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CSTR:16397.09.0L02001213 DOCA诱导急性盐敏感性高血压模型

高血压是由多基因、多环境因素及个人不良习惯相互作用而导致的一种慢性复杂疾病,也是危害人类健康的主要疾病之一。盐是高血压的重要环境因素,个体对盐负荷或限盐呈现不同的血压反应,因此存在盐敏感性问题[1]。盐敏感性是高血压、心脑血管病和其它疾病(如哮喘、胃癌和肾功能不全等)发病及致死的一个潜在危险因素[2]。因此在高血压临床诊治过程中,考虑盐敏感性将有利于对高血压分类、危险分级以及对症治疗。

(1)单侧肾切除:C57小鼠根据体重,三溴乙醇麻醉0.18ml/10g体重,(360mg/kg体重)(三溴乙醇储存液:25g三溴乙醇+15.5ml叔戊醇,使用液:0.50ml储存液+39.5ml生理盐水),俯卧位固定于加热垫上保持体温,腹部脱毛膏脱毛,酒精消毒处理,无菌手术剪剪开腹部皮肤,依次暴露表皮层,真皮层并裸露左肾,结扎左肾动脉,手术剪取下左肾,依次缝合真皮层表皮层,200ul青霉素注射。得单侧肾切除小鼠。 (2)皮下植入DOCA缓释泵:单侧肾切除三天之后,背部颈部脱毛膏脱毛,酒精消毒处理,无菌手术剪剪开后背颈部皮肤,用镊子将皮下探查出一个可以足够装下药品的空间,将DOCA 缓释泵塞入皮下,镊子将该处皮肤对齐复合,无菌缝合线缝合皮肤,放置在加热板上保暖,待苏醒后放回鼠盒,手术后用止痛果冻缓解疼痛。

1. Cutler, J.A., et al., An overview of randomized trials of sodium reduction and blood pressure. Hypertension, 1991. 17(1 Suppl): p. I27-33. 2. de Wardener, H.E. and G.A. MacGregor, Harmful effects of dietary salt in addition to hypertension. J Hum Hypertens, 2002. 16(4): p. 213-23. 3. 刘治全, 血压的盐敏感性与盐敏感性高血压. 高血压杂志, 2005年3月. 13(3). 4. Weinberger, M.H., et al., Salt sensitivity, pulse pressure, and death in normal and hypertensive humans. Hypertension, 2001. 37(2 Part 2): p. 429-32. 5. Yatabe, M.S., et al., Salt sensitivity is associated with insulin resistance, sympathetic overactivity, and decreased suppression of circulating renin activity in lean patients with essential hypertension. Am J Clin Nutr, 2010. 92(1): p. 77-82. 6. Omarjee L, Roy C, Leboeuf C,et al., Evidence of Cardiovascular Calcification。and Fibrosis in Pseudoxanthoma Elasticum Mouse Models Subjected to DOCA-Salt Hypertension.Circ Res, 2019.124(10):1448-1461.

CSTR:16397.09.0L02001212 D5R基因敲出诱导盐敏感性高血压模型

高血压是由多基因、多环境因素及个人不良习惯相互作用而导致的一种慢性复杂疾病,也是危害人类健康的主要疾病之一。盐是高血压的重要环境因素,个体对盐负荷或限盐呈现不同的血压反应,因此存在盐敏感性问题[1]。盐敏感性是高血压、心脑血管病和其它疾病(如哮喘、胃癌和肾功能不全等)发病及致死的一个潜在危险因素[2]。因此在高血压临床诊治过程中,考虑盐敏感性将有利于对高血压分类、危险分级以及对症治疗。

3.诱导方法:D5-/-小鼠的获得:首先获得构件打靶载体,利用同源重组技术把新霉素抗性基因反向插人到129/sv小鼠胚胎干细胞有D5受体表达的第二细胞内环基因序列中,抑制D5基因的表达,然后把基因打靶后的胚胎于细胞注射到c57BL/6小鼠胚泡,繁殖培育后产生纯合基因D5-/-.本实验应用的D5-/-小鼠第六代3-6个月龄的小鼠,对照(D5+/+)小鼠作为对照。6月龄D5-/-小鼠及其对照D5+/+,分别给予高盐饮食(4%的NaCl)和正常盐饮食(0.4%的NaCl),连续8周,每周测量血压。

