2013 年3 月31 日，依据《国际卫生条例（2005）》，中国政府报告上海和安徽发现3 例人感染新型甲型H7N9 禽流感病毒（以下简称H7N9）病例。在随后的几个月内，以华东地区为代表的我国多个省市陆续确诊并报道多例H7N9禽流感病毒感染人造成重症肺炎甚至死亡的病例，这是世界首次发现的新型重配H7N9禽流感病毒所致的人感染疫情，引起了全球广泛关注。 H7N9禽流感病毒是由H7 的HA 基因，N9 的NA 基因以及H9N2 病毒的6 个内部基因片段重配而成的新型病毒。对目前已公布了全基因组的若干H7N9禽流感患者分离株的序列分析结果显示，该病毒具有与之前其他亚型甲型流感病毒类似的遗传特征，包括对禽类低致病性，感染哺乳动物的能力增强，对金刚烷胺类抗病毒药物耐药，以及对神经氨酸酶抑制剂（如奥司他韦和扎那米韦）敏感。

病毒株为A/Anhui/1/2013 (H7N9)，布氏田鼠经过轻度麻醉后滴鼻感染病毒。田鼠感染后观察14天，监测存活率及体重变化率。感染后5d处死田鼠，取小鼠肺组织，进行病毒载量检测和组织病理学检查。

禽流感依据其对禽类的致病能力大小可以分为三个程度：高致病性、低致病性和无致病性。其中高致病性禽流感包括H5和H7 两个亚型。但并非所有的H5 和H7 都是强毒株。人高致病性禽流感是由高致病性禽流感病毒某些亚型的毒株引起的人急性呼吸道传染病。由H5N1亚型禽流感引起的症状较重，病死率高。1997年，香港一名3岁的男童因感染禽流感而死亡，在随后的几个月中，共有18个人感染禽流感病毒，其中6人死亡。之后相继有 H9N2、H7N7亚型禽流感感染人类和 H5N1 亚型再次感染人类的报道,禽流感与人禽流感的关系开始倍受关注。2003年12 月中旬开始至今,朝鲜、越南、泰国、韩国、日本和中国等10 余个亚洲国家先后暴发H5N1高致病性禽流感疫情, 并且再越南、泰国、柬埔寨以及印度尼西亚出现了人感染高致病性禽流感病毒病例。据最新资料报道，世界卫生组织已证实泰国、越南和柬埔寨以及印度尼西亚自2004年1月起截至到2005年8月20日共有112人感染，其中导致57人死亡。而H7N7感染引起的症状相对较轻仅以眼角结膜炎和轻微的呼吸道症状为主。追溯历史，有报道的第一次禽流感感染人的事件发生在上个世纪的70-80年代的几例以自限性结膜炎为临床特征的H7N7感染病患。最近的一次发生在2003年荷兰一家农场有近80名工人及家属被确诊为H7N7感染,他们以眼部感染和呼吸道症状为主,其中一名兽医死亡,他的家人未接触病禽但也被证实H7N7感染。这起事件具有有限的人传人的证据。

食蟹猴年龄5岁，雄性，2只。H5N1、H1N1和季节性流感病毒抗体经检测均呈阴性。实验前恒河猴麻醉后将体温芯片植入其颈部后方、肩胛骨上方的背中线位置，每天用数据收集器扫描芯片来测量猴的体温。实验的观察期为5天。皮下植入体温芯片用于监测体温、体重变化。每日观察食蟹猴临床症变化，在感染后第0、3、6、9、14天取血测定白细胞总数和CD4+、CD8+比值；并于感染后3、6、9、14天各解剖一只食蟹猴取肺组织进行H5N1病毒的测定和分离。

流感病毒是严重威胁人类健康的一种病原体，它能导致流感疫情甚至世界大流行，流感在各个年龄阶段的人群中都可能爆发而引起急性发热性呼吸道疾病。流感病毒为单股负链RNA病毒，属于正黏液病毒科，呈球形或丝状，直径80-120nm。病毒外层为两种不同糖蛋白构成的辐射状突起，即血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。根据HA和NA抗原的不同,又可分为许多亚型，H可分为16个亚型，N有9个亚型(N1～N9)。H3N2亚型流感病毒1968年最早出现于香港，后传播到日本、美国等地，引发了一场流感世界大流行，致死人数达到近100万人。此后，虽未再次引起世界大流行，但散发流行至今。近年来，世界范围的流感流行病学监控和调查分析显示，该亚型流感病毒在全球仍是流行优势株，仅1968-1992年间我国发生的10次流感小流行中就有7次都是由H3N2流感病毒所引起，并且在1998年和2002年我国也都发生了较大范围的H3N2流感流行，其中北京市1998年11-12月的人群总发病率高达10%，总发病人数达到了100万以上。

