| 标识符 | CSTR:16397.09.0G16000438 |
|---|---|
| 资源中文名称 | SHIVSF162P3阴道途径感染恒河猴模型 |
| 资源英文名称 | Rhesus Macaques intravaginally infected with SHIVSF162P3 |
| 疾病概述 | 艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至2015年5月31日，全国历年累计报告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题，艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。 |
| 实验动物背景信息 | 恒河猴又名孟加拉猴、猕猴或广西猴。学名为（Macaca mulatta），英文名rhesus macaque。分类所属为哺乳纲(Mammalia)，灵长目(Primates)，人猴猿亚目(Anthopoidea)，猴科(Cercopithecidae)，猕猴属(Macaca)。月经周期为28(1-4)天，发情期为11-12个月，怀孕期163天，产仔期3-6个月，胎产仔1-2只，出生重250-380g，哺乳期3-7个月。 猕猴属中，恒河猴使用最广。因分子生物学进展，栗色猕猴用于生理、生化、遗传、血型及免疫等方面的研究更多，病理研究也不少，常用于医疗和药物实验等。 在生物学研究方面可用于生理学、心理学、遗传学的各种研究。 在生理学研究方面可用于脑功能、血液循环、呼吸生理、生殖生理、内分泌和老年学等各项实验。 在医学研究方面可用于感染人类所特有的传染病，特别是其他动物不能复制的传染病 药物学研究方面，预防小儿麻痹的糖丸，恒河猴是唯一的试验对象 ，人类避孕药物的研究，用恒河猴作试验是极为理想的，此外，恒河猴还常用于放射病出血和骨髓移植的实验。 （一）传染病学研究 （二）药理学和毒理学研究 （三）生殖生理研究 （四）口腔医学研究 （五）行为学和高级神经活动研究 （六）营养、代谢研究 （七）老年病研究 （八）器官移植和眼科研究 （九）内分泌病和畸胎学研究 （十）肿瘤学和环保研究 20世纪60年代出版的《猕猴文献录》中，涉及论文的多达五百余篇；在12种猕猴中，使用栗色猕猴的几乎占一半；试加分析，解剖文章占半数，生理学和生态学其次，再次是分类、地理分布、胚胎、进化、遗传和生化病理各有二十余篇，最少的是古生物和畜养、管理的文章。 |
| 模型制作方法 | 1、 实验用病毒：感染毒株为SHIVSF162p3中国恒河猴细胞适应株，中国恒河猴PBMCs滴定病毒原液TCID50滴度为1×104 TCID50/mL。 2、 感染动物：选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法：将麻醉好的实验猴放在操作台上，动物采取俯卧位，后肢抬高，暴露阴道口。用2mL预冷的无菌PBS清洗阴道。再将稀释好的适当浓度的病毒液1mL缓慢推入。实验猴保持此姿势30min。 4、 SHIVSF162p3阴道感染猴样品采集和指标测定：感染采取小量多次的方法,共感染13次。前6次使用20TCID50的SHIVSF162p3,后7次使用30TCID50的SHIVSF162p3，间隔4-7d，进行阴道感染。在每次感染前及13次感染结束后,采EDTA抗凝血3mL，分别测定外周血CD4+/CD8+比值及血浆病毒载量。 5、 SHIVSF162p3阴道感染猴血浆病毒载量的测定：提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA，使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SHIVSF162p3阴道感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+T细胞绝对数。 |
| 模型表型数据 | 1、SHIVSF162p3阴道感染恒河猴外周血病毒载量结果 6只实验猴都先后出现了血浆病毒载量（图1）。1-1感染后27d出现载量，37d达到高峰（6.498×107copies/mL），57d载量检测阴性消失，但在85d载量再次出现，直至246d载量一直都维持在105copies/mL左右。1-2病毒载量出现最早，初次感染后的23d达到5.665×105copies/mL，27d达到高峰（2.1×107copies/mL），随后下降，至57d检测呈阴性，共持续了4周时间，并且一直到第246d都持续阴性。1-3和1-4的载量变化与2号相似，只是载量出现时间稍晚，1-3的载量出现在37d,高峰期在45d,也达到了107copies/mL的水平，但只维持了2周的时间；1-4比1-2晚4d出现载量，出现时载量也已达到105copies/mL的水平，高峰期出现在31d（4.72×106copies/mL），维持了3周左右的载量。不同的是，它们分别在感染后154d和203d出现一过性小幅反弹，载量水平只在103-104copies/mL之间。1-5和1-6的载量出现最晚，均出现在感染后50d,并且不连续，没有明显的高峰，始终维持在104-106copies/mL的水平。 图1 SHIVSF162p3小剂量多次阴道途径感染恒河猴血浆病毒载量结果 Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 2、SHIVSF162p3阴道感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值结果 6只实验猴的CD4+/CD8+比值在某一段时间内均有一个急剧下降的过程，总体有一个下降的趋势。1-1在感染后37d CD4+/CD8+比值迅速从感染后31d的1.51下降到0.50，并且持续走低，到300d时，已降低到0.35。1-2和1-4总体没有太大的变化，但分别在感染后31d和37d有一个下降过程。1-2由27d的3.89直降到1.55，其后又迅速回升，始终徘徊在3.0附近；1-4由2.72直降到1.69，并维持在这个水平上，只在182d有一个小幅波动。1-3和1-5变化基本相同，分别在感染后45d和64d降到最低，并且出现倒置，其中1-5甚至降到0.5以下，其后反弹并一直维持在0.8-1.0之间。1-6与1-3、1-5趋势相同，变化幅度小，没有出现倒置，始终维持在1.0以上，最低值1.02出现在85d（图2）。 图2 SHIVSF162p3小剂量多次阴道途径感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值 Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaques infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 3、SHIVSF162p3阴道感染恒河猴外周血CD4+T细胞绝对数结果 所有实验猴的CD4+细胞绝对数在感染50天内都基本保持稳定，在1000个/µL全血上下浮动，随后均有逐步下降，但下降幅度不大，最低值始终在600以上（具体数据未显示）。只有1-1下降幅度较大，到感染后274d时，已降到293个细胞/µL猴血（图3）。 图3 SHIVSF162p3阴道途径感染恒河猴1-1 外周血CD4+T细胞绝对数的变化 Fig.3 The CD4+ T cell counts in Chinese-original rhesus macaques 1-1 infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 |
| 动物模型的评价与验证 | 用导尿管将病毒缓慢注入猴阴道内，建立异性性传播动物模型，用于艾滋病研究。 |
| 保存方式 | |
| 合作方式 | 合作研究 |
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1. 丛喆，刘浩，朵建英，王卫，蒋虹，高虹，杨志伟，Sylvain Fleury,魏强，秦川。B亚型SHIVSF162p3中国恒河猴小剂量多次阴道粘膜感染。中国比较医学杂志，2011，21（2）：44-48。Efficient Repeated Low-Dose Intravaginal Infection with SHIVSF162p3 inChinese-Origin Rhesus Macaques. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE, 2011，21（2）：36-43. 2. Bomsel M, Tudor D, Drillet AS, Alfsen A, Ganor Y, Roger MG, Mouz N, Amacker M, Chalifour A, Diomede L, Devillier G, Cong Z, Wei Q, Gao H, Qin C, Yang GB, Zurbriggen R, Lopalco L, Fleury S. Immunization with HIV-1 gp41 subunit virosomes induces mucosal antibodies protecting nonhuman primates against vaginal SHIV challenges. Immunity. 2011 Feb 25;34(2):269-80. |
| 备注 | 所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 |
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