小耳畸形的病因目前还不完全明确，环境和遗传因素是目前小耳畸形病因研究的重点。先天性小耳畸形在基因突变致病性研究方面还没有阐明小耳畸形胚胎发育的机制。小耳畸形主要涉及胚胎发育期间第一和第二鳃弓的异常，主要表型涉及外耳发育异常。外耳的耳廓是由第一和第二鳃弓的逐渐融合形成的，在发育过程中第一和第二鳃弓之间是相互作用，两弓之间的凹槽加深，形成外耳道，从胚胎的起源来分析，外耳的发育至少在一定程度上是由第一和第二鳃弓通过后脑的部分区域来介导的，后脑是鳃弓的神经嵴细胞的来源，在后脑的第四段基因突变可以导致外耳的发育缺陷。

Bmp5短耳小鼠繁殖 用同窝的雄性和雌性交配获得杂合小鼠，得到后代没有产生突变的小鼠，这些小鼠也未发现外耳短小畸形，将杂合小鼠互相再杂交，根据实验需要陆续获得Bmp5短耳小鼠孕鼠，这些孕鼠可以检测出纯合型、杂合型和野生型胎鼠。该纯合型小鼠是可以生育的，但是纯合型相互交配会得到只有纯合型的后代，最好的繁殖策略还是杂合小鼠互相杂交。 Bmp5短耳小鼠的基因点突变检测 DNA测序：设计引物进行Sanger法测序，应用试剂盒法裂解鼠尾提取DNA洗脱出的DNA于-20℃保存。通过引物3在线平台(http://primer3.ut.ee/)设计候选变异引物，引物序列如下：Bmp5正向引物为GGAGGCATTACAAAGAGTTTCG，反向引物为GAACCATTTCACCAGCTCCT。聚合酶链式反应(PCR)反应体系：金牌Mix(green)27μl，正向引物1μl，反向引物1μl，模板DNA 1μl，扩增产物由擎科生物技术有限公司进行测序。 Bmp5短耳小鼠野生型（上）、杂合型（中）和纯合型（下）的测序峰图，Bmp5点突变位置在外显子2倒数第7个碱基，碱基由C突变为T。

刘伟，蒋海越，杨庆华，何乐人，潘博，林琳.Bmp5短耳小鼠动物模型在先天性小耳畸形研究中的应用[J].中华整形外科杂志，2019,35（11）:684-688.

抑郁症是由抑郁症是一种严重影响人体健康的精神疾病，其患病率约占总人口的3% 。世界卫生组织预测到2020 年抑郁症将成为第二大主要疾病之一，给社会带来极大经济负担，抑郁症已成为全世界共同面临的卫生健康难题。近年来研究发现，应激性生活事件是抑郁症的显著促发因素，引发抑郁的主要原因是来自慢性、低强度、长期的日常压力。

1. 操作流程 实验前将小鼠随机分为对照组和应激组，每天将应激组C57BL /6 小鼠作为侵入者放入长期单独饲养CD1 小鼠的笼内，进行身体接触5 min。5 min 内C57BL /6 小鼠将受到CD1小鼠攻击并表现出逃跑、恐惧、顺从等从属性特征。5 min 身体接触后，使用透明并且有很多小孔的有机玻璃板将二者隔开进行心理应激24 h，保证C57BL /6 小鼠能看到CD1 小鼠，听到CD1 小鼠的声音，而且能闻到CD1 小鼠的气味，应激持续7d或21 d。应激结束后，将C57BL /6 小鼠单独饲养，进行行为学评价。 为了评估应激组C_57小鼠的社会交互行为，在接受最后一次攻击的24小时内开展社会交互实验。实验设备还包括40cmx40cmx40cm大小的白色开放场，7cmx10cmx 40cm大小穿孔透明塑料盒及录像设备。社会交互测试由两部分组成，每部分记录时长为2.5分钟。第一部分，将塑料空盒置于测试场一侧中央位置，轻轻提放被测试者(C57小鼠)于旷场中央，自由活动;  150秒后，将被测试者移除放于自身饲养笼中;同时将具有攻击性的CD1小鼠放在塑料盒内，准备结束后重新放入被测试者。前后两次操作中间的准备时间控制在30s内。分别记录2个部分动物在社会交互区的时间。社会交互区定义为以塑料盒为中心，允许C_57小鼠与盒子及里面的CD1鼠进行互动的区域。   2. 模型分析指标 2.1 悬尾实验     于造模结束后第3 天开始实验。将胶布贴于距小鼠尾尖部约1 cm 处，使小鼠倒挂于悬尾箱支架上，传感器接收小鼠挣扎时的张力变化信号，将信号处理转化后送往计算机，小鼠悬尾实时检测分析处理系统自动记录小鼠不动时间，实验总共6 min，适应2 min 后系统自动统计小鼠后4 min 内悬尾累积不动时间(“不动”即小鼠停止挣扎不动或无任何活动)。 2.2 强迫游泳 利用计算机图像实时检测分析处理系统自动分析记录动物运动状态。将小鼠放入小鼠强迫游泳仪器中( 高20 cm，直径18 cm，水深12 cm)，保持水温(23~25 °C)。动物适应2 min后，系统自动记录动物后4 min 内的累积不动时间( 不动状态即小鼠四肢有轻微动作以保持头部在水面，小鼠呈现出停止挣扎或呈漂浮状态)。

1. Jiang, N., Lv, J., Wang, H., Wang, Q., Lu, C., Yang, Y., … Liu, X. (2019). Antidepressant‐like effects of 20( S )‐protopanaxadiol in a mouse model of chronic social defeat stress and the related mechanisms. Phytotherapy Research. 2019 Oct;33(10):2726-2736. doi:10.1002/ptr.6446 2. Ahmed, A., Zeng, G., Jiang, D., Lin, H., Azhar, M., Farooq, A. D., … Wang, Q. (2019). Time-dependent impairments in learning and memory in Streptozotocin-induced hyperglycemic rats. Metabolic Brain Disease. doi:10.1007/s11011-019-00448-7

老年性痴呆（Alzheimerps disease, AD)是一种神经退行性疾病，多发生于老年人，发病隐匿，病程长，发病机制不清楚，其主要的病理特征为老年斑形成和神经纤维缠结。β淀粉样蛋白（β-amyloid, Aβ）沉积是老年斑形成的主要原因，被认为是AD发病的关键。