病毒株为季节性流感病毒A/Aichi/2/68/H3N2经过小鼠体内7次传代后所获得鼠肺适应株，BALB/c小鼠经过轻度麻醉后滴鼻感染病毒，小鼠感染后观察14天，监测存活率及体重变化率。感染后分时间段安乐小鼠，分别在0、3、5d采血分离血清并收集肺泡灌洗液进行细胞因子检测；不同时间点取小鼠肺、脾、脑、心等组织，进行病毒滴度测定和组织病理学检查。

1.姜静，吕琦，李枫棣，戚菲菲，王顺意，王冠澎，徐艳峰，鲍琳琳. 应用季节性流感病毒H3N2 鼠适应株建立小鼠模型[J]，中国比较医学杂志,2019,29(6):22-26.

2013 年3 月31 日，依据《国际卫生条例（2005）》，中国政府报告上海和安徽发现3 例人感染新型甲型H7N9 禽流感病毒（以下简称H7N9）病例。在随后的几个月内，以华东地区为代表的我国多个省市陆续确诊并报道多例H7N9禽流感病毒感染人造成重症肺炎甚至死亡的病例，这是世界首次发现的新型重配H7N9禽流感病毒所致的人感染疫情，引起了全球广泛关注。 H7N9禽流感病毒是由H7 的HA 基因，N9 的NA 基因以及H9N2 病毒的6 个内部基因片段重配而成的新型病毒。对目前已公布了全基因组的若干H7N9禽流感患者分离株的序列分析结果显示，该病毒具有与之前其他亚型甲型流感病毒类似的遗传特征，包括对禽类低致病性，感染哺乳动物的能力增强，对金刚烷胺类抗病毒药物耐药，以及对神经氨酸酶抑制剂（如奥司他韦和扎那米韦）敏感。

病毒株为A/Anhui/1/2013 (H7N9)，经血凝抑制（HI）实验，筛选出6月龄以下对当下流行的H1N1、H3N2、H5N1、H7N9亚型流感病毒相应血清抗体均为阴性的去势雪貂。为了使动物适应并降低应激反应，所有雪貂均在感染前一周进行体温芯片的皮下植入和实验室适应（使用扫描仪监测体温，BMDS, USA）。感染组通过肌肉注射盐酸塞拉嗪对雪貂进行麻醉，轻度麻醉后感染组每只雪貂经鼻接种病毒。在感染组旁边设置传播组，感染组在感染24小时后放入传播笼中传播组的邻近笼。感染组和传播组于感染（合笼）后第0-14天连续测量体温、体重并记录临床症状以进行评分；在接种（合笼）病毒1d后，每天收集鼻甲骨活检物（鼻拭子）标本，进行病毒分离和载量测定；感染后第5天感染雪貂安乐处死，尸检时取肺、气管、肝、脾、脑、肠、心和肾组织，进行病毒滴度测定和组织病理学检查。

1.Lili Xu, Linlin Bao, Wei Deng, et al. Novel Avian-Origin Human Influenza A(H7N9) Can Be Transmitted Between Ferrets via Respiratory Droplets[J]. Journal of Infectious Diseases, 2014, 209(4):551-556. 2.Bao L , Bi Y , Wong G , et al. Diverse biological characteristics and varied virulence of H7N9 from Wave 5[J]. Emerging Microbes & Infections, 2019, 8(1):94-102. 3.Shuran Gong, Feifei Qi, Fengdi Li, Qi Lv, Guanpeng Wang, Shunyi Wang, Jing Jiang, Lin Wang, Linlin Bao, Chuan Qin. Human-Derived A/Guangdong/Th005/2017 (H7N9) Exhibits Extremely High Replication in the Lungs of Ferrets and Is Highly Pathogenic in Chickens. Viruses 2019. 4. 邓巍，许黎黎，鲍琳琳，朱华，陈霆，李枫棣，吕琦，袁静，向志光，高凯，徐艳峰，黄澜，李彦红，姚艳丰，于品，雍卫东，张连峰，秦川.H7N9禽流感病毒对雪貂的致病性及传播力研究[J].中国实验动物学报, 2014,22(1):32-37.

