Cdk5对中枢神经系统的正常发育至关重要，并参与成年神经系统的突触传递、突触可塑性和神经元信号传导等功能。该基因的突变与致死性常染色体隐性遗传的无头畸形有关。

在外显子1-5两侧插入loxP位点，建立Cdk5-loxP小鼠。Cdk5-loxP小鼠可与cre工具小鼠杂交，可以导致表达cre重组酶的组织特异性缺失Cdk5蛋白的表达。

Samuels BA; Hsueh YP; Shu T; Liang H; Tseng HC; Hong CJ; Su SC; Volker J; Neve RL; Yue DT; Tsai LH. 2007. Cdk5 promotes synaptogenesis by regulating the subcellular distribution of the MAGUK family member CASK. Neuron 56(5):823-37

阿尔茨海默病(Alzheimer disease , AD) 是一种常见的中枢神经系统进行性的退行性疾病，临床表现为进行性记忆减退和认知障碍，我国65岁以上老人痴呆症的发病率为5.56%。由于近年来基于Aβ假设的治疗方案均被临床研究否决，且与老年斑相比，脑细胞内神经原纤维丝缠结程度与患者临床痴呆程度相关性更好，使得Tau基因的相关研究已经成为目前AD 研究的焦点。

MAPT(Tau)转录本6编码23331个氨基酸的蛋白质，是Tau转录本中最长的编码mRNA。全基因合成人的MAPT最长转录本的cDNA插入CMV启动子下游（图1），显微注射获得系统过表达Tau的转基因小鼠。 图1 Tau过表达质粒构建

张丽；陈炜；张旭；孙彩显；张连峰。APPswe/PS1dE9/TAU三转基因阿尔茨海默病大鼠模型的建立。中国比较医学杂志，2014, 24（3）:61-66.

帕金森病是以运动和非运动症状为特征的中老年神经系统退行性疾病，其主要症状表现为运动迟缓、静止性震颤、肌肉僵直及姿势平衡障碍等，严重影响患者生活质量。有公开数据显示，中国65岁以上的老年人帕金森患病率为1.7%，据此推算，中国的帕金森病人数量或超300万。

构建靶向载体，利用PGK新霉素盒取代基因外显子2，胚胎干细胞打靶实现Park7基因敲除。

Goldberg MS; Pisani A; Haburcak M; Vortherms TA; Kitada T; Costa C; Tong Y; Martella G; Tscherter A; Martins A; Bernardi G; Roth BL; Pothos EN; Calabresi P; Shen J. 2005. Nigrostriatal dopaminergic deficits and hypokinesia caused by inactivation of the familial Parkinsonism-linked gene DJ-1. Neuron 45(4):489-96

帕金森病是以运动和非运动症状为特征的中老年神经系统退行性疾病，其主要症状表现为运动迟缓、静止性震颤、肌肉僵直及姿势平衡障碍等，严重影响患者生活质量。有公开数据显示，中国65岁以上的老年人帕金森患病率为1.7%。Parkin蛋白可能在维持多巴胺能神经元的正常功能中发挥重要作用。这个基因的突变会引起癌症或家族性常染色体隐性遗传性少年型帕金森综合征。

EGFP编码序列替换Park2外显子3并导致其外显子2和4连接，外显子5处提前翻译终止。Western-blot分析表明Park2 C末端抗体序列缺失。

[1] Kubli DA, Zhang X, Lee Y, Hanna RA, Quinsay MN, Nguyen CK, et al. Parkin protein deficiency exacerbates cardiac injury and reduces survival following myocardial infarction. J Biol Chem. 2013;288(2):915–26. [2] Goldberg MS, Fleming SM, Palacino JJ, Cepeda C, Lam HA, Bhatnagar A, et al. Parkin-deficient mice exhibit nigrostriatal deficits but not loss of dopaminergic neurons. J Biol Chem. 2003;278(44):43628–35.

