HMG-CoA还原酶是胆固醇合成过程中的限速酶，HMG-CoA还原酶活性增加，则内源性胆固醇合成增多。磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）是催化胆固醇酯（CE）合成的关键酶，血浆胆固醇几乎70％~80％是胆固醇酯，均是LCAT催化生成所致，胆固醇酯的水平降低，会导致血清游离胆固醇浓度的升高。因此，HMG-CoA还原酶和LCAT是维持机体胆固醇水平的关键酶。P-407能够上调金黄地鼠肝脏中HMG-CoA还原酶的mRNA表达水平，并下调LCAT的表达水平，干扰了胆固醇的合成和酯化的关键途径，从而引起脂质代谢紊乱。

1.P-407的配制（300 mg/kg）及注射 采用生理盐水配制P-407，腹腔注射，注射体积为0.1 ml/10 g体重。 2.实验动物 可使用SPF级别的金黄地鼠。 3. 模型分析指标 （1）在给药途径选择上，P-407腹腔注射引起血脂升高的幅度较灌胃给药大；（2）在动物性别选择上，P-407诱导雄性金黄地鼠血脂异常较雌性明显，并且周龄小（6周）的金黄地鼠血脂异常个体差异较周龄大（24周）的动物小，（3）在选择合适的维持剂量及给药间隔时间方面，血清TG和TC稳定峰值时间分别出现在首剂量注射后的第24 h和48 h，而在血脂水平下降阶段给予维持注射剂量P-407，可使血脂水平稳定在一定范围；通过考察多种注射方案，最终确定P-407首剂量注射300 mg·kg-1 后，每72 h腹腔注射200 mg·kg-1，则能够形成血脂水平适度升高的、较理想的脂质代谢紊乱金黄地鼠模型。

泊洛沙姆407诱发金黄地鼠脂质代谢紊乱模型及其初步机制. 药学学报，2011,46（4）:406-411

代谢综合征（metabolic syndrome, MS）是多种代谢成分异常聚集的病理状态，包括：（1）腹部肥胖或超重，（2）致动脉粥样硬化血脂异常（高甘油三酯（TG）血症及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）低下，（3）高血压及（4）胰岛素抗性及/或葡萄糖耐量异常。其发病原因主要是胰岛素抵抗，产生胰岛素抵抗的原因有遗传性（基因缺陷）和获得性（环境因素）两个方面。

1.实验动物准备 正常雌、雄性Wistar大鼠饲养于清洁级动物房，按照2:1比例交配繁育。新生鼠于出生第二天起，皮下注射L-谷氨酸钠4 g/kg，连续7天。21天后断乳，按雌雄分笼饲养。定期记录体重，观察体型变化。 2.模型分析指标 成年后可形成严重的向心性肥胖和糖脂代谢紊乱，导致明显的高胰岛素血症、高血脂、脂肪肝并伴有糖耐量异常和胰岛素抵抗，是一种具有典型代谢综合征特征的实验动物模型。

1.丁世英，申竹芳，谢明智。MSG肥胖大鼠胰岛素抵抗特征的初步研究。《中国药理学通报》2001,17（2）：181-185。 2.李平平，孙素娟，陈跃腾，刘泉，申竹芳。肥胖性胰岛素抵抗MSG大鼠肝脏蛋白质组学初步研究。《中国药理通讯》2006（3）：34-35。 3.刘率男，刘泉，申竹芳。代谢综合征MSG肥胖大鼠胰岛β细胞功能紊乱机制的初步研究。《药学学报》2008（11）：1106-1111。

健康人接受葡萄糖刺激后，胰岛素呈双相分泌，1相分泌发生在糖刺激后5至10 min，血胰岛素水平急剧升高并快速降低，随后进入2相分泌，并随着糖刺激的存在而持续发生。胰岛素1相分泌减少是引起糖耐量异常的主要因素。