禽流感依据其对禽类的致病能力大小可以分为三个程度：高致病性、低致病性和无致病性。其中高致病性禽流感包括H5和H7 两个亚型。但并非所有的H5 和H7 都是强毒株。人高致病性禽流感是由高致病性禽流感病毒某些亚型的毒株引起的人急性呼吸道传染病。由H5N1亚型禽流感引起的症状较重，病死率高。1997年，香港一名3岁的男童因感染禽流感而死亡，在随后的几个月中，共有18个人感染禽流感病毒，其中6人死亡。之后相继有 H9N2、H7N7亚型禽流感感染人类和 H5N1 亚型再次感染人类的报道,禽流感与人禽流感的关系开始倍受关注。2003年12 月中旬开始至今,朝鲜、越南、泰国、韩国、日本和中国等10 余个亚洲国家先后暴发H5N1高致病性禽流感疫情, 并且再越南、泰国、柬埔寨以及印度尼西亚出现了人感染高致病性禽流感病毒病例。据最新资料报道，世界卫生组织已证实泰国、越南和柬埔寨以及印度尼西亚自2004年1月起截至到2005年8月20日共有112人感染，其中导致57人死亡。而H7N7感染引起的症状相对较轻仅以眼角结膜炎和轻微的呼吸道症状为主。追溯历史，有报道的第一次禽流感感染人的事件发生在上个世纪的70-80年代的几例以自限性结膜炎为临床特征的H7N7感染病患。最近的一次发生在2003年荷兰一家农场有近80名工人及家属被确诊为H7N7感染,他们以眼部感染和呼吸道症状为主,其中一名兽医死亡,他的家人未接触病禽但也被证实H7N7感染。这起事件具有有限的人传人的证据。

病毒株为A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011和A/Vietnam/1194/2004禽流感病毒，经血凝抑制（HI）实验，筛选出6月龄以下对当下流行的H1N1、H3N2、H5N1、H7N9亚型流感病毒相应血清抗体均为阴性的去势雪貂。为了使动物适应并降低应激反应，所有雪貂均在感染前一周进行体温芯片的皮下植入和实验室适应（使用扫描仪监测体温，BMDS, USA）。感染组通过肌肉注射盐酸塞拉嗪对雪貂进行麻醉，轻度麻醉后感染组每只雪貂经鼻接种病毒。传播实验是在笼子中进行的，该笼子旨在防止动物之间的直接接触，但允许已接种的雪貂与相邻的幼稚雪貂之间保持气流。两组三只雪貂经鼻内接种10 4 TCID 50病毒400uL；一组接种了A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011病毒，另一组接种了A/Vietnam/1194/2004病毒。在感染后第24小时，将每只接种过的动物和幼稚的雪貂分别饲养在传播笼中，以测试病毒的传播能力。观察所有动物的临床体征，每天称重作为疾病的指标。分别在感染后第1、3、5、7和9天或暴露后从已接种和未接种过的动物收集鼻拭子和咽拭子，并转移至1 ml PBS中。通过在MDCK细胞中的终点滴定确定病毒滴度。

1. Xu L, Bao L, Yuan J, et al. Antigenicity and transmissibility of a novel clade 2.3.2.1 avian influenza H5N1 virus. J Gen Virol.2013 Dec;94(Pt 12):2616-26. 2. Lili Xu, Linlin Bao, Wei Deng, et al. Novel Avian-Origin Human Influenza A(H7N9) Can Be Transmitted Between Ferrets via Respiratory Droplets[J]. Journal of Infectious Diseases, 2014, 209(4):551-556.