1、药品与试剂 Amyloid β 蛋白片段1-40（也有采用Aβ1-28、Aβ1-42或者Aβ25-35）；水合氯醛（或其它麻醉药物如戊巴比妥钠）；无菌生理盐水（或PBS或双蒸水）；H2O2溶液；青霉素钠粉。 脂多糖 (lipopolysaccharide，LPS)，临用前配制成不同浓度备用，通常使用无菌生理盐水或人工脑脊液稀释，根据实验要求进行选择；麻醉药物水合氯醛或戊巴比妥钠；30% H2O2溶液；青霉素钠粉末或注射液。 2. 实验仪器 脑立体定位仪、微量注射泵、微量注射器、手术剪、手术镊子、缝合针线等。 3. 实验方法 3.1. 药品制备 Aβ1-40溶液：临用前将Aβ1-40溶于无菌生理盐水（或PBS或双蒸水）中配制成1 μg/μL母液，置于37 ℃孵育7天，使其聚集、老化，分装后，-20 ℃保存备用； 10%(m/v)水合氯醛溶液：称取水合氯醛10g，加入生理盐水定容至100 mL，备用。 3.2. 手术（以大鼠为例，小鼠操作参照此进行） （1）定位参照George Paxinos的脑立体定位图谱及预实验结果，基本步骤如下： （2）动物称重，用10%水合氯醛腹腔注射麻醉； （3）将大鼠头顶局部用动物去毛器去毛，消毒，并固定于脑立体定位仪上； （4）大鼠头顶处正中矢状切口，使用眼科剪剪开切口长约2cm，用棉棒沾少许H2O2清除骨膜，并用手术刀片将残物刮除干净暴露十字缝，确定前后囟，并使之处于同一平面； （5）坐标定位 大鼠： 海马：取前囟后AP：-3.3 mm，正中矢状缝左右旁开ML：±2.0 mm处使用牙科钻钻孔，进针深度为DV：3.0 mm （如图1A）； 侧脑室：取前囟后AP：-0.9 mm，正中矢状缝左右旁开ML：±1.5 mm处使用牙科钻钻孔，进针深度为DV：3.8 mm（如图1B）； 小鼠： 海马：取前囟后AP：-2.46 mm，正中矢状缝左右旁开ML：±2.2 mm处使用牙科钻钻孔，进针深度为DV：2.1 mm （如图2A）； 侧脑室：取前囟后AP：-0.3 mm，正中矢状缝左右旁开ML：±1.0 mm处使用牙科钻钻孔，进针深度为DV：2.5 mm（如图2B）； （以上坐标为较常见值，亦有许多其他坐标，实验坐标值以自己预实验结果为主。） （6）将微量注射器固定于注射泵臂上，缓慢插入钻孔，单侧海马注射Aβ1-40溶液5 μL，注射速度为1 μL/min，留针5min后缓慢撤针； （7）注射完毕后将青霉素钠盐少许撒于创口处缝合皮肤。 （8）动物手术后观察5-7天，剔除状态不好的动物。 4、行为实验 动物手术后观察5-7天，剔除状态不好的动物。利用行为学设备开展学习记忆行为实验检测。 A B 图 1 大鼠脑立体定位图 （CA1-3海马CA1-3区，LV侧脑室） A B 图 2 小鼠脑立体定位图 （CA1-3海马CA1-3区，LV侧脑室） 图 3 大鼠海马立体定位注射实物图   5. 注意事项 （1）模型建立应严格按照定位图谱进行，撤针时要求缓慢（5min），以防注射的注射药物通过针道溢出； （2） 采用冰冻切片，有利于快速病理染色以证实是否到达注射点； （3）取材时应取前囟后2～5 mm脑组织冠状切片，以防止取材过多或错过注射点。 6. 模型分析指标 6.1 水迷宫 圆形迷宫直径为159cm、高50cm，池中水深25. 5cm 左右，内置平台直径9cm、高24cm，水温维持在( 24 ± 1) ℃。将迷宫置于空间信息相对丰富的实验环境中，作为动物学习过程中的空间参照物，整个试验周期内保持环境信息固定不变。将迷宫均分为4个象限，将平台置于其中一个象限中央，作为实验中动物逃离水环境的唯一途径，空间记忆阶段保持平台位置固定不变。选择其余3个象限作为动物的入水点将动物面向池壁放入水中，每天训练3次，每次变换入水点位置( 使动物可分别从3个象限入水) ，且每天所有动物入水点的顺序保持一致。每次训练前适应10s，使动物获取并学习空间环境信息。设置检测时间为90s 后，将动物放入水中，若动物在90s 内找到平台，算作寻台成功并记录其潜伏期，并使其在平台上停留休息10s。若动物在90s内未找到平台，结束此次训练并记录潜伏期为90s，并引导动物靠近平台使其在平台上停留10s。每只动物训练的时间间隔为40min。每天每只动物3次训练学习的潜伏期平均值，作为评价动物这一天学习能力的指标。经过5d的训练学习后，第6天撤去平台，进行空间探索实验。将动物从原平台象限的对角象限面向池壁放入水中，检测其在90s内穿过原平台所在位置的次数，作为评价空间记忆能力的指标。 6.2 被动回避实验 实验包括获得、巩固两个部分 （1）避暗获得实验：睡眠干扰第27天进行避暗获得实验。实验前每只小鼠面向拱门由明室放入，适应3min。然后开始学习，将小鼠由明室背向拱门放入，当其进入暗室时，给予0.5mA（5s）的电击，共学习5min。 （2）巩固实验：获得实验24h后进行避暗巩固实验，仍将老鼠按原方式由明室放入，记录5min内的错误次数、进入暗室的潜伏期、在暗室停留时间等指标。实验后将老鼠取出，放回笼中。

1. Pan Xu, KezhuWang, Cong Lu, Liming Dong, Li Gao, Ming Yan, SilafuAibai, Yanyan Yang, *Xinmin Liu. Protective effects of linalool against amyloid beta-induced cognitive deficits and damages in mice. Life Sci, 2017, 174: 21–27 2. Cong Lu, Zhe Shi, Xiuping Sun, Ruile Pan, Shanguang Chen, Yinghui Li, Lina Qu, Lihua Sun, Haixia Dang, Lanlan Bu, Lingling Chen, *Xinmin Liu. Kai Xin San aqueous extract improves Aβ1-40-induced cognitive deficits on adaptive behavior learning by enhancing memory-related molecules expression in the hippocampus. J Ethnopharmacol, 2017, 201:73–81

2016年我国天宫二号空间实验室和神舟十一号飞船成功发射、对接、分离成功和神舟十一号飞船的顺利返回，标志着中国的载人航天战略步伐已从短期飞行迈入中长期在轨驻留阶段。人类50多年的航天飞行经验表明，中长期航天飞行过程中，航天员处于持续失重暴露下的高负荷频繁的出舱作业、交流受阻的狭小活动空间，导致心血管功能障碍、失重骨丢失和肌肉萎缩的同时，诱发出焦虑、抑郁，认知功能降低，甚至造成重大操作失误。NASA（Nation America Space Agency美国航天局）在针对21世纪航天发展路线图作出的风险评估报告中指出，未来国际空间站、月球飞行和火星飞行任务中，航天员对复杂操作作业能力的下降，是直接影响航天员健康和工作任务完成的主要原因。俄罗斯的航天飞行实践表明航天员在飞行的头半个月，出现记忆能力减退、近期记忆受损等现象。NASA于1998年就启动了神经实验室计划（Neurolab Mission），希望通过对失重条件下神经系统变化的研究寻找到有效的增强航天员认知能力的措施。

