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标识符 CSTR:16397.09.0D01000929
资源中文名称 小鼠膀胱癌移行细胞BTT绿色荧光标记肿瘤模型
资源英文名称 BTT739-eGFP
疾病概述 膀胱癌(bladder cancer)是指发生在膀胱黏膜上的恶性肿瘤。是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,也是全身十大常见肿瘤之一。
实验动物背景信息

BTT739为低分化小鼠膀胱移行细胞癌,T739近交系小鼠经化学致癌剂BBN诱导产生的膀胱肿瘤,诱导26周时,将其中1只雄性小鼠膀胱癌往同种系小鼠皮下移植获成功。并培养成细胞系。在同系小鼠移植成功率100%,无自然消退现象,带瘤小鼠平均存活54天。

T739近交系小鼠是天津医药科学研究所培育的一株土黄色近交系小鼠,是615近交系小鼠和昆明种小鼠杂交后兄妹交配培育成功的。

模型制作方法

1.表达载体构建:构建chicken β-actin-luc-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒(the cytomegalovirus,CMV)早期增强子(early enhancer element)和鸡β-肌动蛋白( chicken beta-actin )启动子组成,用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达(图1)。

 

 

 

图1 带有荧光素酶基因表达载体的构建

2. BTT739-eGFP荧光细胞的获得:采用脂质体2000转染小鼠膀胱癌移行细胞,转染后24 h,用含有G418的培养液筛选细胞三周,获得稳定表达luciferase的细胞株,选择其中高表达的克隆株扩大培养,细胞形态见图2。

图2 BTT739-eGFP细胞形态

3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像:收集处于生长对数期的转染细胞,稀释至5×106/mL。取T739小鼠进行皮下接种,1×106个细胞/只。观察前每只小鼠腹腔注射饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像,Slide Book 4.0软件进行分析。

模型表型数据

本模型将GFP基因转染到BTT739中得到了高表达GFP细胞株。将BTT739-GFP细胞经皮下接种至T739小鼠,用活体荧光成像系统连续观察。在皮下接种后第7天,用生物发光成像系统可以观察到肿瘤发光, 随着观察天数的增加,肿瘤面积增大(图3),荧光强度增强(图4)。


 

3 荧光标记肿瘤的生长曲线

4 皮下接种BTT-GFP肿瘤生长影像分析

动物模型的评价与验证
保存方式 液氮冻存
合作方式
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备注 保存地点:中国医学科学院实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室