帕金森病是以运动和非运动症状为特征的中老年神经系统退行性疾病，其主要症状表现为运动迟缓、静止性震颤、肌肉僵直及姿势平衡障碍等，严重影响患者生活质量。有公开数据显示，中国65岁以上的老年人帕金森患病率为1.7%，据此推算，中国的帕金森病人数量或超300万。 α-突触核蛋白是突触核蛋白家族的一员，也包括β-突触核蛋白和γ-突触核蛋白。突触核蛋白在大脑中大量表达，α和β突触核蛋白选择性地抑制磷脂酶D2。α-突触核蛋白可以整合突触前信号和膜转运。α-突触核蛋白的缺陷与帕金森病的发病机制有关。α-突触核蛋白肽又是阿尔茨海默病患者大脑中淀粉样斑块的主要成分。β-突触核蛋白在阿尔茨海默病患者的病变中含量丰富，在路易体痴呆患者中也发现了该基因的突变。

用含有新霉素抗性基因的靶向载体删除Snca基因的第一个编码外显子（残基1-40），通过胚胎干细胞打靶获得Snca敲除小鼠。在Sncb基因外显子2两侧引入LoxP位点，电转获得正确靶向的ES细胞并注射到C57BL/6囊胚中。将得到的小鼠与鱼精蛋白protamine-Cre品系杂交获得Sncb基因外显子2删除的小鼠。两个小鼠杂交获得双敲除小鼠。

Chandra S; Fornai F; Kwon HB; Yazdani U; Atasoy D; Liu X; Hammer RE; Battaglia G; German DC; Castillo PE; Sudhof TC. 2004. Double-knockout mice for alpha- and beta-synucleins: effect on synaptic functions. Proc Natl Acad Sci U S A 101(41):14966-71

肥厚型心肌病（Hypertrophic cardiomyopathy, HCM），肥厚型心肌病是原发性心肌病主要类型之一，以心肌肥厚、心肌纤维排列紊乱为特征，临床表现包括呼吸困难，心绞痛，晕厥及猝死。HCM是常染色体显性遗传性疾病，60%~70%为家族性，目前，已证实至少14个基因突变与肥厚型心肌病的发病有关，其中有10种为编码肌小节结构蛋白的基因，绝大部分突变位于这些基因中。

利用CRISPR/cas9介导的大鼠基因敲入技术，将大鼠Myh7b基因c.5612-5613GC>CT突变敲入到原Myh7b基因中替换野生型，建立基因突变大鼠。

扩张型心肌病（Dilated cardiomyopathy, DCM），扩张型心肌病以心腔扩张、心肌收缩功能受损为主要特征，其为原发性心肌病的主要类型，临床表现包括进行性心力衰竭，心律失常，气短及水肿。扩张型心肌病是除冠心病和高血压以外导致心力衰竭的主要病因之一，至今，除行心脏移植外，扩张型心肌病仍无特异有效的治疗方法，其主要是对症治疗，但随病情进一步发展，心衰加重最终导致死亡，其病症出现后5年存活率约为40%。

利用CRISPR/cas9介导的大鼠基因敲除技术，将大鼠MIR451基因敲除，建立基因敲除大鼠。

扩张型心肌病（Dilated cardiomyopathy, DCM），扩张型心肌病以心腔扩张、心肌收缩功能受损为主要特征，其为原发性心肌病的主要类型，临床表现包括进行性心力衰竭，心律失常，气短及水肿。扩张型心肌病是除冠心病和高血压以外导致心力衰竭的主要病因之一，至今，除行心脏移植外，扩张型心肌病仍无特异有效的治疗方法，其主要是对症治疗，但随病情进一步发展，心衰加重最终导致死亡，其病症出现后5年存活率约为40%。

利用CRISPR/cas9介导的大鼠基因敲入技术，将大鼠DHCR24基因EXON3两侧插入Loxp位点，建立基因条件敲除大鼠。

Wei Dong, Fei-fei Guan, Xu Zhang, Shan Gao, Ning Liu, Wei Chen, Lian-feng Zhang, Dan Lu*. Dhcr24 activates the PI3K/Akt/HKII pathway and protectsagainst dilated cardiomyopathy in mice. Anim Models Exp Med. 2018;1:40–52.

