流感病毒是严重威胁人类健康的一种病原体，它能导致流感疫情甚至世界大流行，流感在各个年龄阶段的人群中都可能爆发而引起急性发热性呼吸道疾病。流感病毒为单股负链RNA病毒，属于正黏液病毒科，呈球形或丝状，直径80-120nm。病毒外层为两种不同糖蛋白构成的辐射状突起，即血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。根据HA和NA抗原的不同，又可分为许多亚型，H可分为16个亚型，N有9个亚型(N1～N9)。在所有的流感亚型中，H9N2备受关注，H9N2分布区域广泛，偶尔还可以感染人。值得注意的是，H5N1、H7N9、及H10N8亚型禽流感的6个内部基因均来自H9N2亚型病毒。文献报道H9N2亚型不经过适应即可在小鼠体内进行有效复制。另外，有文献报道，H9N2病毒在获得2009年甲型H1N1病毒内部基因后即可在雪貂群体间通过气溶胶传播。

在感染之前，将雪貂饲养在生物安全3级实验室中（ABSL3）中并监测5到7天以测量其体温。将皮下可植入温度应答器（BioMedic Data Systems;http://www.bmds.com）置于每个雪貂中，用于记录雪貂每天的体温。 雪貂经过轻度麻醉后滴鼻感染107EID50A/Brambling/Beijing/16/2012（H9N2）病毒（Genbank：KC464595.1、KC464596.1、KC464597.1、KC464598.1、KC464599.1、KC464600.1、KC464601.1、KC464602.1)。每天记录雪貂的临床症状并监测体温。感染后1，3，5，7，9d采集感染组和被传播组雪貂的鼻拭子和咽试子，置于1mlPBS中，接种鸡胚，测定鼻拭子和咽拭子中的病毒滴度。感染后第14天收集感染组雪貂的血清，HI实验测定血清转化情况。

1.Jing Yuan, Lili Xu, Linlin Bao, Yanfeng Yao, Wei Deng, Fengdi Li, Qi Lv，Songzhi Gu, Qiang Wei, Chuan Qin. Characterization of an H9N2 avian influenza virus from a Fringilla montifringilla brambling in northern. Virology 476(2015)289–297.

流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，它通过飞沫传播，能在短时间内迅速蔓延。2009年起源于北美的甲型H1N1流感曾经造成世界范围内的大流行，WHO曾将其警戒级别提升至最高级别6级，给人类社会和经济造成极大的负面影响。一项由WHO组织开展的研究显示，在2009至2010年的流感季中，全世界共有20%至27%的人被甲型H1N1病毒感染。尽管2010年8月WHO宣布全球已进入“流感大流行后期”，意味着“正常监测显示大多数国家的流感活动水平已恢复到季节性流感水平”，但同时指出，“局部地区仍有暴发甲型H1N1流感疫情的可能。” 本次疫情患者感染的是一种H1N1亚型流感病毒新毒株，它包含人流感病毒、北美禽流感病毒和北美、欧洲、亚洲三类H1N1流感病毒的基因片段。这种病毒已被证实经由人际传播，人感染后会出现高烧、精神不振、厌食、咳嗽等症状。科学家指出，打喷嚏、咳嗽和物理接触都有可能导致甲型H1N1流感病毒在人群间传播。这次甲型H1N1流感病毒呈现的另一大特点是对青壮年攻击性强，目前确诊甲型H1N1流感死者中大多数年龄都在25 ~ 45岁之间。

病毒株为A/California/07/2009(H1N1)，实验猪经过麻醉后待肌肉彻底放松，将其放置仰卧位，用喉镜撑开会厌，通过气管插管将病毒，感染剂量为107 TCID50病毒液滴入上呼吸道。感染后观察临床症状，监测存活率及体重变化率。感染后5d处死，收集肺组织，进行肺组织载量检测和病理学检查。

1.Bao L, Xu L, Zhan L, Deng W, Zhu H, Gao H, Sun H, Ma C, Lv Q, Li F, Chen H, Zhang L, Qin C. Challenge and polymorphism analysis of the novel A (H1N1) influenza virus to normal animals.Virus Res. 2010; 151(1): 60-5.

流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，它通过飞沫传播，能在短时间内迅速蔓延。2009年起源于北美的甲型H1N1流感曾经造成世界范围内的大流行，WHO曾将其警戒级别提升至最高级别6级，给人类社会和经济造成极大的负面影响。一项由WHO组织开展的研究显示，在2009至2010年的流感季中，全世界共有20%至27%的人被甲型H1N1病毒感染。尽管2010年8月WHO宣布全球已进入“流感大流行后期”，意味着“正常监测显示大多数国家的流感活动水平已恢复到季节性流感水平”，但同时指出，“局部地区仍有暴发甲型H1N1流感疫情的可能。” 本次疫情患者感染的是一种H1N1亚型流感病毒新毒株，它包含人流感病毒、北美禽流感病毒和北美、欧洲、亚洲三类H1N1流感病毒的基因片段。这种病毒已被证实经由人际传播，人感染后会出现高烧、精神不振、厌食、咳嗽等症状。科学家指出，打喷嚏、咳嗽和物理接触都有可能导致甲型H1N1流感病毒在人群间传播。这次甲型H1N1流感病毒呈现的另一大特点是对青壮年攻击性强，目前确诊甲型H1N1流感死者中大多数年龄都在25 ~ 45岁之间。