1、实验耗材 伤湿止痛膏、医用橡皮膏 2、实验仪器和环境 模拟失重尾部悬吊实时监测的装置 图1 尾吊装置图及软件界面图 （中国医学科学院药用植物研究所、中国航天员中心联合研制）   3. 实验方法 3.1造模方法 动物适应3-7后开始造模，将动物尾巴距尾根部约1cm处缠上伤湿止痛膏与医用橡皮膏，通过金属链条将其与尾吊仪相连。具体操作如下：将伤湿止痛膏剪成大鼠约长7cm，宽约1cm（小鼠长5cm,宽约0.5cm）的长条状，将其中间段1/3长度延长轴对叠，两头端1/3处粘在大鼠距尾根部约1cm处，使其成一个环形结构，将医用橡皮膏螺旋形包裹在其外部，避免滑脱。将一头带钩的金属链条钩住环状膏药，另一头连接尾吊仪微动开关的环形挂圈，根据需要调节链条长度，并用金属夹将链条固定。尾吊模型动物尾部悬吊，前肢着地，后肢离地，身体与水平面成30-60°。 图2 大鼠尾吊图 3.2、检测方法 根据模拟失重尾部悬吊实时监测装置使用规范调节仪器，开始检测，大鼠自由饮食饮水，全天24小时不间断造模、检测，造模时间依据实验目的而定，通常为14天。14天后进行行为学检测，行为学检测期间应保持大鼠处于造模的尾平/尾吊状态，在行为学检测时应尽量减少动物的非尾吊时间，取下后及时检测，检测完后及时尾吊。具体实验测试方法、检测模式和评价标准见实验方法。   4. 注意事项 4.1.尾吊会造成尾部的血液不循环，缠膏药时若使用力度不合适，易导致尾巴逐渐红肿、疼痛。尾吊时在缠尾部的膏药时注意掌握力度，适时调整。 4.2.尾吊动物多偏狂躁，取挂时应异常小心，取挂时候可以一只手握住动物身体，防止其转头，另一只手将其从尾吊挂钩上取下。 4.3.尾吊期间要保持尾吊环境的干净整洁、室内温湿度的适宜，以及室内的安静，以保证结果的真实可靠。 5. 模型分析指标 5.1 行为学检测 动物按相应分组在模拟失重尾部悬吊实时监测装置中造模3周，造模期间每天8: 00pm 提取当天被监控动物( 8: 00am ～ 12: 00am) 、( 2: 00pm ～ 6:00pm) 、( 8: 00am ～ 8: 00pm) 、( 8: 00pm ～ 8: 00am) 、24 h 等5个时段自主活动数据。同时，每周检测动物摄食饮水量和体重变化。摄食饮水量测定: 造模前一天和造模第7、14、21 天分别测定一次。测量当天上午8: 00 每只动物给予200g 饲料，200 mL 水，第二天同一时刻收集剩余饲料和饮水，摄食饮水量以食物饮水消耗绝对值来评定。体重变化测定: 在造模前一天和造模第7、14、21 天分别称量体重并计算体重变化率，体重变化率= ( 第N 周体重－ 实验前1 天体重) /实验前1 d 体重。

1. 陈怡西, 王琼, 张永亮, 陈善广, 陈晓萍, 高江晖, 刘新民*. 模拟失重大鼠的抑郁样行为学表现[J]. 中国实验方剂学杂志, 2014, 20(17):141-145. 2. 薛涛, 邬丽莎, 陈善, 李莹辉, 曲丽娜, 刘新民*, 王琼. 模拟航天失重大鼠自发活动的改变[J]. 中国比较医学杂志, 2015, 25(1):21-29. 3. Qiong Wang, Yongliang Zhang, Yinghui Li, Shanguang Chen, Jianghui Gao, YiXi Chen, Ning Jiang, *XinMin Liu. The memory enhancement effect of KaiXinSan on cognitive deficit induced by simulated weightlessness in rats. J Ethnopharmacology. 2016, 187: 9–16. 4. Li Feng, Xiaofei Yue, Yixi Chen, Xinmin Liu, Lisha Wang, Fangrui Cao, Qiong Wang, Yonghong Liao, Ruile Pan, *Qi Chang.LC/MS-based metabolomics strategy to assess the amelioration effects of ginseng total saponins on memory deficiency induced by simulatedmicrogravity. J Pharml Biomed Anal. 2016, 125: 329–338. 5. 马静瑶, 陈铃铃, 王琼, 刘新民, 金哲熊, 党海霞. 模拟航天特因环境下大鼠认知功能的影响[J]. 中国比较医学杂志, 2013, 23(10):58-62.

抑郁症是由抑郁症是一种严重影响人体健康的精神疾病，其患病率约占总人口的3% 。世界卫生组织预测到2020 年抑郁症将成为第二大主要疾病之一，给社会带来极大经济负担，抑郁症已成为全世界共同面临的卫生健康难题。近年来研究发现，应激性生活事件是抑郁症的显著促发因素，引发抑郁的主要原因是来自慢性、低强度、长期的日常压力。

