Bmp5短耳小鼠动物模型(B6.Cg-Bmp5se)

1. Bmp5短耳小鼠繁殖

用同窝的雄性和雌性交配获得杂合小鼠，得到后代没有产生突变的小鼠，这些小鼠也未发现外耳短小畸形，将杂合小鼠互相再杂交，根据实验需要陆续获得Bmp5短耳小鼠孕鼠，这些孕鼠可以检测出纯合型、杂合型和野生型胎鼠。该纯合型小鼠是可以生育的，但是纯合型相互交配会得到只有纯合型的后代，最好的繁殖策略还是杂合小鼠互相杂交。

2. Bmp5短耳小鼠的基因点突变检测

DNA测序：设计引物进行Sanger法测序，应用试剂盒法裂解鼠尾提取DNA洗脱出的DNA于-20℃保存。通过引物3在线平台(http://primer3.ut.ee/)设计候选变异引物，引物序列如下：Bmp5正向引物为GGAGGCATTACAAAGAGTTTCG，反向引物为GAACCATTTCACCAGCTCCT。聚合酶链式反应(PCR)反应体系：金牌Mix(green)27μl，正向引物1μl，反向引物1μl，模板DNA 1μl，扩增产物由擎科生物技术有限公司进行测序。

Bmp5短耳小鼠野生型（上）、杂合型（中）和纯合型（下）的测序峰图，Bmp5点突变位置在外显子2倒数第7个碱基，碱基由C突变为T。

1. Bmp5短耳（se）小鼠外耳表型

Bmp5纯合型短耳小鼠发现耳廓结构都非常短小，发育明显较其正常同胞小，失去正常小鼠耳廓亚结构形态，小鼠外耳发育的差异在2周龄时随着发育更加明显。

2.Bmp5短耳（se）小鼠骨骼阿利新蓝染色方法

选取发育到40d的短耳小鼠和正常小鼠各3只剥皮处理，放入75%乙醇固定2周，然后放入阿利新蓝工作液中进行软骨染色2 d（根据样品大小调整染色时间），再放入茜素红工作液中染色1d，放入1.5%双氧水溶液中进行漂白（肉眼可见色素去除为标准），脱色后依次放入20%、40%、60%、80%的甘油进行梯度透明各2周，最后放入100％纯甘油中进行保存。

A:小鼠全身骨骼染色，左侧为畸形小鼠，右侧为同胞正常小鼠； B: 局部胸廓及肋骨染色，左为畸形小鼠，右为同胞正常小鼠

可见Bmp5短耳（se）纯合型突变畸形小鼠的体形较正常野生型较小，特别是胸骨和肋骨的发育可见明显的异常，Bmp5短耳（se）纯合型突变畸形小鼠胸骨剑突较正常短小，发育不良，肋骨较细短，胸廓整体发育较正常差，小鼠尾骨发育也较细短。