1. Cutler, J.A., et al., An overview of randomized trials of sodium reduction and blood pressure. Hypertension, 1991. 17(1 Suppl): p. I27-33. 2. de Wardener, H.E. and G.A. MacGregor, Harmful effects of dietary salt in addition to hypertension. J Hum Hypertens, 2002. 16(4): p. 213-23. 3. 刘治全, 血压的盐敏感性与盐敏感性高血压. 高血压杂志, 2005年3月. 13(3). 4. Weinberger, M.H., et al., Salt sensitivity, pulse pressure, and death in normal and hypertensive humans. Hypertension, 2001. 37(2 Part 2): p. 429-32. 5. Yatabe, M.S., et al., Salt sensitivity is associated with insulin resistance, sympathetic overactivity, and decreased suppression of circulating renin activity in lean patients with essential hypertension. Am J Clin Nutr, 2010. 92(1): p. 77-82. 6. Maron, B.J. and M.S. Maron, Hypertrophic cardiomyopathy. Lancet, 2013. 381(9862): p. 242-55. 7. Toepfer, C.N., et al., Hypertrophic cardiomyopathy mutations in MYBPC3 dysregulate myosin. Sci Transl Med, 2019. 11(476).

CSTR:16397.09.0L02001211 颈脊髓挫伤大鼠模型

指由于外界直接或间接因素导致颈椎骨折,游离骨块撞击脊髓引起损伤,在损害的相应节段出现各种运动、感觉和括约肌功能障碍,肌张力异常及病理反射等的相应改变。

1.脊髓挫伤装置 本研究采用NYU撞击装置,原理是在一定高度,打击头在固定的轨道中自由落地挫伤脊髓,可通过改变不同的下落高度控制损伤程度 2.动物模型制作 采用3%戊巴比妥进行麻醉。然后在C5节段进行常规半侧椎板切除术以暴露脊髓。用自制椎夹固定C4-C6节段后连同脑立体定位仪平放于打击移动平台上,将2 mm直径圆柱形打击头对准C5节段的脊髓中线,打击头从硬脊膜表面升至距脊髓表面一定的高度20cm,然后驱动NYU打击器驱动向下打击脊髓,挫伤后迅速离开脊髓表面并上升。损伤后逐层缝合皮肤肌肉,肌注1万单位青霉素预防感染,之后把大鼠置于37°C恒温箱内1小时并注意观察呼吸和心率情况,后移至笼内常规饲养。 3.模型分析指标 (1)行为学观察 监测大鼠爬行时上肢大体和精细运动功能 (2)电生理评估 分别采用SEP和MEP进行神经电生理评估 (3)组织学观察 脊髓压迫后三个月,取材进行冰冻切片LFB染色观察

CSTR:16397.09.0L02001210 颈脊髓压迫大鼠模型

脊髓型颈椎病是由于椎间盘突出、椎体后缘骨刺、黄韧带肥厚或钙化、椎管狭窄等颈椎椎体退化或相邻软组织的退变造成脊髓受到压迫,加之长期保持不良姿势等原因,使压迫加重导致脊髓受压或脊髓缺血,继而出现脊髓的功能障碍。

1.脊髓压迫材料的制备 本研究采用吸水膨胀性聚合物脱水吡喃半乳糖基为压迫材料,材料能吸水溶胀却又不溶解于水, 且具有良好的组织相容性。聚合物涂有缓释膜,以控制组织周围组织的间质液吸收,在24小时内达到最大膨胀,并在6个月内保持最大体积。试验中干燥状态的薄片被切割成细条状, 环氧乙烷消毒后分装备用。 2.动物模型制作 采用3%戊巴比妥钠60mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,后俯卧位固定于脑立体定位仪。暴露颈背部, 在C3至C7水平剃毛备皮, 手术行无菌操作。显露C3至C7椎板, 切除椎板间黄韧带, 暴露硬脊膜。模型组将薄片聚合物置于大鼠C5-C6的椎板与硬脊膜之间。对照组的硬脊膜暴露及游离操作同模型组, 但不放置压迫材料。整个手术操作过程动作轻柔, 并注意观察大鼠的反应以及变化, 尽量避免损伤硬脊膜造成脑脊液漏, 以及避免脊髓急性损伤, 逐层止血缝合。术后均给予青霉素局部滴入预防感染。两组大鼠术后放置于37℃条件下单笼饲养。如果出现排尿功能障碍, 即实行膀胱部按摩以帮助即实行膀胱部按摩以帮助大鼠排尿, 2次/天直到大鼠恢复自行排尿功能为止。 3.模型分析指标 (1)行为学观察 监测大鼠爬行时下肢及躯干运动及协调情况 (2)影像学评估 术后三个月进行MRI评估 (3)电生理评估 分别采用SEP和MEP进行神经电生理评估 (4)组织学观察 脊髓压迫后三个月,取材进行石蜡切片HE染色观察