禽流感依据其对禽类的致病能力大小可以分为三个程度：高致病性、低致病性和无致病性。其中高致病性禽流感包括H5和H7 两个亚型。但并非所有的H5 和H7 都是强毒株。人高致病性禽流感是由高致病性禽流感病毒某些亚型的毒株引起的人急性呼吸道传染病。由H5N1亚型禽流感引起的症状较重，病死率高。1997年，香港一名3岁的男童因感染禽流感而死亡，在随后的几个月中，共有18个人感染禽流感病毒，其中6人死亡。之后相继有 H9N2、H7N7亚型禽流感感染人类和 H5N1 亚型再次感染人类的报道,禽流感与人禽流感的关系开始倍受关注。2003年12 月中旬开始至今,朝鲜、越南、泰国、韩国、日本和中国等10 余个亚洲国家先后暴发H5N1高致病性禽流感疫情, 并且再越南、泰国、柬埔寨以及印度尼西亚出现了人感染高致病性禽流感病毒病例。据最新资料报道，世界卫生组织已证实泰国、越南和柬埔寨以及印度尼西亚自2004年1月起截至到2005年8月20日共有112人感染，其中导致57人死亡。而H7N7感染引起的症状相对较轻仅以眼角结膜炎和轻微的呼吸道症状为主。追溯历史，有报道的第一次禽流感感染人的事件发生在上个世纪的70-80年代的几例以自限性结膜炎为临床特征的H7N7感染病患。最近的一次发生在2003年荷兰一家农场有近80名工人及家属被确诊为H7N7感染,他们以眼部感染和呼吸道症状为主,其中一名兽医死亡,他的家人未接触病禽但也被证实H7N7感染。这起事件具有有限的人传人的证据。

病毒株为A/Vietnam/1194/2004，经血凝抑制（HI）实验，筛选出4周龄以下对当下流行的人流感病毒和猪流感病毒相应血清抗体均为阴性的SPF级巴马小型猪。 实验猪经过轻度麻醉后待肌肉彻底放松，将其放置仰卧位，用喉镜撑开会厌，通过气管插管将H7N9病毒液滴入上呼吸道。感染后观察临床症状，监测存活率及体重变化率。感染后5d处死，收集肺组织，进行肺组织载量检测和病理学检查。

禽流感依据其对禽类的致病能力大小可以分为三个程度：高致病性、低致病性和无致病性。其中高致病性禽流感包括H5和H7 两个亚型。但并非所有的H5 和H7 都是强毒株。人高致病性禽流感是由高致病性禽流感病毒某些亚型的毒株引起的人急性呼吸道传染病。由H5N1亚型禽流感引起的症状较重，病死率高。1997年，香港一名3岁的男童因感染禽流感而死亡，在随后的几个月中，共有18个人感染禽流感病毒，其中6人死亡。之后相继有H9N2、H7N7亚型禽流感感染人类和 H5N1 亚型再次感染人类的报道,禽流感与人禽流感的关系开始倍受关注。2003年12 月中旬开始至今,朝鲜、越南、泰国、韩国、日本和中国等10 余个亚洲国家先后暴发H5N1高致病性禽流感疫情,并且再越南、泰国、柬埔寨以及印度尼西亚出现了人感染高致病性禽流感病毒病例。据最新资料报道，世界卫生组织已证实泰国、越南和柬埔寨以及印度尼西亚自2004年1月起截至到2005年8月20日共有112人感染，其中导致57人死亡。而H7N7感染引起的症状相对较轻仅以眼角结膜炎和轻微的呼吸道症状为主。追溯历史，有报道的第一次禽流感感染人的事件发生在上个世纪的70-80年代的几例以自限性结膜炎为临床特征的H7N7感染病患。最近的一次发生在2003年荷兰一家农场有近80名工人及家属被确诊为H7N7感染,他们以眼部感染和呼吸道症状为主,其中一名兽医死亡,他的家人未接触病禽但也被证实H7N7感染。这起事件具有有限的人传人的证据。

恒河猴年龄5岁，雄性，2只。H5N1、H1N1 和季节性流感病毒抗体经检测均呈阴性。实验前恒河猴麻醉后将体温芯片植入其颈部后方、肩胛骨上方的背中线位置，每天用数据收集器扫描芯片来测量猴的体温。实验的观察期为5天。皮下植入体温芯片用于监测体温、体重变化。每日观察食蟹猴临床症变化，在感染后第5天处死动物，取组织样本用于监测病毒复制动力曲线和动物感染后组织炎症反应检查。

吕琦,邓巍,鲍琳琳,et al.气管插管法接种H5N1病毒感染恒河猴及系统组织病毒检测[J].中国比较医学杂志,2011,21(12):56-60.