1、实验环境 实验室环境隔音，温度：23-25 ℃，湿度：55%。12h/12h明暗周期。动物适应3-5天开始实验。 2、刺激因子 刺激因子 说明 禁食禁水(food ,water deprivation) 禁食或禁水与同时禁食禁水分开应用，同时禁食禁水可用于糖水测试前。 强迫游泳(forced swimming) 大鼠在25℃水中游泳20-30 min 倾笼(cage tilting) 鼠笼倾斜45度，一般安排在禁食禁水之后，加大大鼠进食进水的难度。 湿笼(damp sawdust) 将250 ml水倒入大鼠垫料中 频闪(stroboscopic illumination) 120 flashes/min, 6 h 昼夜颠倒(inversion light/dark cycle) 12小时昼夜颠倒 配对饲养(group housing) 夜间或禁水后应用，更为有效。 束缚(restraint) 将动物放入固定器（长20cm,直径8cm）束缚2-4 h. 间断照明(intermittent light) 2 h 明暗交替 噪声(white noise) 85 dB，30分钟。 除表中列举的刺激因子外，还可选择天敌声音（10-15分钟）、冰水游泳（3-5分钟）等温和性刺激因素。 3.实验步骤 （1）糖水偏爱基线测试 动物单笼饲养，训练大鼠适应含糖饮水：第一个24小时，每笼同时放置两瓶1%蔗糖水；第二个24小时，放置一瓶蔗糖水，一瓶饮用水。大鼠禁食禁水24小时后，同时给予每只大鼠事先称量好的两瓶水:一瓶1 %蔗糖水,一瓶饮用水。1h后，取走两瓶并称重。计算动物的糖水偏爱指数 (糖水偏爱= 糖水消耗/ 总液体消耗×100 %)。依据糖水偏爱指数进行分组。 （2）给予刺激因子 几种不同的应激因素在实验全程中应用，顺序随机，使动物不能预料应激因素的发生。 注：上表仅为举例。实验操作中依据实验者需要进行设计。 4.推荐实验条件 （1）CUMS模型对Wistar 或Lister 品系较为敏感，而对SD或Long-Evans等不敏感。小鼠常用ICR； （2）开始给予刺激因子时，大鼠体重至少为300 g，小鼠至少28 g； （3）刺激因子至少6种以上。 5.注意事项 （1）刺激因子的多变性和不可预测性是模型成功的关键。 （2）糖水偏爱测试时，将水瓶放置于测试房间一段时间再进行检测，测试房间保持安静。17:00左右为测试敏感时间。 （3）糖水偏爱测试前，需禁食禁水，在此之前，不应给予任何应激因素，以免影响糖水测试结果。 （4）要求隔音并且较大的饲养空间。 6. 模型分析指标 6.1 糖水偏爱实验 于造模结束后第1 天开始实验( 造模前进行糖水偏爱训练)。糖水偏爱实验分为训练期( 适应期) 及测试期。训练期内，给予动物一瓶蔗糖糖水(2%) 和一瓶纯水，动物自由饮水，让小鼠适应含糖饮水。动物禁食( 不禁水)8h 后进行动物的糖水/ 纯水消耗实验测试(15h)，根据动物糖水、纯水摄入量计算动物的糖水偏爱指数( 糖水偏爱指数= 糖水消耗/ 总液体消耗×100 %)。本实验进行2次糖水偏爱实验。造模前进行糖水偏爱训练及基线测试，根据结果，将动物分组。应激结束后，再进行一次糖水偏爱测试，以评价CUMS 模型快感缺失的症状。 6.2 新奇抑制摄食实验　 于造模结束后第2天开始实验。新奇抑制摄食实验总共分2 天：第一天为适应期，给药后1 h，将动物放入方形敞箱(42 cm × 31 cm ×20 cm，长 × 宽 × 高) 适应10 min。在动物禁食(不禁水)24 h 后进行新奇抑制摄食实验检测，在敞箱中心放一食丸，将动物背对食丸放入，保持每次同 一位置、同一方向，观察记录动物自放入笼中至首次摄取食物的时间( 即摄食潜伏期)，每次5 min，以动物开始咬食食丸为摄食标准。 6.3 小鼠悬尾实验　　 于造模结束后第3 天开始实验。将胶布贴于距小鼠尾尖部约1 cm 处，使小鼠倒挂于悬尾箱支架上，传感器接收小鼠挣扎时的张力变化信号，将信号处理转化后送往计算机，小鼠悬尾实时检测分析处理系统自动记录小鼠不动时间，实验总共6 min，适应2 min 后系统自动统计小鼠后4 min 内悬尾累积不动时间(“不动”即小鼠停止挣扎不动或无任何活动)。

1.姜宁, 范琳犀, 杨玉洁, 刘新民, 林海英, 高莉, *王琼.金钗石斛提取物对慢性不可预见应激模型小鼠的抗抑郁作用[J]. 生理学报, 2017(2):159-166. 2.Ning Jiang, Beiyue Zhang, LiMing Dong, Jingwei Lv, Cong Lu, Qiong Wang, Linxi Fan, Hongxia Zhang, Ruile Pan, *Xinmin Liu. Antidepressant effects of dammarane sapogenins in chronic unpredictable mild stress‐induced depressive mice[J]. Phytotherapy Research. 2018, 32:1023-1029.

抑郁症是由抑郁症是一种严重影响人体健康的精神疾病，其患病率约占总人口的3% 。世界卫生组织预测到2020 年抑郁症将成为第二大主要疾病之一，给社会带来极大经济负担，抑郁症已成为全世界共同面临的卫生健康难题。近年来研究发现，应激性生活事件是抑郁症的显著促发因素，引发抑郁的主要原因是来自慢性、低强度、长期的日常压力。

1. 药品与试剂 水合氯醛（或其它麻醉药物如戊巴比妥钠）；无菌生理盐水（或PBS或双蒸水）；H2O2溶液；吸收性明胶海绵；青霉素钠粉；云南白药；乙醇。 2. 实验仪器 脑立体定位仪；电动磨钻；自制探针；真空水泵；手术器械。 3. 实验方法 在手术前1周内，每日对大鼠进行2次抚摸以减少应激。术前给予水合氯醛（400 mg/kg，ip）麻醉大鼠，在两耳联线中点处将皮肤切开，暴露颅骨，在距前囟前8 mm，与正中缝两侧旁开2 mm的交点处，分别用电动磨钻将颅骨钻两个直径2 mm 的小孔，用自制探针搅动破坏嗅球后，再用真空泵将破坏的嗅球组织吸出。将吸收性明胶海绵填入小孔止血。假手术大鼠采用相同的手术方法，但在手术定位点上钻孔后不损伤嗅球。术后采用75 %乙醇-云南白药混合剂涂抹伤口，并肌注青霉素钠（40000 U/ml），连续注射4 d，以防术后感染。嗅球切除术后大鼠需恢复14 d，恢复阶段每日抚摸大鼠以减少应激性，14天后方可进行药物处理及行为学测试。行为学测试主要包括开场实验、蔗糖饮水实验、被动回避实验等。 图1 大鼠嗅球解剖位置示意图 4. 注意事项 （1）大鼠体重会影响嗅球解剖位置的定位坐标； （2）术前、术后的抚触可有效减少大鼠的应激反应； （3）手术过程中应尽量减少出血； （4）行为学测试结束后，每只动物需检查嗅球和前额叶皮层位置，对于嗅球切除体积低于70%或损伤前额叶皮层的动物，数据应剔除。 图2 大鼠嗅球切除前后对比（A嗅球切除前；B嗅球切除后） 5. 模型分析指标 5.1 开场实验 利用大鼠自主活动实验实时检测系统进行实验。自主活动测试箱为黑色不锈钢材料制成的圆柱形桶，测试箱顶部敞开。采用图像采集系统对测试大鼠的行为进行实时监测，再通过计算机系统对。大鼠的自主活动信息进行数据处理。检测时将大鼠面壁放入测试箱内，动物放入测试箱内，立即开始检测。每次实验时应从同一位置同一方向放入动物。实验检测时间宜为5 min-10 min。 5.2 强迫游泳实验　 利用计算机图像实时检测分析处理系统自动分析记录动物运动状态。将小鼠放入小鼠强迫游泳仪器中( 高20 cm，直径18 cm，水深12 cm)，保持水温(23~25 °C)。动物适应2 min后，系统自动记录动物后4 min 内的累积不动时间( 不动状态即小鼠四肢有轻微动作以保持头部在水面，小鼠呈现出停止挣扎或呈漂浮状态)。

1. 周云丰,冯利,陶雪,等. 嗅球切除大鼠尿液代谢物的改变和氟西汀的调节作用[J].神经药理学报,2019,9(04):61

应激是人类所处生活环境中普遍存在的一种外界因素。当今社会，生活节奏加快、工作压力增加，生活环境的改变，使人们暴露于应激事件的频率和时间都明显增加。长时间的慢性应激导致的情绪障碍和认知功能损伤，严重影响了人们的生活质量。