CSTR:16397.09.0I01001209 心脏特异D173L转基因小鼠扩张型心肌病模型

扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)是一种原因未明的原发性心肌疾病。本病的特征为左或右心室或双侧心室扩大,并伴有心室收缩功能减退,伴或不伴充血性心力衰竭。DCM属于一种常见心肌疾病类型,患者病情通常包括特发性、家族性、遗传性、病毒性及免疫性等[1]。病情会呈进行性加重趋势,通常伴有心力衰竭、心律失常、血栓栓塞及猝死等。

由美国乔治敦大学Pedro A. Jose博士惠赠的pcDNA-h-D5F173L表达载体人D5F173L质粒,转化入大肠杆菌JM109,摇菌扩增后测序,测序结果经Blast分析,显示得到的pcDNA-D5-F173L与Genebank 中序列对比得到目的突变位点正确。用显微注射法将连接MHC启动子的转基因载体注射到C57BL小鼠的受精卵中,用C57BL小鼠作假孕受体,制备转基因小鼠。转基因小鼠用碱裂解法提取基因组DNA。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。

1. Over-expression of a cardiac-specific human dopamine D5 receptor mutation in mice causes a dilated cardiomyopathy through ROS over-generation by NADPH oxidase activation and Nrf2 degradation.Redox Bio. 1.Liu W,Li WM,Gao C,et al. Effects of atorvastatin on the Th1/Th2 polarization of ongoing experimental autoimmune myocarditis in Lewis rats. J Autoimmun,2005,25(4):258-263. 2.Haasken S,Auger JL,Binstadt BA. Absence of β 2 integrins impairs regulatory T cells and exacerbates CD4 + T cell-dependent autoimmune carditis. J Immuno1,2011,187(5):2702-2710. 3.魏琦萍,符晓丁. 超声心动图联合心电图检查诊断扩张型心肌病的应用效果 . 中国医疗器械信息,2018,24(20):128-129. 4.姚钱晶,李娅,曹小俊,等. 探讨彩色多普勒超声对扩张型心肌病与缺血性心肌病的诊断价值 . 当代医学,2018,24(14):81-83. 5.金红瑞,张文博,王可颜,等 . MRI 在评估原发性扩张型心肌病患者心室功能中的应用 . 中国 CT 和 MRI 杂志,2018,16(5):63-65,73. 6.Jose PA,Eisner GM,Felder RA. Role of dopamine receptors in the kidney in the regulation of blood pressure [J]. Curr Opin Nephrol Hypertens,2002,11:87-92 7.Hussain T,Lokhandwala MF. Renal dopamine receptor function in hypertension [J]. Hypertension,1998,32: 187-197.

CSTR:16397.09.0I01001135 D173L转基因小鼠模型

原发性高血压是指原因不明,以动脉收缩压和(或)舒张压增高为特征,常伴有心、脑、肾等器官病理性改变的全身性疾病。原发性高血压占高血压患者的95%以上,在我国的影响人口超过1亿人。高血压对心脏、肾脏、脑均有影响,还可以造成眼底动脉硬化导致失明等并发症。

由美国乔治敦大学Pedro A. Jose博士惠赠的pcDNA-h-D5F173L表达载体人D5F173L质粒,转化入大肠杆菌JM109,摇菌扩增后测序,测序结果经Blast分析,显示得到的pcDNA-D5-F173L与Genebank 中序列对比得到目的突变位点正确。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL小鼠的受精卵中,用C57BL小鼠作假孕受体,制备转基因小鼠。转基因小鼠用碱裂解法提取基因组DNA。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。Western blot检测转基因小鼠肾组织中D5R的表达(图2)。                     1        2       3        4       M 图2 Western Blotting 鉴定D5 F173L转基因小鼠D5受体蛋白在肾脏的表达 1:野生型对照小鼠,2:32号首建鼠的F1代小鼠,3:4号首建鼠的F1代小鼠, 4:16号首建鼠的F1代小鼠