流感病毒是严重威胁人类健康的一种病原体，它能导致流感疫情甚至世界大流行，流感在各个年龄阶段的人群中都可能爆发而引起急性发热性呼吸道疾病。流感病毒为单股负链RNA病毒，属于正黏液病毒科，呈球形或丝状，直径80-120nm。病毒外层为两种不同糖蛋白构成的辐射状突起，即血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。根据HA和NA抗原的不同，又可分为许多亚型，H可分为16个亚型，N有9个亚型(N1～N9)。在所有的流感亚型中，H9N2备受关注，H9N2分布区域广泛，偶尔还可以感染人。值得注意的是，H5N1、H7N9、H10N8亚型禽流感的6个内部基因均来自H9N2亚型病毒。文献报道H9N2亚型不经过适应即可在小鼠体内进行有效复制。另外，有文献报道，H9N2病毒在获得2009年甲型H1N1病毒内部基因后即可在雪貂群体间通过气溶胶传播。

将分离得到的H9N2病毒毒株（A/brambling/Beijing/16/2012，Genbank：KC464595.1、KC464596.1、KC464597.1、KC464598.1、KC464599.1、KC464600.1、KC464601.1、KC464602.1)在小鼠体内进行连续传代，纯化病毒，得到3个鼠肺适应株，命名为：P12-1、 P12-2、 P12-3。 基于P0，P12-1，P12-2，P12-3代病毒对小鼠模型的毒力与致病性比较，攻毒后24h，在P12-2和P12-3病毒的A组，每盒内各放入4只未攻毒的小鼠，第5，8天各解剖2只，取肺组织，每组剩余的4只于21天采血，通过血凝抑制实验及微量中和实验测定抗体效价。

1.Jing Yuan, Lili Xu, Linlin Bao, Yanfeng Yao, Wei Deng, Fengdi Li, Qi Lv，Songzhi Gu, Qiang Wei, Chuan Qin. Characterization of an H9N2 avian influenza virus from a Fringilla montifringilla brambling in northern. Virology. 476(2015)289–297.

2012 年6 月埃及病毒学家Zaki 从沙特一位患有急性肺炎并伴发急性肾衰竭的男性患者中分离到了一株冠状病毒。随后他把病毒样本送到了荷兰鹿特丹伊拉斯姆斯大学医学中心（Erasmus Medical Center），Ron Fouchier 教授最终证实的确是一种以前没有见过的冠状病毒，命名为 HCoV-EMC，是一种不同于SARS 冠状病毒(SARS-CoV)的新型冠状病。 随后英国的科学家也确认了一名来本国就医的卡塔尔患者也感染了这种新型冠状病毒，症状亦是严重呼吸综合征，将该病毒命名为人冠状病毒-England 1( human coronavirus England 1)。后续经证实两病例感染的病毒为同一病毒，序列比对有99.5%的相似性。 2012 年9 月23 日，世界卫生组织发布公告，确认有2 名患者感染了新型冠状病毒，两人临床表现为急性呼吸道感染，并伴有急性肾衰竭。此后几个月该病毒在中东地区接连出现，并出现了小群体传播事件。另外一些欧洲、美洲、非洲国家也出现来自中东的输入病例，分离的毒株也越来越多，并各自命名，比如 human betacoronavirus 2CJordan-N3、human betacoronavirus 2c England-Qatar 等。为统一新型冠状病毒名称，方便新型冠状病毒感染病例的通报，2013 年5月国际病毒分类委员会冠状病毒研究小组将此新型冠状病毒命名为中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV)。

MERS-CoV (hCoV-EMC，GenBank: MH454272.1）由荷兰伊拉斯姆斯大学医学中心Ron Fouchier 教授馈赠。采用支气管镜辅助攻毒，攻毒剂量为 6.5×106TCID50/1ml/只。 观察攻毒后绒猴临床症状，每天两次。分别于攻毒前1d和攻毒后3d进行胸部X光拍摄。攻毒后随时观察狨猴状态，一旦评分超过35 分，即进行人道主义安乐死。采集肺、气管、心、脾、肾、脑、肝脏、肠组织进行病理、免疫组化和病毒检测。攻毒后分别在1, 3 天采集咽拭子、鼻拭子、肛拭子进行病毒检测。