1、实验仪器 束缚采用的实验仪器为大、小鼠行为限制器。由聚酯材料构成，透明可视，方便监视大小鼠的行为状态。顶端和底部有多个直径1cm通气孔，有助于大小鼠的呼吸畅通、排泄物的排出，避免对建模带来干扰。行为限制器的长度可调，可将不同体重动物的束缚强度同一化。 图1 行为限制器实物图 2.实验方法 将行为限制器平放、底部敞开，使动物面朝行为限制器敞口进入内部。用配套的塞托封闭开口并固定塞托。使固定后，动物在行为限制器内的空间长度小于其身长，并保证只有头部可以自由活动而四肢活动受限（图2）。 图2 行为限制器的大鼠束缚 慢性束缚模型是采用行为制动的方式对动物产生单纯性心理应激，是比较常用的用于制备情绪、学习记忆障碍等动物模型的方法。引起抑郁、焦虑和学习记忆障碍的束缚强度不同文献报导有一定的差异。大多报导强度在4 h-8 h/day、连续14-48 d 。 慢性束缚致学习记忆模型的建立 一般慢性束缚致大鼠学习记忆障碍模型的建立采用每日限制大鼠活动 10 h( 18: 00 至次日 8: 00) ，限制活动期间各组禁食禁水。连续限制活动 28 d，第 29 天开始进行行为学测试。 一般慢性束缚致小鼠学习记忆障碍模型的建立采用每日限制大鼠活动 6h（10：00-16：00），限制活动期间各组禁食禁水。连续限制活动 21 d，第 22 天开始进行行为学测试。 3、行为学检测 慢性束缚到规定时间后，依实验需要，采用学习记忆行为实验方法进行检测。 4. 注意事项 （1）行为实验检测应在动物自由饮食饮水期间进行。 （2）实验动物大鼠体重应该控制在 280-300 g。小鼠体重应该控制在25-32 g （3）由于束缚器是树脂材料的圆柱形，顶端有数个通气的小孔，才束缚早期由于动物挣扎剧烈，会出现动物窒息的情况，所以一开始需要我们 24 h 观察，及时排除动物窒息死亡的情形。 （4）行为测试完毕后的动物要返回行为限制器内至实验结束。 5. 模型分析指标 5.1 水迷宫实验 圆形迷宫直径为159 cm、高50 cm，池中水深25. 5 cm 左右，内置平台直径9 cm、高24 cm，水温维持在( 24 ± 1) ℃。将迷宫置于空间信息相对丰富的实验环境中，作为动物学习过程中的空间参照物，整个试验周期内保持环境信息固定不变。将迷宫均分为4 个象限，将平台置于其中一个象限中央，作为实验中动物逃离水环境的唯一途径，空间记忆阶段保持平台位置固定不变。选择其余3 个象限作为动物的入水点将动物面向池壁放入水中，每天训练3 次，每次变换入水点位置( 使动物可分别从3 个象限入水) ，且每天所有动物入水点的顺序保持一致。每次训练前适应10 s，使动物获取并学习空间环境信息。设置检测时间为60s 后，将动物放入水中，若动物在60 s 内找到平台，算作寻台成功并记录其潜伏期，并使其在平台上停留休息10 s。若动物在60 s内未找到平台，结束此次训练并记录潜伏期为60 s，并引导动物靠近平台使其在平台上停留10 s。每只动物训练的时间间隔为40 min。每天每只动物3 次训练学习的潜伏期平均值，作为评价动物这一天学习能力的指标。经过5d 的训练学习后，第6 天撤去平台，进行空间探索实验。将动物从原平台象限的对角象限面向池壁放入水中，检测其在60s 内在原平台象限的游程比、时间比，以及穿过原平台所在位置的次数，作为评价空间记忆能力的指标。 5.2 水迷宫工作记忆 空间探索实验结束次日，开始工作记忆实验。工作记忆历时3d，分别将平台置于其余3 个不同象限中，每天变换平台位置，同一天内平台位置保持不变。每天训练3 次，依次从其余3 个非平台象限将动物面朝池壁放入水中。训练前不予适应，其余同空间训练阶段一致。计算3 天中，第2 次训练潜伏期的平均值，作为评价动物学习记忆能力的指标。 5.3新物体识别实验 实验箱为黑色聚酯塑料材质构成的封闭箱，体积为60 cm × 40 cm × 80 cm，箱体左右两侧各有两排LED 灯条照明，既避免了强光直射对动物行为的干扰，又可以作为计算机对动物行为识别的背景光。顶部采用摄像头观察动物的活动情况及探索过程。实验过程分为3 个阶段: 适应期、熟悉期、测试期。适应期为3d，每天将动物依次放入实验箱内，熟悉环境10 min。适应期结束后，次日进行熟悉和测试。熟悉期时，将两个完全相同的物体放入实验箱内对称的位置处，此两物体距离侧箱壁、箱后壁的距离均为10 cm。记录大鼠5 min 内对两物体的探索总时间。间隔30 min 后，进入测试期。测试期内，将其中一个熟悉物体换为另一个大小相近但形状和颜色不同的新颖物体，记录大鼠对新颖物体和熟悉物体的探索时间，用辨别指数( discriminationindex，DI) 来评价动物的学习记忆能力。辨别指数计算公式为DI = ( N-F) /( N + F) × 100%，其中N( new) 为新颖物体探索时间，F( familiar) 为熟悉物体探索时间。

1. 何怡然, 马静遥, 廖端芳, &刘新民*. 慢性束缚应激对大鼠的学习记忆功能的影响. 中国药理学与毒理学杂志,2012,26（3），450. 2. 王逸, 卢聪, 宋广青, 陈怡西, 武宏伟, 王琼, 曲丽娜, 李莹辉, 刘新民*. 慢性束缚应激对SD和Wistar大鼠学习记忆能力的影响[J]. 中国实验动物学报, 2014, 22(2):40-44. 3. Kezhu Wang, Pan Xu, Cong Lu, Liming Dong, Beiyue Zhang, Jingwei Lu, Yanyan Yang, * Xinmin Liu. Effects of Ginsenoside Rg1 on Learning and Memory in a Reward-directed Instrumental Conditioning Task in Chronic Restraint Stressed Rats. Phytother. Res. 2017, 31: 81–89.4. 4. Liming Dong, Yi Wang, Jingwei Lv, Hongxia Zhang, Ning Jiang, Cong Lu, Pan Xu, *Xinmin Liu. Memory enhancement of fresh ginseng on deficits induced by chronic restraint stress in mice. Nutr Neurosci. 2019 Apr;22(4):235-242.

