Wistar 大鼠（8-10周龄）和ICR小鼠（（6-8周龄）。雄性多见。

1、实验环境

实验室环境隔音，温度：23-25 ℃，湿度：55%。12h/12h明暗周期。动物适应3-5天开始实验。

2、刺激因子

除表中列举的刺激因子外，还可选择天敌声音（10-15分钟）、冰水游泳（3-5分钟）等温和性刺激因素。

3.实验步骤

（1）糖水偏爱基线测试

动物单笼饲养，训练大鼠适应含糖饮水：第一个24小时，每笼同时放置两瓶1%蔗糖水；第二个24小时，放置一瓶蔗糖水，一瓶饮用水。大鼠禁食禁水24小时后，同时给予每只大鼠事先称量好的两瓶水:一瓶1 %蔗糖水,一瓶饮用水。1h后，取走两瓶并称重。计算动物的糖水偏爱指数 (糖水偏爱= 糖水消耗/ 总液体消耗×100 %)。依据糖水偏爱指数进行分组。

（2）给予刺激因子

几种不同的应激因素在实验全程中应用，顺序随机，使动物不能预料应激因素的发生。

注：上表仅为举例。实验操作中依据实验者需要进行设计。

4.推荐实验条件

（1）CUMS模型对Wistar 或Lister 品系较为敏感，而对SD或Long-Evans等不敏感。小鼠常用ICR；

（2）开始给予刺激因子时，大鼠体重至少为300 g，小鼠至少28 g；

（3）刺激因子至少6种以上。

5.注意事项

（1）刺激因子的多变性和不可预测性是模型成功的关键。

（2）糖水偏爱测试时，将水瓶放置于测试房间一段时间再进行检测，测试房间保持安静。17:00左右为测试敏感时间。

（3）糖水偏爱测试前，需禁食禁水，在此之前，不应给予任何应激因素，以免影响糖水测试结果。

（4）要求隔音并且较大的饲养空间。

6. 模型分析指标

6.1 糖水偏爱实验

于造模结束后第1 天开始实验( 造模前进行糖水偏爱训练)。糖水偏爱实验分为训练期( 适应期) 及测试期。训练期内，给予动物一瓶蔗糖糖水(2%) 和一瓶纯水，动物自由饮水，让小鼠适应含糖饮水。动物禁食( 不禁水)8h 后进行动物的糖水/ 纯水消耗实验测试(15h)，根据动物糖水、纯水摄入量计算动物的糖水偏爱指数( 糖水偏爱指数= 糖水消耗/ 总液体消耗×100 %)。本实验进行2次糖水偏爱实验。造模前进行糖水偏爱训练及基线测试，根据结果，将动物分组。应激结束后，再进行一次糖水偏爱测试，以评价CUMS 模型快感缺失的症状。

6.2 新奇抑制摄食实验　

于造模结束后第2天开始实验。新奇抑制摄食实验总共分2 天：第一天为适应期，给药后1 h，将动物放入方形敞箱(42 cm × 31 cm ×20 cm，长 × 宽 × 高) 适应10 min。在动物禁食(不禁水)24 h 后进行新奇抑制摄食实验检测，在敞箱中心放一食丸，将动物背对食丸放入，保持每次同

一位置、同一方向，观察记录动物自放入笼中至首次摄取食物的时间( 即摄食潜伏期)，每次5 min，以动物开始咬食食丸为摄食标准。

6.3 小鼠悬尾实验　　

于造模结束后第3 天开始实验。将胶布贴于距小鼠尾尖部约1 cm 处，使小鼠倒挂于悬尾箱支架上，传感器接收小鼠挣扎时的张力变化信号，将信号处理转化后送往计算机，小鼠悬尾实时检测分析处理系统自动记录小鼠不动时间，实验总共6 min，适应2 min 后系统自动统计小鼠后4 min 内悬尾累积不动时间(“不动”即小鼠停止挣扎不动或无任何活动)。

抑郁行为判断标准：蔗糖偏嗜度低于0.4或者与对照组相比有显著性减低（P <0.05）。结果显示，与正常组相比，CUMS 模型组动物糖水偏爱指数显著下降(P < 0.01)。

图1 慢性温和不可预测应激对小鼠糖水偏爱的影响

2. 慢性温和不可预测应激对小鼠新奇抑制摄食的影响

结果显示，CUMS 模型小鼠新奇抑制摄食实验潜伏期延长，与正常组相比，具有显著性差异(P <0.01)

图2 慢性温和不可预测应激对小鼠新奇抑制摄食的影响

3. 慢性温和不可预测应激模型对小鼠悬尾实验不动时间的影响

结果显示，CUMS 模型小鼠悬尾的不动时间明显延长，与正常组相比，具有显著性差异(P < 0.01)。

图3 慢性温和不可预测应激对小鼠悬尾实验不动时间的影响