心脏组织特异性过表达cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠模型-

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标识符	CSTR:16397.09.0I01001142
资源中文名称	心脏组织特异性过表达cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠模型
资源英文名称
疾病概述	扩张型心肌病（Dilated cardiomyopathy, DCM）
实验动物背景信息	心脏组织特异性过表达cTnT^R141W扩张型心肌病转基因小鼠模型
模型制作方法	扩增并经测序比对正确的cTnT^R141W突变片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达cTnT^R141W表达载体（图1A）。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。PCR法鉴定小鼠基因型（图1B），Northern Blot法分析cTnT^R141W的表达情况（图2）。实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准(GC-07-2001) 图1. cTnT^R141W转基因小鼠模型的建立及鉴定 (A) 将cTnT^R141W突变基因片段插入α-MHC心脏组织特异性启动子下游构建转基因表达载体. (B) PCR法鉴定小鼠基因型. 1: 阳性对照；2: 分子量标记；20:阴性对照；21:空白对照；3,15,18: cTnT^R141W阳性转基因小鼠；其余为阴性转基因小鼠. 图2. Northern Blot法分析cTnT^R141W转基因小鼠心肌组织cTnT的表达 (A) Northern Blot法观察内源及转基因外源cTnT基因RNA的表达情况. (B) PCR法分析未经及经酶消化后cTnT的表达，1,2:野生小鼠基因组对照；3,4:首建鼠1号；5,6:首建鼠13号；7,8:首建鼠16号.
模型表型数据	1、从2月龄开始cTnT^R141W转基因小鼠即出现死亡，至8月龄时cTnT^R141W转基因小鼠死亡率为11.1%（图3，n = 19），尸检可见心腔扩张和附壁血栓。图3. cTnT^R141W转基因小鼠死亡率分析注：SPSS16.0软件Kaplan-Meier curves分析cTnT^R141W转基因小鼠死亡率。 2、cTnT^R141W转基因小鼠表现为进行性心室扩张和收缩功能下降，至4月龄时LV ESD和LV EDD分别增加了58.3%和27.8%，而EF%和FS%分别降低了39.9%和45.4% （表1）。表1. 4月龄cTnT^R141W转基因小鼠超声参数 Body wt: 体重; HR: 心率; LV ESD: 左室收缩末期内径; LV EDD: 左室舒张末期内径; LV systolic volume: 左室收缩末期容积; LV diastolic volume: 左室舒张末期容积; EF%: 射血分数; FS%: 短轴缩短率. P <0.05 versus* Wild type mice; **P <0.01 versus Wild type mice. 3、cTnT^R141W转基因小鼠心肌细胞排列不齐，间质纤维化增加（图4），投射电镜结果显示cTnT^R141W转基因小鼠心肌细胞出现断裂溶解，肌浆网扩张，线粒体肿胀，出现空泡（图5）。图4. cTnT^R141W转基因小鼠心脏整体及心肌显微结构分析同窝阴性对照（A，C）及cTnT^R141W转基因小鼠（B，D）心脏整体结构观察；同窝阴性对照（E，G）及cTnT^R141W转基因小鼠（F，H）心肌H&E和Masson染色。图5. cTnT^R141W转基因小鼠心肌超微结构分析投射电镜观察同窝阴性对照（A）及cTnT^R141W转基因小鼠（B）心肌超微结构，Mf (myofrils): 肌纤维。 4、cTnT^R141W转基因小鼠心肌肥厚标志物NPPA，NPPB，ACTA1，ATP2A2的表达显著增高（图6）。图6. cTnT^R141W转基因小鼠心肌肥厚标志物表达分析 NPPA: 心钠肽; NPPB: 脑钠肽; ACTA1: α1肌动蛋白; ATP2A2:钙离子转运ATP酶A2.
动物模型的评价与验证
保存方式	胚胎冷冻
合作方式
相关文章	1.Juan F, Wei D, Xiongzhi Q, Ran D, Chunmei M, Lan H, Chuan Q, Lianfeng Z. The changes of the cardiac structure and function in cTnTR141W transgenic mice. Int J Cardiol. 2008; 128(1):83-90. 2.Zhao H, Lv D, Zhang W, Dong W, Feng J, Xiang Z, Huang L, Zhang L. Ginsenoside-Rb1 attenuates dilated cardiomyopathy in cTnT(R141W) transgenic mouse. J Pharmacol Sci. 2010; 112(2): 214-222. 3.Zhao HP, Lü D, Zhang W, Zhang L, Wang SM, Ma CM, Qin C, Zhang LF. Protective action of tetramethylpyrazine phosphate against dilated cardiomyopathy in cTnT(R141W) transgenic mice. Acta Pharmacol Sin. 2010; 31(3): 281-288. 4.Zhang W, Lu D, Dong W, Zhang L, Zhang X, Quan X, Ma C, Lian H, Zhang L. Exprssion of CYP2E1 increases oxidative stress and induces apoptosis of cardiomyocytes in transgenic mice. FEBS J. 2011 May; 278(9): 1484-1492. 5.Zhang L, Lu D, Zhang W, Quan X, Dong W, Xu Y, Zhang L. Cardioprotection by Hepc1 in cTnT(R141W) transgenic mice. Transgenic Res. 2012 Aug; 21(4): 867-878. 6.Lu D, Shao HT, Ge WP, Liu N, Zhang X, Ma CM, Qin C, Zhang LF. Ginsenoside-Rb1 and Tetramethylpyrazine Phosphate Act synergistically to Prevent Dilated Cardiomyopathy in cTnTR141W Transgenic Mice. J Cardiovasc Pharmacol. 2012 May; 59(5): 426-433. 7.Lu D, Ma Y, Zhang W, Bao D, Dong W, Lian H, Huang L, Zhang L. Knockdown of Cytochrome P450 2E1 Inhibits Oxidative Stress and Apoptosis in the cTnTR141W Dilated Cardiomyopathy Transgenic Mice. Hypertension. 2012 Jul; 60(1): 81-89. 8.朱皓，吕丹，高凯，张连峰. 磁共振成像对扩张型心肌病转基因模型小鼠左右心室对比分析[J]．中国实验动物学报. 2013, 21(2): 28-33. 9.Lu D, Zhang L, Bao D, Lu Y, Zhang X, Liu N, Ge W, Gao X, Li H, Zhang L. Calponin 1 inhibits dilated cardiomyopathy development in mice through the εPKC pathway. Int J Cardiol. 2014 May 1; 173(2): 146-153. 10.Lu D, Dong W, Zhang X, Quan X, Bao D, Lu Y, Zhang L. WIF1 causes dysfunction of heart in transgenic mice. Transgenic Res. 2013 Dec; 22(6): 1179-1189.
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