抑郁症是由抑郁症是一种严重影响人体健康的精神疾病，其患病率约占总人口的3% 。世界卫生组织预测到2020 年抑郁症将成为第二大主要疾病之一，给社会带来极大经济负担，抑郁症已成为全世界共同面临的卫生健康难题。近年来研究发现，应激性生活事件是抑郁症的显著促发因素，引发抑郁的主要原因是来自慢性、低强度、长期的日常压力。

1、实验仪器 束缚采用的实验仪器为大、小鼠行为限制器。由聚酯材料构成，透明可视，方便监视大小鼠的行为状态。顶端和底部有多个直径1cm通气孔，有助于大小鼠的呼吸畅通、排泄物的排出，避免对建模带来干扰。行为限制器的长度可调，可将不同体重动物的束缚强度同一化。 图1 行为限制器实物图 2.实验方法 将行为限制器平放、底部敞开，使动物面朝行为限制器敞口进入内部。用配套的塞托封闭开口并固定塞托。使固定后，动物在行为限制器内的空间长度小于其身长，并保证只有头部可以自由活动而四肢活动受限（图2）。 图2 行为限制器的大鼠束缚 慢性束缚模型是采用行为制动的方式对动物产生单纯性心理应激，是比较常用的用于制备情绪、学习记忆障碍等动物模型的方法。引起抑郁、焦虑和学习记忆障碍的束缚强度不同文献报导有一定的差异。大多报导强度在4 h-8 h/day、连续14-48 d 。 慢性束缚致抑郁模型的建立 一般慢性束缚致大鼠抑郁模型的建立采用每日限制大鼠活动 14 h( 18: 00 至次日 8: 00) ，限制活动期间各组禁食禁水。连续限制活动 28 d，第 29 天开始进行行为学测试。 一般慢性束缚致小鼠抑郁模型的建立采用每日限制大鼠活动 6 h( 10: 00 至16: 00) ，限制活动期间各组禁食禁水。连续限制活动 21 d，第 22天开始进行行为学测试。 3、行为学检测 慢性束缚到规定时间后，依实验需要，采用抑郁行为实验方法进行检测。 4. 注意事项 （1）行为实验检测应在动物自由饮食饮水期间进行。 （2）实验动物大鼠体重应该控制在 280-300 g。小鼠体重应该控制在25-32 g （3）由于束缚器是树脂材料的圆柱形，顶端有数个通气的小孔，才束缚早期由于动物挣扎剧烈，会出现动物窒息的情况，所以一开始需要我们 24 h 观察，及时排除动物窒息死亡的情形。 （4）行为测试完毕后的动物要返回行为限制器内至实验结束。 5. 模型分析指标 5.1 体重检测 分别于第8、15、22、29、36、43、50 d 称量大鼠的体重。 5.2 糖水偏爱实验 于造模结束后第1 天开始实验( 造模前进行糖水偏爱训练)。糖水偏爱实验分为训练期( 适应期) 及测试期。训练期内，给予动物一瓶蔗糖糖水(2%) 和一瓶纯水，动物自由饮水，让小鼠适应含糖饮水。动物禁食( 不禁水)8 h 后进行动物的糖水/ 纯水消耗实验测试(15h)，根据动物糖水、纯水摄入量计算动物的糖水偏爱指数( 糖水偏爱指数= 糖水消耗/ 总液体消耗×100 %)。本实验进行2 次糖水偏爱实验。造模前进行糖水偏爱训练及基线测试，根据结果，将动物分组。应激结束后，再进行一次糖水偏爱测试，以评价CUMS 模型快感缺失的症状。 5.3 新奇事物实验 于自主活动实验次日将大鼠放入自主活动测试箱中测试。测试前在测试箱中央放入一个蓝色的圆柱体新奇事物。实验时将大鼠面向测试箱壁放入，并记录10 min 内首次探索新奇事物的时间( 即潜伏期，10 min 内无探索行为，则潜伏期时间记为10 min) 、探索次数以及探索时间。

1.张北月, 卢聪, 董黎明,徐攀,何怡然,石晋丽,*刘新民. 不同时长的束缚应激致雌雄大鼠的抑郁样行为改变[J]. 中国比较医学杂志, 2016, 26(11): 18-23. 2.Pan Xu, Kezhu Wang, Cong Lu, Liming Dong, Yixi Chen, Qiong Wang, Zhe Shi, Yanyan Yang, Shanguang Chen, *Xinmin Liu. Effects of the chronic restraint stress induced depression on reward-related learning in rats. Behav Brain Res, 2017, 321:185–192

睡眠干扰(Sleep Interruption，SI)是指由于环境或自身原因无法满足正常睡眠的情况，一般指在24小时中的睡眠小于4小时。睡眠干扰可以分为部分睡眠干扰（partial sleep interruption, PSI）和完全睡眠干扰（total sleep interruption, TSI）。TSI指24h之内完全无睡眠；PSI一般指24h之内睡眠量通常达不到4h。从1896年Patrick等首次研究睡眠干扰对人体的影响以来，睡眠的重要性受到了科学界的广泛关注。包括航空航天航海等军事特因环境下，由于昼夜生物节律颠倒，睡眠周期紊乱，睡眠不足或睡眠障碍，造成作业人员机体免疫力、作业能力、警觉性和判断力降低，影响作业任务的完成，严重者危及生命。