1. 柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液配制 称取1.197 g柠檬酸，1.264 g柠檬酸三钠，加90 ml双蒸水完全溶解后调节pH值至4.4，定容至100 ml，4度保存备用。 2. 链脲霉素溶液配制（30 mg/kg）及注射 采用柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液配制链脲霉素溶液，配制后避光冰浴保存。腹腔注射前所有大鼠禁食过夜（自由饮水），一般大鼠的注射体积为1 ml/100 g体重。 3. 高脂饲料喂养 注射STZ后2-3周进行葡萄糖耐量实验，挑选糖耐量异常者，加喂高脂高糖半合成高热量饲料（24%脂肪，52%蔗糖，18%蛋白质及适量混合盐、维生素及纤维素等，热量为4.8 Cal/g）。 4. 实验动物 可使用SPF级别的雌性Wistar大鼠。 5. 模型分析指标 高脂高糖半合成高热量饲料喂养8周后，进行葡萄糖耐量和胰岛素耐量实验，并测定空腹血清甘油三酯、总胆固醇和胰岛素水平。

健康人接受葡萄糖刺激后，胰岛素呈双相分泌，1相分泌发生在糖刺激后5至10 min，血胰岛素水平急剧升高并快速降低，随后进入2相分泌，并随着糖刺激的存在而持续发生。胰岛素1相分泌减少是引起糖耐量异常的主要因素。临床中部分患者空腹血糖正常，但餐后血糖明显升高，即糖耐量异常，被认为处于糖尿病前期。如果不加以控制，那么会增加发生糖尿病的风险。

1. 柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液配制 称取1.197 g柠檬酸，1.264 g柠檬酸三钠，加90 ml双蒸水完全溶解后调节pH值至4.4，定容至100 ml，4度保存备用。 2. 链脲霉素溶液配制（40 mg/kg）及注射 采用柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液配制链脲霉素溶液，配制后避光冰浴保存。腹腔注射前所有小鼠禁食过夜（自由饮水），一般小鼠的注射体积为0.1 ml/10 g体重。 3. 高脂饲料喂养 小鼠注射STZ后一周开始给予高脂饲料喂养（脂肪含量60%），定期监测血糖和体重。 4. 模型分析指标 喂养高脂饲料过程中，定期监测小鼠血糖和体重，并进行口服葡萄糖耐量实验，考察口服葡萄糖负荷后30 min的血糖水平，计算30 min血糖上升百分数。如果显著高于正常对照组小鼠，则表示模型成功。

糖尿病是一种复杂的慢性代谢性疾病，主要发病机制为胰岛素抵抗和胰岛beta细胞功能紊乱。糖尿病可以分为1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病和特殊类型糖尿病。1型糖尿病患者主要表现为多饮、多食和多尿，由于胰岛beta细胞破坏严重，需要依赖胰岛素治疗。

1.柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液配制 称取1.197 g柠檬酸，1.264 g柠檬酸三钠，加90 ml双蒸水完全溶解后调节pH值至4.4，定容至100 ml，4度保存备用。 2.链脲霉素溶液配制（65 mg/kg）及注射 采用柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液配制链脲霉素溶液，配制后避光冰浴保存。腹腔注射前所有大鼠禁食过夜（自由饮水），一般大鼠的注射体积为1 ml/100 g体重。 3.实验动物 可使用SPF级别的SD和Wistar大鼠，体重一般在160-180 g。 4. 模型分析指标 注射链脲霉素后密切观察垫料是否很湿，如果很湿，则表明出现多尿症状。一般注射后3 天测定血糖，即可表现出高血糖特征，并可分组进行实验。

糖尿病是一种复杂的慢性代谢性疾病，主要发病机制为胰岛素抵抗和胰岛beta细胞功能紊乱。糖尿病可以分为1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病和特殊类型糖尿病。1型糖尿病患者主要表现为多饮、多食和多尿，由于胰岛beta细胞破坏严重，需要依赖胰岛素治疗。

1.四氧嘧啶溶液配制（80 mg/kg）及注射 采用生理盐水配制四氧嘧啶溶液，配制后避光冰浴保存。尾静脉注射，一般ICR小鼠的注射体积为0.1 ml/10 g体重。 2.实验动物 可使用SPF级别的ICR小鼠，注射时体重24-28 g最佳。 3. 模型分析指标 注射四氧嘧啶后密切观察垫料是否很湿，如果很湿，则表明出现多尿症状。一般注射后3 天测定血糖，即可表现出高血糖特征，并可分组进行实验。

健康人接受葡萄糖刺激后，胰岛素呈双相分泌，1相分泌发生在糖刺激后5至10 min，血胰岛素水平急剧升高并快速降低，随后进入2相分泌，并随着糖刺激的存在而持续发生。胰岛素1相分泌减少是引起糖耐量异常的主要因素。