1. 张艳荣,全雄志,董伟,张连峰,杨志伟。多巴胺D5受体转基因小鼠的建立。中国比较医学杂志,2008, 5(18):54-658. 1.Jose PA,Eisner GM, Felder RA. Role of dopamine receptors in the kidney in the regulation of blood pressure [J]. Curr Opin Nephrol Hypertens, 2002, 11:87-92 2.Hussain T, Lokhandwala MF. Renal dopamine receptor function in hypertension [J]. Hypertension, 1998, 32: 187-197.

CSTR:16397.09.0I01000719 DOCA诱导主动脉瘤模型

主动脉瘤(aortic aneurysm) 指主动脉壁局部或弥漫性的异常扩张超过正常值50%以上,压迫周围器官而引起症状,常发生在升主动脉主动脉弓、胸部降主动脉、胸腹主动脉和腹主动脉,其发病率在老年人群中可以高达5-10%,并呈上升趋势。主动脉瘤可由多种因素引起,如家族遗传、高血压、动脉硬化等,其主要病理改变为血管壁弹力纤维断裂、平滑肌细胞病变和血管外膜胶原沉积。

3.诱导方法:C57小鼠根据体重,三溴乙醇麻醉0.18ml/10g体重,(360mg/kg体重)(三溴乙醇储存液:25g三溴乙醇+15.5ml叔戊醇,使用液:0.50ml储存液+39.5ml生理盐水),俯卧位固定于加热垫上保持体温,背部颈部脱毛膏脱毛,酒精消毒处理,无菌手术剪剪开后背颈部皮肤,用镊子将皮下探查出一个可以足够装下药品的空间,将DOCA 缓释泵塞入皮下,镊子将该处皮肤对齐复合,无菌缝合线缝合皮肤,放置在加热板上保暖,待苏醒后放回鼠盒,手术后用止痛果冻缓解疼痛。

1.Patelis N, Moris D, Schizas D, Damaskos C, Perrea D, Bakoyiannis C, Liakakos T and Georgopoulos S. Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development. Physiol Res. 2017;66:899-915. 2.Golledge J, Muller J, Daugherty A and Norman P. Abdominal aortic aneurysm: pathogenesis and implications for management. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2006;26:2605-13. 3.Caprio M, Newfell BG, la Sala A, Baur W, Fabbri A, Rosano G, Mendelsohn ME and Jaffe IZ. Functional mineralocorticoid receptors in human vascular endothelial cells regulate intercellular adhesion molecule-1 expression and promote leukocyte adhesion. Circ Res. 2008;102:1359-67. 4.Liu S, Gong MC and Guo Z. A New Mouse Model for Introduction of Aortic Aneurysm by Implantation of Deoxycorticosterone Acetate Pellets or Aldosterone Infusion in the Presence of High Salt. Methods Mol Biol. 2017;1614:155-163. 5.Liu S, Xie Z, Daugherty A, Cassis LA, Pearson KJ, Gong MC and Guo Z. Mineralocorticoid receptor agonists induce mouse aortic aneurysm formation and rupture in the presence of high salt. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2013;33:1568-79. 6.An G, Wang H, Tang R, Yago T, McDaniel JM, McGee S, Huo Y and Xia L. P-selectin glycoprotein ligand-1 is highly expressed on Ly-6Chi monocytes and a major determinant for Ly-6Chi monocyte recruitment to sites of atherosclerosis in mice. Circulation. 2008;117:3227-37.

