标识符 | CSTR:16397.09.0G01001250 |
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资源中文名称 | 免疫系统人源化小鼠模型 |
资源英文名称 | Humanized immune system mouse models |
疾病概述 | 免疫系统人源化小鼠模型可以用于所有针对人免疫系统所产生的疾病。该模型在细胞发育、感染性疾病、自身免疫病以及肿瘤治疗等领域有很多的应用,为研究临床疾病提供了良好的研究平台。 |
实验动物背景信息 | 重度免疫缺陷小鼠NRG(NOD.Cg-Rag1-/-l2rg-/-)。 |
模型制作方法 | 1.实验动物
NRG小鼠:NOD-scid小鼠敲除Rag1和Il2rg,购于美国实验室。 2.细胞脐带血来自合作医院或者脐血库(有伦理证明)。 根据用CD34纯化干细胞试剂盒,纯化脐带血中造血干细胞,纯化的细胞当天移植。 3.移植1)选取新生鼠或者4周雌鼠,用X-RAY辐照仪照射,剂量是 1.5Gy。 2)将纯化的 CD34+造血干细胞尾静脉注入照射后的小鼠体内,每只小鼠注射1×10e5 细胞。 3)12周后,采血检测人细胞的比例:抗小鼠 PE-CD45;抗人 APC CY7-CD45;抗人 APC-CD3。 4.制备流程图:
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模型表型数据 | 1.造血干细胞纯化
CD34+细胞的纯度,流式染色在90%以上,如图所示; 2.表型分析
移植12周后,分别取外周血、骨髓、肝脏和脾脏,通过染色人的CD45、人CD3和小鼠的CD45,鉴定人细胞重建比例,结果见下图。 3.病理表型
取脾脏、肝脏、淋巴结和肠,通过组化染色人CD45,见下图: |
动物模型的评价与验证 | 1.评价模型构建--流式检测方法:
检测外周血、脾脏和骨髓的人细胞的比例。流式染色后,用流式细胞仪检测hCD45在20%-60%或者以上,建模型成功,可以用于相应研究。 2.评价模型构建—组织化学检测方法组化:
取脾脏、淋巴结、骨髓和肝脏,用多聚甲醛固定,石蜡包埋切片后,用人CD45组化染色,有人细胞显色,表示器官也具有人源化,说明模型构建成功。 3.评价模型构建—解剖学方法
免疫缺陷小鼠,缺失各种淋巴细胞,其脾脏比较小,而且没有胸腺和淋巴结。移植后,因为人淋巴细胞的重建,小鼠的脾脏会增大,略小于野生型小鼠,会在肠系膜位置形成淋巴结,这些也都可以作为重建成功的指标。 |
保存方式 | 活体 |
合作方式 | 仅限合作研究 |
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备注 |