病毒株为A/California/07/2009(H1N1)，布氏田鼠经过轻度麻醉后滴鼻感染病毒，感染剂量为107 TCID50。小鼠感染后观察14天，并监测存活率及体重变化率。感染后第5d处死田鼠，取田鼠肺组织，进行病毒载量检测和组织病理学检查。

1.Bao L, Xu L, Zhan L, Deng W, Zhu H, Gao H, Sun H, Ma C, Lv Q, Li F, Chen H, Zhang L, Qin C. Challenge and polymorphism analysis of the novel A (H1N1) influenza virus to normal animals.Virus Res. 2010; 151(1): 60-5.

实验动物及材料: 1. 8周龄SD大鼠，雌性； 2. 常规手术器械、显微镜、台灯； 3. 抗生素、2%戊巴比妥钠、碘伏、75%乙醇。 （二）制作方法 1. 大鼠麻醉后，固定，备皮，碘伏擦拭，分离皮肤、皮下组织，沿肌肉走向分离脊椎旁肌肉； 2. 确定T8-T10椎体位置，用镊子略加起T9椎体上端，用钳字去除椎体和椎板，暴露T9段脊髓； 3. 在显微镜和光源下用显微剪去除T9-T10段脊髓； 4. 压迫止血，用生理盐水冲洗创面，缝合肌肉和皮肤； 5. 术后每天给予抗生素，以防感染。

实验动物及材料: 8周龄ApoE基因缺陷雌鼠（ApoE-/-） 高脂食物: 15.8%脂肪，1.25%胆固醇和0.5%胆酸盐 降质烷 制作方法: 降质烷注射:8周龄小鼠腹腔注射0.5毫升降质烷，饲养于SPF设施，6个月后，检测抗dsDNA 浓度，高滴度dsDNA显示狼疮模型建立成功 ApoE-/-高脂食物连续喂养12周 模型鉴定：高dsDNA合并主动脉斑块

一）实验动物及材料: 8周龄ApoE基因缺陷雌鼠（ApoE-/-） K/BxN小鼠:由KRN雄鼠和NOD/LtJ雌鼠交配所得 K/BxN小鼠抗GPI阳性血清 高脂食物: 15.8%脂肪，1.25%胆固醇和0.5%胆酸盐 （二）制作方法: ApoE-/-高脂食物连续喂养9周 K/BxN小鼠GPI阳性血清制备:12周龄小鼠颌下静脉采血，4℃、4000 rpm/min离心10min，分离获得血清；ELISA法检测血清抗GPI抗体效价，通过磷酸葡糖异构酶包被96孔板，BSA封闭抗原，1:100稀释待测血清，1:2000稀释后AP-IgG，phosphatase substrate显色，酶标仪检测405nm波长时的吸光度（OD）值。 17周龄（9周高脂喂养）ApoE-/-小鼠，腹腔注射0.2ml K/BxN小鼠GPI阳性血清，每周一次，连续10周注射，第26周龄时关节炎合并动脉硬化小鼠造模完成

该模型主要基于我实验室已有的TC狼疮小鼠模型，通过包埋雌激素，观察其皮肤、病理、肾脏的病理变化。

人类慢性狼疮性皮肤病，又称狼疮性脂膜炎，皮肤损害为结节或斑块，位于真皮深层或皮下脂肪组织，其大小、数目不定，表面肤色正常或淡红色，质地坚实，损害可发生于身体任何部位。

该模型主要基于我实验室已有的TC狼疮小鼠模型，通过长期观察，发现40周以上的小鼠出现皮肤缺损的症状，符合慢性狼疮皮肤病的表现

钟荣玉, 段新旺 ,牛海涛。一种皮肤型狼疮小鼠模型的鉴定，中国实验动物学报， 2019 年 4 月，第 27 卷 第 2 期

系统性红斑狼疮是一种全身性、系统性的自身免疫性结缔组织病，多好发于女性。绝大多数患者发病时即有多系统损害表现，同时伴有其他的结缔组织病。该病临床表现多样，可由于狼疮肾炎、狼疮脑病等危及患者生命。其发病与遗传和环境相关。肠道菌群有可能在发病中发挥一定的作用。dsDNA升高和狼疮肾炎、T细胞和B细胞异常激活等是主要特征，同时伴有肠道菌群紊乱

活动期狼疮病人的粪便经研磨后，按照重量：体积=1:5由PBS混匀，离心，取上清，菌落计数，0.8X109CFU，隔天灌胃，连续5次。连续观察2个月，当出现dsDNA升高时，表示模型成功