扩张型心肌病（Dilated cardiomyopathy, DCM），扩张型心肌病以心腔扩张、心肌收缩功能受损为主要特征，其为原发性心肌病的主要类型，临床表现包括进行性心力衰竭，心律失常，气短及水肿。扩张型心肌病是除冠心病和高血压以外导致心力衰竭的主要病因之一，至今，除行心脏移植外，扩张型心肌病仍无特异有效的治疗方法，其主要是对症治疗，但随病情进一步发展，心衰加重最终导致死亡，其病症出现后5年存活率约为40%。

扩增并经测序比对正确的HOMO DHCR24 ORF片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达HOMO DHCR24表达载体。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到SD大鼠的受精卵中，制备转基因大鼠。

Wei Dong, Fei-fei Guan, Xu Zhang, Shan Gao, Ning Liu, Wei Chen, Lian-feng Zhang, Dan Lu*. Dhcr24 activates the PI3K/Akt/HKII pathway and protectsagainst dilated cardiomyopathy in mice. Anim Models Exp Med. 2018;1:40–52.

Brugada综合征是由于编码心肌离子通道基因突变引起离子通道功能异常而导致的综合征。临床上,这个综合征以V1～3导联ST段抬高、V1～3导联ST段多变、心脏结构无明显异常、多形室性心动过速（室速）或心室颤动（室颤）和晕厥的反复发作、以及心脏性猝死为特征。自从1992年西班牙Brugada两兄弟首先报道Brugada综合征以来，该病已经从一种少见病发展成为一些国家年轻人仅次于车祸的第二大死亡杀手，猝死年龄（41±15）岁。文献估计，该病引起的猝死占所有猝死病例的4%，占无器质性心脏疾病猝死者的20%。更为严重的是，大多数患者发生的第一症状就是猝死，根本来不及防范和救治。

利用CRISPR/cas9介导的大鼠基因敲入技术，将大鼠CACNB2基因突变后，易同源重组方式替代原基因，建立基因突变大鼠。

肥厚型心肌病（HCM）是一种原因不明的心肌疾病，特征为心室壁呈不对称性肥厚，常侵及室间隔，心室内腔变小，左心室血液充盈受阻，左心室舒张期顺应性下降。根据左心室流出道有无梗阻分为梗阻性及非梗阻性肥厚型心肌病，可能与遗传等有关。肥厚型心肌病有猝死风险，是运动性猝死的原因之一。肥厚型心肌病是原发性心肌病主要类型之一，以心肌肥厚、心肌纤维排列紊乱为特征，临床表现包括呼吸困难，心绞痛，晕厥及猝死。HCM是常染色体显性遗传性疾病，60%~70%为家族性，目前，已证实至少14个基因突变与肥厚型心肌病的发病有关，其中有10种为编码肌小节结构蛋白的基因，绝大部分突变位于这些基因中。

利用CRISPR/cas9介导的大鼠基因敲入技术，将大鼠TTN基因突变后，以同源重组方式替代原基因，建立基因突变大鼠。

肥厚型心肌病（HCM）是一种原因不明的心肌疾病，特征为心室壁呈不对称性肥厚，常侵及室间隔，心室内腔变小，左心室血液充盈受阻，左心室舒张期顺应性下降。根据左心室流出道有无梗阻分为梗阻性及非梗阻性肥厚型心肌病，可能与遗传等有关。肥厚型心肌病有猝死风险，是运动性猝死的原因之一。肥厚型心肌病是原发性心肌病主要类型之一，以心肌肥厚、心肌纤维排列紊乱为特征，临床表现包括呼吸困难，心绞痛，晕厥及猝死。HCM是常染色体显性遗传性疾病，60%~70%为家族性，目前，已证实至少14个基因突变与肥厚型心肌病的发病有关，其中有10种为编码肌小节结构蛋白的基因，绝大部分突变位于这些基因中。

利用CRISPR/cas9介导的大鼠基因敲入技术，将大鼠TTN基因突变后，以同源重组方式替代原基因，建立基因突变大鼠。