CSTR:16397.09.0L01001208 Foxi3敲除小鼠---先天性小儿畸形动物模型

小耳畸形的病因目前还不完全明确,环境和遗传因素是目前小耳畸形病因研究的重点。先天性小耳畸形在基因突变致病性研究方面还没有阐明小耳畸形胚胎发育的机制。小耳畸形主要涉及胚胎发育期间第一和第二鳃弓的异常,主要表型涉及外耳发育异常。外耳的耳廓是由第一和第二鳃弓的逐渐融合形成的,在发育过程中第一和第二鳃弓之间是相互作用,两弓之间的凹槽加深,形成外耳道,从胚胎的起源来分析,外耳的发育至少在一定程度上是由第一和第二鳃弓通过后脑的部分区域来介导的,后脑是鳃弓的神经嵴细胞的来源,在后脑的第四段基因突变可以导致外耳的发育缺陷。

(一)设计方案: Foxi3 forkhead box I3 [ Mus musculus (house mouse) ] Gene ID: 232077 Location: 6; 6 C1 Exon count: 2 (二)根据基因信息选择靶点,合成sgRNA targeting site 1: tcccaggtataagagacg   cgg M-FOXI3-sgRNA-UP1           5’TAGGtcccaggtataagagacg M-FOXI3-sgRNA-DOWN1       5’aaacCGTCTCTTATACCTGGGA targeting site 2: atcgctcctcagacttga   tgg M-FOXI3-sgRNA-UP2           5’TAGGatcgctcctcagacttga M-FOXI3-sgRNA-DOWN2       5’aaacTCAAGTCTGAGGAGCGAT (三)显微注射 1,超数排卵:15只3-4周龄C57雌鼠注射激素进行超排。 2,受精卵注射:取约150枚受精卵进行注射。 3,雄鼠结扎:制作30只8周龄输精管结扎的ICR雄鼠。 4,受体鼠制备:8-10周龄ICR与结扎的ICR雄鼠交配后选取见栓的雌鼠。 5,胚胎移植:将注射后的受精卵移植到受体鼠输卵管壶腹部(移植一次, 150枚卵,5只受体鼠)。 (四)显微注射基因型鉴定 1,剪尾编号:出生7-10天的乳鼠,剪取脚趾和尾尖进行编号及取材。 2,基因组DNA提取: 使用全式金(Transgen)公司的基因组DNA提取试剂盒(EE101-12)提取基因组DNA 3,PCR检测:根据序列信息设计检测引物(上海英潍捷基) M-FOXI3-ko-s   5’CAAATAAGTAGTCAATCCACTCAAACG   61.4℃ M-FOXI3-ko-a   5’TCCCACCCTTAACTCCAATGAC         62.3℃ M-FOXI3-wT-s    5’GGGCTGATTGATCTCTGAGTTC   60.2℃ M-FOXI3-wT-A    5’AGGTGCTGAGGAAAGTGTTGAG   60.8℃ M-FOXI3-ko-s&A: TM=61℃      KO  603bp  M-FOXI3-wt-s&A: TM=60℃      WT  496bp PCR反应体系及扩增程序(TaKaRa RR042A) 4,反应体系: 10×LA PCR BufferⅡ(Mg2+ Plus) 2.0 μl dNTP Mixture(2.5 μM) 1.6 μl 引物-S(50 μM ) 0.2 μl 引物-A(50 μM ) 0.2 μl 模板DNA 2.0 μl LA Taq 0.2 μl 补加ddH2O至总体积  20.0 μl 5,扩增程序: 95℃ 15 min; 95℃,          30 s TM-2℃,       30 s 72℃,          1 min        30循环; 72℃ min; 6×loading buffer 终止反应。 用1%的琼脂糖凝胶进行电泳。  

CSTR:16397.09.0L01001207 双侧外耳缺失伴发外耳道闭锁的猪动物模型

小耳畸形的病因目前还不完全明确,环境和遗传因素是目前小耳畸形病因研究的重点。小耳畸形主要涉及胚胎发育期间第一和第二鳃弓的异常,主要表型涉及外耳发育异常。外耳的耳廓是由第一和第二鳃弓的逐渐融合形成的,在发育过程中第一和第二鳃弓之间是相互作用,两弓之间的凹槽加深,形成外耳道。

二花脸×沙子岭F2近交群体:此群体由1头二花脸公猪和1头沙子岭母猪杂交,选取全同胞的1头F1公猪和1头F1母猪,互交六胎次,生产F2个体。

双侧外耳缺失伴发外耳道闭锁的猪动物模型鉴定及其在整形外科的应用.中华整形外科杂志, 2018,34(3):232-236.