帕金森病（Parkinson′s disease，PD）是一种常见的神经系统变性疾病，老年人多见，平均发病年龄为60岁左右，40岁以下起病的青年帕金森病较少见。我国65岁以上人群PD的患病率大约是1.7%。大部分帕金森病患者为散发病例，仅有不到10%的患者有家族史。帕金森病最主要的病理改变是中脑黑质多巴胺（dopamine, DA）能神经元的变性死亡，由此而引起纹状体DA含量显著性减少而致病。导致这一病理改变的确切病因目前仍不清楚，遗传因素、环境因素、年龄老化、氧化应激等均可能参与PD多巴胺能神经元的变性死亡过程。

该模型使用CRISPR / Cas9介导方法引入恒河猴胚胎，然后通过辅助生殖方式植入受体动物，生产出基因修饰恒河猴，并进行动物表型评价。

CRISPR/Cas9-mediated PINK1 deletion leads to neurodegeneration in rhesus monkeys.

流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，它通过飞沫传播，能在短时间内迅速蔓延。2009年起源于北美的甲型H1N1流感曾经造成世界范围内的大流行，WHO曾将其警戒级别提升至最高级别6级，给人类社会和经济造成极大的负面影响。一项由WHO组织开展的研究显示，在2009至2010年的流感季中，全世界共有20%至27%的人被甲型H1N1病毒感染。尽管2010年8月WHO宣布全球已进入“流感大流行后期”，意味着“正常监测显示大多数国家的流感活动水平已恢复到季节性流感水平”，但同时指出，“局部地区仍有暴发甲型H1N1流感疫情的可能。” 本次疫情患者感染的是一种H1N1亚型流感病毒新毒株，它包含人流感病毒、北美禽流感病毒和北美、欧洲、亚洲三类H1N1流感病毒的基因片段。这种病毒已被证实经由人际传播，人感染后会出现高烧、精神不振、厌食、咳嗽等症状。科学家指出，打喷嚏、咳嗽和物理接触都有可能导致甲型H1N1流感病毒在人群间传播。这次甲型H1N1流感病毒呈现的另一大特点是对青壮年攻击性强，目前确诊甲型H1N1流感死者中大多数年龄都在25 ~ 45岁之间。

病毒株为A/California/07/2009(H1N1)，豚鼠经过轻度麻醉后滴鼻感染106TCID50病毒。每日观察记录豚鼠的活动状态及临床表现，存活情况，0、3、5、8、14 d 称量体重。分别感染后第0、3、5 和8 d采集豚鼠鼻腔灌洗液，无菌采集濒死豚鼠的心、肝、脾、肺、肾、小肠、气管和脑组织进行病毒滴度培养和核酸定量检测。

1.占玲俊，鲍琳琳，邓巍，张鹏俊，吕琦，马春梅，曹彬，秦川.豚鼠甲流H1N1 感染模型的建立及激素甲强龙对感染干预作用的探讨[J].中国比较医学杂志，2011,21(2):16-20.

先天性脊柱侧凸即通过X线，MRI或手术证实的特定的先天性椎体异常而引起的脊柱侧凸。这种畸形出生后即发病，因而患者出现畸形较特发性脊柱侧凸早。早期发病使先天性脊柱侧凸患者很少能接受到早期最佳的治疗。

我们采用CRISPR-Cas9技术编辑小鼠基因组。表 1中显示了小鼠基因组中指导RNA的靶标。我们混合了向导RNA和Cas9 mRNA（每个RNA 10 ng /μl），注射到FVB / NJ品系小鼠的合子（每次注射编辑200个细胞）。取得F0小鼠后，与野生型FVB / NJ小鼠杂交以获得后代。我们使用来自脚趾的基因组DNA，通过PCR和Sanger测序对小鼠进行基因分型。 用于扩增和测序的PCR引物在表 2中显示。   表 1. 小鼠基因组中单向导RNA（sgRNA）的靶序列。   Location of target region Sequences (5’-3’) Exon 2 of Tbx6 GAGGCCCTTCACTCGCTTCC Conserved regulatory region in the Tbx6 promoter CCTAGGGATCAATCAGACCGAGG Note: Sequences of sgRNA targets are underlined and the protospacer adjacent motif (PAM)sequences are shown in red.   表 2. 小鼠Tbx6基因分型的引物。   Primer Sequence Tbx6mh-F 5'-CAAGCGTCAGAGAAGACCACCA-3' Tbx6mh-R 5'-CCTTACCCAGAGCCAATCCAAC-3' Tbx6-exon 2-F 5'-ATCCTCATTCTTCCCACATCTC-3' Tbx6-exon 2-R 5'-ATGCCCACCTCTTACAGTTTCT-3  

Yang N, Wu N, Zhang L, et al. TBX6 compound inheritance leads to congenital vertebral malformations in humans and mice. Hum Mol Genet. 2019;28(4):539–547.