1.实验动物准备 雌性KKAy小鼠，8周龄，给予高脂饲料（脂肪含量45%）喂养2-3周后，采用OGTT实验监测其口服葡萄糖负荷后血糖上升状态。 2.模型分析指标 高脂饲料喂养后，KKAy小鼠空腹血糖轻度升高，OGTT中葡萄糖负荷后各时间点血糖值较正常动物显著升高，且伴有轻度血脂升高。

脂代谢紊乱和代谢综合征

1.诱导剂准备 鉴于PPARA基因在小鼠的基因组Chr15中有11个转录本，exon2,exon3, exon4, exon5, exon6, exon7和exon8是11个转录本的重叠区域，因此在这段区域的序列上设计sgRNA即可破坏11个转录本的表达。根据sgRNA的网络设计软件“http://crispr.mit.edu/”挑选打分最高的4条sgRNA进行后续的切割效率检测。做成RNP复合物。 2.实验动物 SPF级C57BL6J小鼠取受精卵修饰，ICR小鼠作为受体。 3.模型分析指标 （1）基因检测 小鼠出生后提取DNA检测目的基因，确实发生了缺失。 （2）蛋白表达检测 提取蛋白采用蛋白印迹方法检测蛋白表达差异。 （3）病理诊断 实验，HE染色观察病理改变。

尿酸是人体嘌呤代谢的终产物，主要有肝脏代谢产生，肾脏排泄出体外。高尿酸血症（hyperuricemia，HUA）是血液中由于肝脏代谢产生尿酸过多或肾脏排泄尿酸减少，或者两者兼有的原因产生血液中尿酸水平增高，甚至高于血尿酸产生结晶的饱和浓度（>7.0mg/dl，相当于416.5μmol/L）的病理状态。

1.诱导剂准备 肌苷(Inosine)：Inosine ,Sigma公司,批号:Lot # SLBP5740V,生理盐水溶解。给药途径:腹腔注射。 尿酸(UA)测定试剂盒,南京建成生物工程研究所产品,批号:20170502 2.实验动物 中缅树鼩，滇西亚种树鼩，雌雄各半，80只，体重均在110g~150g范围内，年龄1-3岁，成年健康，由中国医学科学院医学生物学研究所提供，常规性饲养。饲养环境温度20℃～25℃，湿度40%～70%，自由饮水和采食。常规统一蒸糕饲料饲喂。 3.给药 肌苷，Inosine，Sigma公司，批号：Lot # SLBP5740V，给药途径：腹腔注射。腹腔注射肌苷200mg/kg、250mg/kg、300mg/kg、400mg/kg，腹腔注射生理盐水作为对照。 4.模型分析指标 尿酸水平检测 给药后0h、0.5h、1h、2h、4h、8h尾静脉采血0.5ml于1.5ml EP管中，置于4℃冰箱放置1h，4℃、13000r离心15min，分离获得血清，磷钨酸法测定血清尿酸值，按照尿酸（UA）测定试剂盒说明书所描述的方法检测血清尿酸值。

须部假性毛囊炎（Pseudofolliculitis barbae, PFB），也称pili incarnate，“毛发向内生长”或“剃刀磕碰”，是一种常见的人类毛发疾病。通常发生在面部胡须区域，但也可在头皮、颈部和腹股沟。表现为毛发剃除后毛发不直接从毛囊内长出，而是容易卷曲进入皮肤，导致炎症发生。PFB的皮肤发红，发痒，有时类似丘疹外观。

1、模型制作 该模型受赠于Dennis R. Roop实验室 ，现将模型 的制作方法介绍如下： 小鼠的Krt75蛋白与人的Krt6A蛋白的N端的氨基酸序列具有高度的同源性，即小鼠的Krt75与人的Krt6A相对应。人的Krt6A的显性位点的失活突变是造成先天性甲肥厚（Pachyonychia Congenita，PC）最常见的突变，PC是另一种少见的甲肥厚性遗传性皮肤病，于1906年由Jadassohn和Lewandowsky首先命名。目前已经确定其中频率最高的突变是172密码子的却是突变，该密码子编码一个天冬酰胺（N）。已有研究显示该突变造成的缺陷导致Krt6a的合成出现障碍，从而干扰蛋白质组装成角蛋白骨架的功能。因此，我们设计了一个删除N159(N159del) 从而导致Krt75蛋白出现一个显性位点的失活突变(Krt75tm1Der)。 构建小鼠Krt75 N159del突变表达载体，这一突变等同于人KRT6A N172del突变。向重组的ES细胞电转一个cre表达载体。得到的目的ES细胞克隆注射入C57BL/6J小鼠囊胚中。得到的嵌合体小鼠与C57BL/6J回交，得到的携带有目的等位基因（t/Krt75tm1Der），鼠尾DNA用于PCR检测。杂合子小鼠（t/Krt75tm1Der）互交后得到纯合子仔鼠（Krt75tm1Der/Krt75tm1Der）。（图1） 图1：Krt75tm1Der基因敲入小鼠的建立

