个互相垂直的直径)，并绘制肿瘤的生长曲线。 4.6肿瘤组织的HE和TUNEL染色：肿瘤生长5周后，剥取出移植瘤，制成石蜡切片并进行HE和TUNEL染色

1、李小颖，马春梅，张连峰，人宫颈癌细胞Hela移植模型肿瘤生长的荧光分析和卡尺测量的比较，中国比较医学杂志2010年1月第2O卷第1期，15-18。

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤。原位癌高发年龄为30～35岁，浸润癌为45～55岁，近年来其发病有年轻化的趋势。常见有鳞癌、腺癌和腺鳞癌三种类型。（1）鳞癌：按照组织学分化分为Ⅲ级。Ⅰ级为高分化鳞癌，Ⅱ级为中分化鳞癌（非角化性大细胞型），Ⅲ级为低分化鳞癌（小细胞型），多为未分化小细胞。（2）腺癌：占宫颈癌15%～20%。主要组织学类型有2种。①黏液腺癌：最常见，来源于宫颈管柱状黏液细胞，镜下见腺体结构，腺上皮细胞增生呈多层，异型性增生明显，见核分裂象，癌细胞呈乳突状突入腺腔。可分为高、中、低分化腺癌。②恶性腺瘤：又称微偏腺癌，属高分化宫颈管黏膜腺癌。癌性腺体多，大小不一，形态多变，呈点状突起伸入人宫颈间质深层，腺上皮细胞无异型性，常有淋巴结转移。（3）腺鳞癌：占宫颈癌的3%～5%。是由储备细胞同时向腺细胞和鳞状细胞分化发展而形成。癌组织中含有腺癌和鳞癌两种成分。

模型制作采用BALB／cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：Hela细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin-promotor-DsRed 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent 转染Hela细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达RFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。 图1 表达RFP的Hela细胞株（200×） 稳定高表达RFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆RFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达RFP(图1)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。

模型制作采用BALB/cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：SMMC-7721细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-DsRed 图1红色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染SMMC-7721细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达RFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。 图2红色荧光标记的SMMC-7721细胞系（200×） 稳定高表达RFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆RFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达RFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。

模型制作采用BALB／cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：HepG2细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-eGFP 图1绿色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染HepG2细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。 图2绿色荧光标记的HepG2细胞系（200×） 稳定高表达GFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察，Slide Book 4.0软件进行荧光光子数分析。

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。

模型制作采用BALB／cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：Bel-7402细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：pCAGGS-Neo-Luc 图1 带有荧光素酶基因表达载体的构建和荧光素酶标记的Bel-7402细胞系 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染Bel-7402细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达luc的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图1）。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。每周观察一次，裸鼠麻醉后放入活体荧光系统摄像，Slide Book 4.0软件进行分析。 4.5 Pet影像学观察：实验前6h禁食禁水。将小鼠放入吸气室内，通过吸入混有2％异氟烷的纯氧实施麻醉。麻醉完全后，通过尾静脉弹丸式注射约7.4MBq(200uCi)的放射性示踪剂F-FDG。然后将小鼠俯卧位固定于扫描床，使小鼠头部长轴和扫描器长轴平行且位于扫描器视野内。F-FDG摄取45 min后进行10 min PET图像采集。PET采集完成床板移至CT机架视野中心，进行约8 min的采集。在此过程中通过面罩持续吸入1 L／min的纯氧和2％异氟烷维持麻醉状态。 4.6肿瘤组织的HE染色：肿瘤生长4周后，剥取出移植瘤，制成石蜡切片并进行HE染色。

1、李小颖，高凯，董伟，张连峰，荧光素酶标记的人肝癌细胞裸鼠异种移植瘤模型的生物发光成像和PET-CT成像比较，中国比较医学杂志2011年3月第21卷第3期，11-13。

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。

模型制作采用BALB／cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：Bel-7402细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-eGFP 图1绿色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染Bel-7402细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。 图2绿色荧光标记的BEL-7402细胞系（200×） 稳定高表达GFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

肺腺癌（lung adenocarcinoma）是肺癌的一种，属于非小细胞癌。不同于鳞状细胞肺癌，肺腺癌较容易发生于女性及不抽烟者。起源于支气管粘膜上皮，少数起源于大支气管的粘液腺。发病率比鳞癌和未分化癌低，发病年龄较小，女性相对多见。多数腺癌起源于较小的支气管，为周围型肺癌。早期一般没有明显的临床症状，往往在胸部 X 线检查时被发现。表现为圆形或椭圆形肿块，一般生长较慢，但有时早期即发生血行转移。淋巴转移则发生较晚。腺癌是腺上皮恶性肿瘤，可以有腺泡、乳头、细支气管肺泡或实性生长方式。它常伴有黏液产生，检测黏液需要特殊的染色，尤其在检测分化差的肿瘤时。黏液的检测有时能够鉴别实性腺癌与其他形态表现一样的大细胞癌。

模型制作采用BALB／cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：A549细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-eGFP 图1绿色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染A549细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。 图2绿色荧光标记的A549-eGFP细胞系（200×） 稳定高表达GFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察，并用Slide Book 4.0软件进行荧光光子数分析。

肺腺癌（lung adenocarcinoma）是肺癌的一种，属于非小细胞癌。不同于鳞状细胞肺癌，肺腺癌较容易发生于女性及不抽烟者。起源于支气管粘膜上皮，少数起源于大支气管的粘液腺。发病率比鳞癌和未分化癌低，发病年龄较小，女性相对多见。多数腺癌起源于较小的支气管，为周围型肺癌。早期一般没有明显的临床症状，往往在胸部 X 线检查时被发现。表现为圆形或椭圆形肿块，一般生长较慢，但有时早期即发生血行转移。淋巴转移则发生较晚。腺癌是腺上皮恶性肿瘤，可以有腺泡、乳头、细支气管肺泡或实性生长方式。它常伴有黏液产生，检测黏液需要特殊的染色，尤其在检测分化差的肿瘤时。黏液的检测有时能够鉴别实性腺癌与其他形态表现一样的大细胞癌。

模型制作采用BALB／cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：A549细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-RFP 图1红色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染A549细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达RFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。 图2红色荧光标记的A549细胞系（200×） 稳定高表达RFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆RFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达RFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,已成为我国城市人口恶性肿瘤死亡原因的第1位。非小细胞型肺癌包括鳞状细胞癌（鳞癌）、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢,扩散转移相对较晚。非小细胞肺癌约占所有肺癌的80%，约75%的患者发现时已处于中晚期，5年内生存率很低。

模型制作采用BALB/cA-nu小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：NCI-H1299肺癌细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-eGFP 图1绿色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染NCI-H1299细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。 图2绿色荧光标记的NCI-H1299细胞系（200×） 稳定高表达GFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。

模型制作采用BALB/cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：Hepa1-6细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-LUC 图1荧光素酶表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染Hepa1-6细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达LUC的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。 图2荧光素酶标记的Hepa1-6细胞阳性克隆检测 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠肝原位接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。

模型制作采用BALB/cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养：Hepa1-6细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-DsRed 图1红色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染Hepa1-6细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达RFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。 图2红色荧光标记的Hepa1-6细胞系（200×） 稳定高表达RFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆RFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达RFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行裸鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察，并用Slide Book 4.0软件进行荧光光子数分析。