CSTR:16397.09.0L01001206 Prkra 小耳小鼠动物模型

小耳畸形的病因目前还不完全明确,环境和遗传因素是目前小耳畸形病因研究的重点。先天性小耳畸形在基因突变致病性研究方面还没有阐明小耳畸形胚胎发育的机制。小耳畸形主要涉及胚胎发育期间第一和第二鳃弓的异常,主要表型涉及外耳发育异常。外耳的耳廓是由第一和第二鳃弓的逐渐融合形成的,在发育过程中第一和第二鳃弓之间是相互作用,两弓之间的凹槽加深,形成外耳道,从胚胎的起源来分析,外耳的发育至少在一定程度上是由第一和第二鳃弓通过后脑的部分区域来介导的,后脑是鳃弓的神经嵴细胞的来源,在后脑的第四段基因突变可以导致外耳的发育缺陷。

1. Prkra小耳小鼠繁殖 小鼠饲养条件是按照普通常规鼠笼饲养,每个笼不超过5只小鼠。繁殖方式:用同窝的1只雄性和1只雌性交配获得杂合小鼠,饲养到可以生育的成年鼠后,然后杂合与杂合再交配,得到没有表型的杂合雌、雄小鼠。 2. Prkra 小耳小鼠的基因点突变检测 DNA 测序:设计引物进行Sanger法测序,应用试剂盒法裂解鼠尾提取DNA,洗脱出的DNA 于-20 ℃ 保存。通过引物3 在线平台( http:/ /primer3.ut.ee/ )设计候选变异引物,Prkra 正向引物为TTCAGTAGCGAGCCAGCAC,反向引物为ACAACTGTCCGCTCTGTCG。聚合酶链式反应(PCR)反应体系:金牌Mix(green)27 μl,正向引物1 μl,反向引物1 μl,模板DNA 1 μl。 Prkra 小耳小鼠野生型(上)、杂合型(中)和纯合型(下)的测序峰图,突变位点为在2 号染色体76、643、218 bp(GRCm38)上的G向A的突变,该突变位点位于第3 外显子之后。

刘伟,林琳,杨庆华,潘博,何乐人,蒋海越.Prkra小耳小鼠动物模型在先天性小耳畸形研究中的应用[J].中华整形外科杂志,2019,35(8):804-808.

CSTR:16397.09.0L01001205 Bmp5短耳小鼠动物模型

小耳畸形的病因目前还不完全明确,环境和遗传因素是目前小耳畸形病因研究的重点。先天性小耳畸形在基因突变致病性研究方面还没有阐明小耳畸形胚胎发育的机制。小耳畸形主要涉及胚胎发育期间第一和第二鳃弓的异常,主要表型涉及外耳发育异常。外耳的耳廓是由第一和第二鳃弓的逐渐融合形成的,在发育过程中第一和第二鳃弓之间是相互作用,两弓之间的凹槽加深,形成外耳道,从胚胎的起源来分析,外耳的发育至少在一定程度上是由第一和第二鳃弓通过后脑的部分区域来介导的,后脑是鳃弓的神经嵴细胞的来源,在后脑的第四段基因突变可以导致外耳的发育缺陷。

Bmp5短耳小鼠繁殖 用同窝的雄性和雌性交配获得杂合小鼠,得到后代没有产生突变的小鼠,这些小鼠也未发现外耳短小畸形,将杂合小鼠互相再杂交,根据实验需要陆续获得Bmp5短耳小鼠孕鼠,这些孕鼠可以检测出纯合型、杂合型和野生型胎鼠。该纯合型小鼠是可以生育的,但是纯合型相互交配会得到只有纯合型的后代,最好的繁殖策略还是杂合小鼠互相杂交。 Bmp5短耳小鼠的基因点突变检测 DNA测序:设计引物进行Sanger法测序,应用试剂盒法裂解鼠尾提取DNA洗脱出的DNA于-20℃保存。通过引物3在线平台(http://primer3.ut.ee/)设计候选变异引物,引物序列如下:Bmp5正向引物为GGAGGCATTACAAAGAGTTTCG,反向引物为GAACCATTTCACCAGCTCCT。聚合酶链式反应(PCR)反应体系:金牌Mix(green)27μl,正向引物1μl,反向引物1μl,模板DNA 1μl,扩增产物由擎科生物技术有限公司进行测序。 Bmp5短耳小鼠野生型(上)、杂合型(中)和纯合型(下)的测序峰图,Bmp5点突变位置在外显子2倒数第7个碱基,碱基由C突变为T。

刘伟,蒋海越,杨庆华,何乐人,潘博,林琳.Bmp5短耳小鼠动物模型在先天性小耳畸形研究中的应用[J].中华整形外科杂志,2019,35(11):684-688.