使用大、小鼠睡眠干扰仪进行建模，自行设定控制参数，仪器运转，对睡眠干扰仪内饲养动物进行睡眠干扰。实验分为两个阶段： 1.1 滚筒适应期 在睡眠干扰仪内水瓶装满动物饮用水、食物后，将除去空白对照组之外的动物放入睡眠干扰仪中，设置干扰参数如：转速（1r/min），转圈1圈，休息时间（2min），随机转动。设置完成后，选择“开始”，实验开始，仪器开始运转。每天3小时（每天固定相同时间段），连续滚筒适应3天。实验结束后打开滚筒壁取出动物，放回动物房。 图1 睡眠干扰仪装置图 1.2造模期 滚筒适应结束后开始正式造摸，将除去空白对照组之外的小鼠按上述步骤放入睡眠干扰仪，按适应期设定的参数，进行连续睡眠干扰至少14天。空白对照组饲养于动物房内。 2. 模型分析指标 （1）空场实验  于检测当天将睡眠干扰仪内的动物取出提前放于检测房间进行适应，腹腔注射给药30 min后，将小鼠放入自主活动测试箱内。待小鼠适应测试箱环境3 min后开始检测，检测时间为10 min。计算机对摄像头实时监控到的小鼠视频图像进行分析处理后，得到小鼠的总路程、运动时间、静止时间等一系列指标，以此来分析小鼠的自主活动情况。 （2）新物体识别实验   实验过程分为 3 个阶段: 适应期、熟悉期、测试期。适应期为 3d， 每天将动物依次放入实验箱内，熟悉环境 10 min。适应期结束后，次日进行熟悉和测试。熟悉期时，将两个完全相同的物体放入实验箱内对称的位置处，此两物体距离侧箱壁、箱后壁的距离均为 10 cm。记录小鼠鼠 5 min 内对两物体的探索总时间。间隔 30 min 后，进入测试期。测试期内，将其中一个熟悉物体换为另一个大小相近但形状和颜色不同的新颖物体，记录小鼠对新颖物体和熟悉物体的探索时间，用辨别指数 ( discrimination index，DI) 来评价动物的学习记忆能力。辨别指数计算公式为 DI = ( N-F) /( N + F) × 100% ， 其中N( new) 为新颖物体探索时间，F( familiar) 为熟悉物体探索时间。 在实验过程中，为避免动物对某一位置产生偏爱，物体的位置要相互平衡，以便减少实验误差。新物体识别实验反映的是动物对物体辨别的短时、非空间记忆能力。 （3）水迷宫实验 3.1 水迷宫空间记忆 迷宫分为 4 个象限，将平台置于其中一个象限中央，作为实验中动物逃离水环境的唯一途径， 空间记忆阶段保持平台位置固定不变。选择其余 3 个象限作为动物的入水点将动物面向池壁放入水中，每天训练 3 次，每次变换入水点位置( 使动物可分别从 3 个象限入水)，且每天所有动物入水点的顺序保持一致。每次训练前适应 10 s，使动物获取并学习空间环境信息。设置检测时间为 60s 后，将动物放入水中，若动物在 60 s 内找到平台，算作寻台成功并记录其潜伏期，并使其在平台上停留休息 10 s。若动物在 60 s内未找到平台，结束此次训练并记录潜伏期为 60 s，并引导动物靠近平台使其在平台上停留 10 s。每只动物训练的时间间隔为 40 min。每天每只动物 3 次训练学习的潜伏期平均值，作为评价动物这一天学习能力的指标。经过 5d 的训练学习后，第 6 天撤去平台， 进行空间探索实验。将动物从原平台象限的对角象限面向池壁放入水中，检测其在 60s 内在原平台象限的游程比、时间比，以及穿过原平台所在位置的次数，作为评价空间记忆能力的指标。

1.Cong Lu, Yan Wang, Teng Xu, Qi Li, Donghui Wang, Lijing Zhang, Bei Fan, *Fengzhong Wang, Xinmin Liu. Genistein Ameliorates Scopolamine-Induced Amnesia in Mice Through the Regulation of the Cholinergic Neurotransmission, Antioxidant System and the ERK/CREB/BDNF Signaling. Frontiers in Pharmacology, 2018, 9. 2.Cong Lu, Jingwei Lv, Liming Dong, Ning Jiang, Yan Wang, Bei Fan, Fengzhong Wang, Xinmin Liu. The protective effect of 20(S)-protopanaxadiol (PPD) against chronic sleep deprivation (CSD)-induced memory impairments in mice[J]. Brain Research Bulletin, 2018, 137:249-256. 3.Cong Lu, Yan Wang, Jingwei Lv, Ning Jiang, Bei Fan, Lina Qu, Yinghui Li, Shanguang Chen, Fengzhong Wang, Xinmin Liu. Ginsenoside Rh2 reverses sleep deprivation-induced cognitive deficit in mice[J]. Behavioural Brain Research, 2018,349:109-115 4.Li Feng, Hongwei Wu, Guangqing Song, Cong Lu, Yinghui Li, Lina Qu, Shanguang Chen, Xinmin Liu, Qi Chang. Chronical sleep interruption-induced cognitive decline assessed by a metabolomics method. Behav Brain Res. 2016, 302: 60–68. 5.卢聪, 金剑, 王克柱, 李莹辉, 曲丽娜,刘新民, 斯拉甫·艾白. 人参皂苷 Rg1、Rb1对睡眠干扰所致 SD 大鼠认知和运动行为障碍的影响[J].中国现代中药, 2016, 18(1): 82-87. 6.卜兰兰, 石哲, 武宏伟, 卢聪, 王克柱, 李莹辉, 曲丽娜, 刘新民. 达玛烷苷元对睡眠干扰所致小鼠学习记忆的改善作用[J]. 中国比较医学杂志, 2014, 24(10): 48-53. 7.买文丽, 王琼, 孙丽华, 冯志强, 潘瑞乐, 刘新民. 开心散对睡眠剥夺小鼠学习记忆的影响[J]. 时珍国医国药, 2011, 22(10): 2331-2333.

当妇女进入更年期后，卵巢功能降低，雌激素水平下降，雌激素对于中枢神经系统的神经保护作用减弱，老年性痴呆等中枢神经系统疾病的患病风险增加。目前常用的模拟更年期妇女雌激素低下的动物模型是卵巢摘除模型（ovariectomy/oophorectomy，简称ovx），可以很好的模拟更年期妇女雌激素低下的生理及病理状态。