[1] Chan JF, Yao Y, Yeung ML, Deng W, Bao L, Jia L, Li F, Xiao C, Gao H, Yu P, Cai JP, Chu H, Zhou J, Chen H, Qin C, Yuen KY. Treatment With Lopinavir/Ritonavir or Interferon-β1b Improves Outcome of MERS-CoV Infection in a Nonhuman Primate Model of Common Marmoset.J Infect Dis. 2015 Dec 15;212(12):1904-13. doi: 10.1093/infdis/jiv392. [2] Jiaming L, Yanfeng Y, Yao D, Yawei H, Linlin B, Baoying H, Jinghua Y, Gao GF, Chuan Q, Wenjie T. The recombinant N-terminal domain of spike proteins is a potential vaccine against Middle East respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV) infection.Vaccine. 2017 Jan 3;35(1):10-18. doi: 10.1016/j.vaccine.2016.11.064.

2012 年6 月埃及病毒学家Zaki 从沙特一位患有急性肺炎并伴发急性肾衰竭的男性患者中分离到了一株冠状病毒。随后他把病毒样本送到了荷兰鹿特丹伊拉斯姆斯大学医学中心（Erasmus Medical Center），Ron Fouchier 教授最终证实的确是一种以前没有见过的冠状病毒，命名为 HCoV-EMC，是一种不同于SARS 冠状病毒(SARS-CoV)的新型冠状病。 随后英国的科学家也确认了一名来本国就医的卡塔尔患者也感染了这种新型冠状病毒，症状亦是严重呼吸综合征，将该病毒命名为人冠状病毒-England 1( human coronavirus England 1)。后续经证实两病例感染的病毒为同一病毒，序列比对有99.5%的相似性。 2012 年9 月23 日，世界卫生组织发布公告，确认有2 名患者感染了新型冠状病毒，两人临床表现为急性呼吸道感染，并伴有急性肾衰竭。此后几个月该病毒在中东地区接连出现，并出现了小群体传播事件。另外一些欧洲、美洲、非洲国家也出现来自中东的输入病例，分离的毒株也越来越多，并各自命名，比如 human betacoronavirus 2CJordan-N3、human betacoronavirus 2c England-Qatar 等。为统一新型冠状病毒名称，方便新型冠状病毒感染病例的通报，2013 年5月国际病毒分类委员会冠状病毒研究小组将此新型冠状病毒命名为中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV)。

MERS-CoV (hCoV-EMC，GenBank: MH454272.1）由荷兰伊拉斯姆斯大学医学中心Ron Fouchier 教授馈赠。采用支气管镜辅助攻毒，攻毒剂量为6.5×107TCID50/1ml/只。 观察攻毒后恒河猴临床症状，每天两次。分别于攻毒前1d和攻毒后3d、5d 进行肺部X光拍摄。攻毒后3天，MERS-CoV攻毒组安乐死2只恒河猴，对照组安乐死1只，采集肺、气管、心、脾、肾、脑、肝脏、肠组织进行病理、免疫组化和病毒检测。攻毒后分别在1, 3, 5, 7, 9, 11, 14, 21和28天采集咽拭子、鼻拭子、肛拭子进行病毒检测。并且在攻毒后7, 14, 21和28天采集血液分离血清，进行中和抗体检测。

[1] Yao Y, Bao L, Deng W, Xu L, Li F, Lv Q, Yu P, Chen T, Xu Y, Zhu H, Yuan J, Gu S, Wei Q, Chen H, Yuen KY, Qin C. An animal model of MERS produced by infection of rhesus macaques with MERS coronavirus. J Infect Dis. 2014 Jan 15;209(2):236-42. doi: 10.1093/infdis/jit590.