1. Liu Y, Snedecor ER, Zhang X, Xu Y, Huang L, Jones EC, Zhang L, Clark RA, Roop DR, Qin C, Chen J. Correction of Hair Shaft Defects through Allele-Specific Silencing of Mutant Krt75. J Invest Dermatol. 2016 Jan;136(1):45-51. doi: 10.1038/JID.2015.375.

脊髓灰质炎是一种急性传染病，传播广泛，病 原为脊髓灰质炎病毒。 此病毒常侵犯中枢神经系 统，损害脊髓前角运动神经细胞，导致肢体松弛性 麻痹，多见于儿童，故又名小儿麻痹症

使用脑立体定位仪将微量注射器针头插入丘 脑，在两侧丘脑分别注入0.5mL 脊髓灰质炎疫苗样 品，原倍浓度及 10-1 浓度各10只。 注射后 48h 内 死亡或出现非特异性麻痹症状者剔除不计，中途死 亡及到期处死动物，做中枢神经系统病理组织学 检查。动物在给药 21d 后，进行安乐死并解剖。 完整 取出脑组织及脊髓，10％甲醛溶液充分固定后，进行 取材。 取材时首先寻找脑顶叶区注射点，在注射点前后各取一个切面，以确保取材部位包含针迹。 取 材部位包括： 额叶、顶叶、注射点、颞叶、枕叶、海马、 基底节、丘脑（以上部位左右大脑双侧取材）、中脑、 小脑、脑桥、延髓、颈膨大、腰膨大。0.2

脊髓灰质炎疫苗脑内法猴体神经毒力试验 病理学评价方法的探讨 中国比较医学杂志 ２０１６ 年 １０ 月第 ２６ 卷第 １０ 期

脑血管疾病严重危害人类健康, 是目前人类发病率最高的疾病之一 ,并常导致残疾, 给社会和家庭带来沉重负担 。在脑血管疾病中以缺血性疾病的 发病率占据首位 。血管缺血性损伤是由于各种原因诱发脑血管栓塞引起脑组织缺血、缺氧 ,进一步诱发脑神经细胞变性 、坏死 ,最终导致神经功能障碍 、丧失的一类疾病。

麻醉后的动物采用俯 卧位固定在立体定位仪上 ,颅顶区备皮 ,常规消毒手 术区皮肤,沿矢状面在颅顶正中切开长约 4 ～ 5 cm 的切口 ,逐层分离皮下组织 、帽装肌腱 、肌肉 、骨膜 , 用扩张器充分暴露手术视野。使用便携式颅钻在顶 骨裂处进行颅骨钻孔 , 以钻透颅骨 , 达硬脑膜为止 (有落空感)。钻好的孔为椭圆形 ,大小为 3.0 cm × 1.5 cm , 其长轴与颅骨正中线垂直 。将冷光源发生 器的发光口固定与颅顶开口处。周围用浸透生理盐 水的无菌纱布覆盖伤口 。用铝箔纸遮盖动物眼睛, 避免光化学反应对动物视网膜的损害 。静脉注射玫 瑰红 B35 mg kg ,从注射完毕开始计时 , 5 min 后打开 光源 ,电子光强选择 6 ,机械光强选择, 照射 10 min 。 第一次注射后 10 min 第二次注射玫瑰红 B , 浓度与 第一次相同。照射完毕后,向颞侧移动光源发光口, 在第二点照射 10 min 。缝合骨膜 、皮肤。肌肉注射青霉素 40 万 单位预防感染 。

光化学法制作食蟹猴局部脑缺血模型 中国比较医学杂志2008 年 9月第 18卷第 9 期