1. 卵巢摘除术 结合Merle E及常艳报道的小鼠卵巢摘除术的方法，操作步骤如下：小鼠称重，4%水合氯醛溶液(400mg/kg bw)腹腔注射麻醉；将小鼠呈俯卧式固定于手术板上，以其两侧后肢大腿根部上缘连线与背部正中线交点以上0.5cm左右为中心，沿背部后中线作一长约0.5-1cm的皮肤切口；沿皮下组织向左侧游离大约0.5cm，可见菲薄的肌层下方发亮的脂肪组织；用镊子提起脂肪团表面肌层，纵行剪开肌层，在脂肪组织中找到左侧卵巢；结扎子宫角末端，摘除左侧卵巢、输卵管和一小部分子宫角，缝合剪开的肌层；同法向右游离切除右侧卵巢；最后缝合背部皮肤；假手术组除不摘除卵巢外其余操作和模型组相同；术后24h以后对小鼠行至少连续5天的阴道涂片检查，判断卵巢摘除是否完全。 图1卵巢摘除过程 2. 阴道涂片检查 为评价卵巢摘除是否彻底，术后连续5天每天固定时间行阴道涂片检查，方法如下：用小鼠灌胃针吸取大约两滴生理盐水，在小鼠阴道内吸打3-4次；吸出适量阴道液置于96孔板中，于普通光学显微镜下观察；阴道细胞检查结果角化细胞均不超过50%判定为卵巢摘除彻底。 3. 模型分析指标 （1）物体认知-新物体识别   实验过程分为3个阶段：适应期、熟悉期、测试期。适应期为3天，每天将动物背对箱体依次放入实验箱中部位置后开始使之适应实验箱环境10 min。适应期结束后，次日进行熟悉期和测试期。熟悉期，将两个完全相同的物体放入实验箱内相邻的磁铁处固定，记录小鼠5 min内对两物体的探索行为，比较动物对熟悉物体A1和熟悉物体A2的探索时间来评价动物对物体所在位置是否存在偏爱性，用动物对物体对的总探索时间来评价动物对物体的探索能力是否存在偏差。间隔30 min后开始测试期，将其中一个熟悉物体变换为新物体，另一熟悉物体保持不变。记录小鼠在测试期内对新颖物体和原熟悉物体的探索时间，用相对辨别指数来评价动物的学习记忆能力。相对辨别指数计算公式为DI = (N-F) /(N+F) ×100%，其中N（new）为动物对新颖物体的探索时间，F（familiar）为动物对原熟悉物体的探索时间。 在实验过程中，为避免动物对某一位置产生偏爱，物体的位置要相互平衡，以便减少实验误差。新物体识别实验反映的是动物对物体辨别的短时、非空间记忆能力。 （2）避暗实验  避暗实验是利用啮齿类动物趋暗避明的习性设计，当动物进入暗室即遭足底电击，反复数次后形成条件反射。该实验用于检测啮齿类动物的短时学习记忆和再现能力。实验分为避暗学习Day1和避暗巩固Day2两个阶段，历时2d。 避暗学习阶段Day1：首先将避暗实时在线软件系统设置为：刺激电流1.5mA，刺激电压30V，实验时间5min。接着在开始实验前将动物背朝通道小门放入明室自由活动5min适应测试箱体环境后取出。随后开始避暗学习实验，在摄像头识别到动物第一次进入暗室后，暗室栅栏开始通电，动物遭受电击会逃到明室，持续5分钟，实验结束。避暗学习结束后立即将动物放回睡眠干扰仪内继续睡眠干扰。 避暗巩固阶段Day2：避暗学习后24h进行。参数设置同前。将动物背朝通道小门放入明室立即开始实验，暗室即可通电，记录5min内错误次数(进入暗室的次数)，潜伏期(第一次从明室到暗室的时间)、暗室时间、明室时间、暗室路程等指标评价动物的避暗记忆再现能力。 （3）水迷宫实验 3.1 水迷宫空间记忆 迷宫分为 4 个象限，将平台置于其中一个象限中央，作为实验中动物逃离水环境的唯一途径， 空间记忆阶段保持平台位置固定不变。选择其余 3 个象限作为动物的入水点将动物面向池壁放入水中，每天训练 3 次，每次变换入水点位置( 使动物可分别从 3 个象限入水)，且每天所有动物入水点的顺序保持一致。每次训练前适应 10 s，使动物获取并学习空间环境信息。设置检测时间为 60s 后，将动物放入水中，若动物在 60 s 内找到平台，算作寻台成功并记录其潜伏期，并使其在平台上停留休息 10 s。若动物在 60 s内未找到平台，结束此次训练并记录潜伏期为 60 s，并引导动物靠近平台使其在平台上停留 10 s。每只动物训练的时间间隔为 40 min。每天每只动物 3 次训练学习的潜伏期平均值，作为评价动物这一天学习能力的指标。经过 5d 的训练学习后，第 6 天撤去平台， 进行空间探索实验。将动物从原平台象限的对角象限面向池壁放入水中，检测其在 60s 内在原平台象限的游程比、时间比，以及穿过原平台所在位置的次数，作为评价空间记忆能力的指标。 3.2 水迷宫工作记忆 空间探索实验结束次日， 开始工作记忆实验。工作记忆历时 3d，分别将平台置于其余 3 个不同象限中，每天变换平台位置，同一天内平台位置保持不变。每天训练 3 次，依次从其余 3 个非平台象限将动物面朝池壁放入水中。训练前不予适应， 其余同空间训练阶段一致。计算 3 天中， 第 2 次训练潜伏期的平均值，作为评价动物学习记忆能力的指标。

痴呆为一种后天获得性智能障碍综合症，是指意识清晰的病人，由于大脑器质性或代谢性病变造成的持续性、进行性智能衰退。老年性痴呆系指65岁以上老年人患有的痴呆。主要有阿尔茨海默痴呆（AD）和血管性痴呆（VD）。阿尔茨海默病（AD）是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。由德国神经病理学家Alois　Alzheimer于1906年最先描述。

1. 药品的制备 实验前，以0.9%的生理盐水溶解东莨菪碱，配制0.1mg/mL（或其他所需浓度）的溶液。溶液配制需在避光条件下完成，且溶液需置于棕色瓶中暂时储存。 2.造模方法 适应性饲养3天后，根据随机表将小鼠随机分为5个组：正常组、SCOP各剂量组（0.25、0.5、1、2 mg/kg/d），于每次行为学检测前半小时腹腔注射不同剂量SCOP进行造模，给药体积为0.2ml/10g。 3. 模型分析指标 （1）自主活动测试   小鼠自主活动实时检测分析处理系统进行自主活动实验，检测时，将小鼠沿壁放入将小鼠置于测试箱适应2~ 3min后，设定参数后开始实验。软件自动采集分析动物10 min内运动轨迹，通过总路程、平均速度、运动总时间、静息总时间反映动物自主活动情况。 （2）水迷宫实验（Morris water maze） 2.1 水迷宫空间记忆 迷宫分为 4 个象限，将平台置于其中一个象限中央，作为实验中动物逃离水环境的唯一途径， 空间记忆阶段保持平台位置固定不变。选择其余 3 个象限作为动物的入水点将动物面向池壁放入水中，每天训练 3 次，每次变换入水点位置( 使动物可分别从 3 个象限入水)，且每天所有动物入水点的顺序保持一致。每次训练前适应 10 s，使动物获取并学习空间环境信息。设置检测时间为 60s 后，将动物放入水中，若动物在 60 s 内找到平台，算作寻台成功并记录其潜伏期，并使其在平台上停留休息 10 s。若动物在 60 s内未找到平台，结束此次训练并记录潜伏期为 60 s，并引导动物靠近平台使其在平台上停留 10 s。每只动物训练的时间间隔为 40 min。每天每只动物 3 次训练学习的潜伏期平均值，作为评价动物这一天学习能力的指标。经过 5d 的训练学习后，第 6 天撤去平台， 进行空间探索实验。将动物从原平台象限的对角象限面向池壁放入水中，检测其在 60s 内在原平台象限的游程比、时间比，以及穿过原平台所在位置的次数，作为评价空间记忆能力的指标。

病毒性感染可导致肝脏损伤。在人类可导致肝脏损伤的病毒包括乙型肝炎病毒、EB病毒等。病毒的感染可出现进行感染症状，也可发展成慢性炎症。对于病毒性肝病的预防、治疗也感染机制的研究，特别是基于免疫应答的调节研究，需要适用的临床前的动物模型。

实验材料 实验动物为SPF级BALB/c小鼠，感染症状等与性别无明显关系，感染优选3周龄小鼠。 实验使用毒株为ATCC来源MHV毒株（A59）。 实验环境 ABSL-2实验室， 使用负压IVC饲养动物 使用AII型生物安全柜更换动物垫料，并进行感染等操作。 实验操作规程： 病毒扩增：在BSL-2实验室进行病毒扩增，并使用TCID50法测定病毒滴度 使用1,000 TCID50／只动物进行灌胃感染 监测动物临床表征变化 监测动物死亡率 动物处理伦理： 动物感染实验，动物的痛苦不可避免，应按照伦理审查确定研究的科学性，并根据研究需要减少动物的使用。