CSTR:16397.09.0H01001204 社会挫败模型

抑郁症是由抑郁症是一种严重影响人体健康的精神疾病,其患病率约占总人口的3% 。世界卫生组织预测到2020 年抑郁症将成为第二大主要疾病之一,给社会带来极大经济负担,抑郁症已成为全世界共同面临的卫生健康难题。近年来研究发现,应激性生活事件是抑郁症的显著促发因素,引发抑郁的主要原因是来自慢性、低强度、长期的日常压力。

1. 操作流程 实验前将小鼠随机分为对照组和应激组,每天将应激组C57BL /6 小鼠作为侵入者放入长期单独饲养CD1 小鼠的笼内,进行身体接触5 min。5 min 内C57BL /6 小鼠将受到CD1小鼠攻击并表现出逃跑、恐惧、顺从等从属性特征。5 min 身体接触后,使用透明并且有很多小孔的有机玻璃板将二者隔开进行心理应激24 h,保证C57BL /6 小鼠能看到CD1 小鼠,听到CD1 小鼠的声音,而且能闻到CD1 小鼠的气味,应激持续7d或21 d。应激结束后,将C57BL /6 小鼠单独饲养,进行行为学评价。 为了评估应激组C_57小鼠的社会交互行为,在接受最后一次攻击的24小时内开展社会交互实验。实验设备还包括40cmx40cmx40cm大小的白色开放场,7cmx10cmx 40cm大小穿孔透明塑料盒及录像设备。社会交互测试由两部分组成,每部分记录时长为2.5分钟。第一部分,将塑料空盒置于测试场一侧中央位置,轻轻提放被测试者(C57小鼠)于旷场中央,自由活动;  150秒后,将被测试者移除放于自身饲养笼中;同时将具有攻击性的CD1小鼠放在塑料盒内,准备结束后重新放入被测试者。前后两次操作中间的准备时间控制在30s内。分别记录2个部分动物在社会交互区的时间。社会交互区定义为以塑料盒为中心,允许C_57小鼠与盒子及里面的CD1鼠进行互动的区域。   2. 模型分析指标 2.1 悬尾实验     于造模结束后第3 天开始实验。将胶布贴于距小鼠尾尖部约1 cm 处,使小鼠倒挂于悬尾箱支架上,传感器接收小鼠挣扎时的张力变化信号,将信号处理转化后送往计算机,小鼠悬尾实时检测分析处理系统自动记录小鼠不动时间,实验总共6 min,适应2 min 后系统自动统计小鼠后4 min 内悬尾累积不动时间(“不动”即小鼠停止挣扎不动或无任何活动)。 2.2 强迫游泳 利用计算机图像实时检测分析处理系统自动分析记录动物运动状态。将小鼠放入小鼠强迫游泳仪器中( 高20 cm,直径18 cm,水深12 cm),保持水温(23~25 °C)。动物适应2 min后,系统自动记录动物后4 min 内的累积不动时间( 不动状态即小鼠四肢有轻微动作以保持头部在水面,小鼠呈现出停止挣扎或呈漂浮状态)。

1. Jiang, N., Lv, J., Wang, H., Wang, Q., Lu, C., Yang, Y., … Liu, X. (2019). Antidepressant‐like effects of 20( S )‐protopanaxadiol in a mouse model of chronic social defeat stress and the related mechanisms. Phytotherapy Research. 2019 Oct;33(10):2726-2736. doi:10.1002/ptr.6446 2. Ahmed, A., Zeng, G., Jiang, D., Lin, H., Azhar, M., Farooq, A. D., … Wang, Q. (2019). Time-dependent impairments in learning and memory in Streptozotocin-induced hyperglycemic rats. Metabolic Brain Disease. doi:10.1007/s11011-019-00448-7