非人灵长类实验动物以其具有与人类最为相似的生理结构和免疫学应答，已被用作禽流感感染动物模型，但有文献报道该模型对H5N1病毒的敏感性较低，不能完全模拟人类重症患者的发病特征。考虑到感染途径最有可能影响感染效果，本研究探索应用气管插管的新式感染H5N1病毒方法感染恒河猴，旨在改良以往模型的低敏感性，并密集动态检测病毒在体内的分布，为深入研究禽流感发病机制，筛选有效疫苗和治疗药物提供一个良好的技术平台。

恒河猴年龄5岁，雄性，2只。H5N1、H1N1 和季节性流感病毒抗体经检测均呈阴性。实验前恒河猴麻醉后将体温芯片植入其颈部后方、肩胛骨上方的背中线位置，每天用数据收集器扫描芯片来测量猴的体温。实验的观察期为5天。皮下植入体温芯片用于监测体温、体重变化。每日观察食蟹猴临床症变化，在感染后第5天处死动物，取组织样本用于监测病毒复制动力曲线和动物感染后组织炎症反应检查。

感染后第2天恒河猴摄食量开始减少、自主活动减少。感染后第1天体温达到峰值，第3天时回落至正常范围，除以上症状外恒河猴未出现其他明显临床表现(图1) 。

图1. 感染后恒河猴体温变化情况

2. 病毒分离和载量的检测

鼻灌洗液和咽拭子的病毒分离和核酸载量检测结果: H5N1感染1d后，每天采集鼻灌洗液和咽拭子至第7天，病毒培养鼻灌洗液除第4、5天为阴性结果外，其余均为阳性。咽拭子除第7天为阴性外第1～6天均为阳性(表1) 。病毒阳性的细胞形态表现为: 肿胀圆化，细胞间隙增大，细胞核固缩或破裂，细胞部分或全部脱落，血凝实验中红细胞也发生凝集现象。病毒载量结果显示鼻灌洗液及咽拭子于感染后第1天载毒最高，此后逐渐下降(表2)。

表1 感染后恒河猴鼻灌洗液和咽拭子的病毒分离情况

注:“ + ”为病毒分离成阳性，“－”为病毒分离成阴性，“\”为未取样。

表2 感染后恒河猴鼻灌洗液和咽拭子的病毒载量单位:log10(copies/g)

注:“\”为未取样。Note:“\”no sample。

血液的病毒分离和核酸载量检测结果: 恒河猴感染H5N1 病毒前2d 及感染后第3、5和7天静脉取血，002号恒河猴在感染后第3天血液中H5N1病毒分离成阳性，血凝实验复检结果一致。核酸载量也达10⁴ copies/mL( 表3)。

表3 感染后恒河猴血液的病毒分离和病毒载量(病毒分离/病毒载量单位log10(copies /mL))

注: “+”为病毒分离成阳性，“－”为病毒分离成阴性，“\”为未取样。

组织器官的病毒分离和核酸载量检测结果:H5N1 感染后第3天和第7天各安乐一只恒河猴，剖取支气管淋巴结、肠淋巴结、鼻甲、心、肝、脾、肺、肾、肠、气管、脑组织进行病毒分离和核酸载量检测。除肺组织外，在恒河猴的心，气管，脑，肝，肾，肠多处组织器官中也能分离到H5N1 病毒(表4) ，血凝试验复检结果一致。病毒载量检测结果显示，所取组织中均存在高达10⁵～10⁷ copies/g的H5N1核酸拷贝(表5) 。
 

表4 感染后恒河猴组织样品的病毒分离情况

注: “ + ”为病毒分离成阳性，“－”为病毒分离成阴性，“\”为未取样。
 

表5 感染后恒河猴组织样品的病毒载量单位:log10(copies/g)

注: “\”为未取样。Note: “\”no sample。

恒河猴感染H5N1 病毒前2 d及感染后第3、5、7天采静脉血，进行血常规检测，结果如表6所示。感染后与感染前相比恒河猴白细胞数及淋巴细胞数下降，其他指标均无明显变化。
 

表6 感染后恒河猴血常规各项指标的变化