流感病毒是严重威胁人类健康的一种病原体，它能导致流感疫情甚至世界大流行，流感在各个年龄阶段的人群中都可能爆发而引起急性发热性呼吸道疾病。流感病毒为单股负链RNA病毒，属于正黏液病毒科，呈球形或丝状，直径80-120nm。病毒外层为两种不同糖蛋白构成的辐射状突起，即血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。根据HA和NA抗原的不同，又可分为许多亚型，H可分为16个亚型，N有9个亚型(N1～N9)。在所有的流感亚型中，H9N2备受关注，H9N2分布区域广泛，偶尔还可以感染人。值得注意的是，H5N1、H7N9、H10N8亚型禽流感的6个内部基因均来自H9N2亚型病毒。文献报道H9N2亚型不经过适应即可在小鼠体内进行有效复制。另外，有文献报道，H9N2病毒在获得2009年甲型H1N1病毒内部基因后即可在雪貂群体间通过气溶胶传播。

将分离得到的H9N2病毒毒株（A/brambling/Beijing/16/2012，Genbank：KC464595.1、KC464596.1、KC464597.1、KC464598.1、KC464599.1、KC464600.1、KC464601.1、KC464602.1)在小鼠体内进行连续传代，纯化病毒，得到3个鼠肺适应株，命名为：P12-1、 P12-2、 P12-3。使用4-6周龄SPF级雌性BALB/c小鼠，麻醉后滴鼻感染，小鼠感染后观察14天，监测存活率及体重变化率。感染后分时间段安乐死小鼠，收集小鼠肺、脾、脑、心、肾等组织，进行病毒滴度测定。

1.Jing Yuan, Lili Xu, Linlin Bao, Yanfeng Yao, Wei Deng, Fengdi Li, Qi Lv，Songzhi Gu, Qiang Wei, Chuan Qin. Characterization of an H9N2 avian influenza virus from a Fringilla montifringilla brambling in northern. Virology 476(2015)289–297.

2012 年6 月埃及病毒学家Zaki 从沙特一位患有急性肺炎并伴发急性肾衰竭的男性患者中分离到了一株冠状病毒。随后他把病毒样本送到了荷兰鹿特丹伊拉斯姆斯大学医学中心（Erasmus Medical Center），Ron Fouchier 教授最终证实的确是一种以前没有见过的冠状病毒，命名为 HCoV-EMC，是一种不同于SARS 冠状病毒(SARS-CoV)的新型冠状病。 随后英国的科学家也确认了一名来本国就医的卡塔尔患者也感染了这种新型冠状病毒，症状亦是严重呼吸综合征，将该病毒命名为人冠状病毒-England 1( human coronavirus England 1)。后续经证实两病例感染的病毒为同一病毒，序列比对有99.5%的相似性。 2012 年9 月23 日，世界卫生组织发布公告，确认有2 名患者感染了新型冠状病毒，两人临床表现为急性呼吸道感染，并伴有急性肾衰竭。此后几个月该病毒在中东地区接连出现，并出现了小群体传播事件。另外一些欧洲、美洲、非洲国家也出现来自中东的输入病例，分离的毒株也越来越多，并各自命名，比如 human betacoronavirus 2CJordan-N3、human betacoronavirus 2c England-Qatar 等。为统一新型冠状病毒名称，方便新型冠状病毒感染病例的通报，2013 年5月国际病毒分类委员会冠状病毒研究小组将此新型冠状病毒命名为中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV)。

MERS-CoV (hCoV-EMC，GenBank: MH454272.1）由荷兰伊拉斯姆斯大学医学中心Ron Fouchier 教授馈赠。Ad5-DPP4 由美国爱荷华大学微生物与儿科学教研室赵金存教授馈赠。 DPP4 转导组小鼠在MERS-CoV 攻毒前，滴鼻转导Ad5-DPP4。高剂量DPP4 转导组转导剂量为2.5×108 PFU/50μl/只，低剂量DPP4 转导组转导剂量为0.5×108 PFU/50μl/只，PBS 对照组鼻腔滴入50μl PBS。DPP4 转导处理后5 天，进行MERS-CoV 滴鼻攻毒，攻毒剂量为5×105TCID50/50μl/只。观测临床症状和死亡情况。动物安乐死后，取肺组织制备病理标本，进行HE染色和免疫组化染色。剩余3只进行肺灌洗，用于病毒滴度和病毒载量测定。感染后14天，取血，分离血清用于IgG抗体和中和抗体检测。

[1] 姚艳丰，蓝佳明，李枫棣，牛培华，于品，卢帅，鲍琳琳，谭文杰，秦川. 不同剂量DPP4 转导后MERS-CoV感染小鼠模型的临床及生物学特征比较. 病毒学报. 2015，6（31）:593-600. DOI：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.002817.