Balb/c

基因打靶

　　p53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of p53，ASPP)是2001年发现的一个蛋白质家族，该家族成员包括ASPP1、ASPP2和iASPP (inhibitory member of the ASPP family)3个成员，此家族成员具有3个特征性的结构：4个锚蛋白重复序列, SH3结构域以及富含脯氨酸的结构域。ASPP1和ASPP2分别是由1090、1128个氨基酸残基组成，二者和p53结合蛋白2(p53 binding protein 2, 53BP2)高度同源，且ASPP1、ASPP2的氨基端和羧基端部分同源。ASPP1及ASPP2能够和p53结合共同调节p53蛋白的生物学活性，促进DNA损伤的细胞发生凋亡。

1、ASPP1与ASPP2

　　ASPP1和(或)ASPP2与p53的相互作用主要是能够特异性地增强p53的促进细胞凋亡功能，有研究表明这是通过增强p53的促凋亡基因启动子与DNA结合从而促进细胞发生凋亡。ASPP1和(或)ASPP2蛋白的发现让人们了解到为什么突变的p53仍能与DNA结合，而不能发挥它的促进细胞凋亡功能，这是因为突变的p53不再能与ASPP1和(或)ASPP2蛋白结合发挥其功能，DNA损伤的细胞因而不能发生凋亡。

　　将ASPP2转入HeLa和COS-1细胞中可显著促进这2种细胞发生凋亡，低水平表达则可以使细胞抵抗DNA损伤，免于发生凋亡。此外，ASPP2 还能够促进p53抑制转染癌基因Ras和E1A的大鼠胚胎纤维母细胞形成结节的能力，同时也增加p53反应基因p21的转录活性。ASPP1和(或)ASPP2和p53结合的必需氨基酸序列高度同源，而p53蛋白在细胞DNA损伤后明显增高。在正常生长的MCF-7细胞中，分别有4.1％和1.5％的p53与ASPP1和ASPP2形成复合体；经过UV辐射后，p53和ASPP2形成复合体的数量增加了3.4倍(约5.5％的p53和ASPP2形成复合体)，而与ASPP1结合的p53数量没有增加，提示MCF-7细胞经过UV辐射后p53-ASPP2复合体明显增加，并且ASPP2在UV辐射后能够明显调节p53促进细胞凋亡的功能。

2、iASPP

　　iASPP比ASPP1和ASPP2稍短，能够抑制p53介导的细胞凋亡。iASPP抑制p53的功能提示iASPP在体内是一种癌蛋白，iASPP的表达可显著增加癌蛋白Ras、E7或E1A的活性，而ASPP1和(或)ASPP2主要抑制Ras和E1A的转化活性。通过UV辐射或顺铂处理造成MCF-7细胞和U2OS细胞的DNA损伤(这两种细胞都表达野生型p53)，转入iASPP后观察到iASPP的表达增高抑制了UV辐射造成的这两种细胞的凋亡，却不能抑制顺铂诱导造成的Saos-2细胞的凋亡，因为后者表达突变型的p53，说明iASPP能够特异性抑制野生型p53的功能。而且iASPP过表达和正常表达水平的ASPP1和(或)ASPP2之间存在强相关性：8例表达野生型p53的肿瘤组织和正常对照组织相比，存在iASPP的过量表达，其中有7例表达正常水平的ASPP1和ASPP2。

　　使用PPP1R13L(编码iASPP)的反义RNA处理细胞可使MCF-7和U2OS细胞的凋亡增加3～5倍，因此可以肯定iASPP对p53是起抑制作用的。

研究发现肿瘤细胞中ASPP1和ASPP2的mRNA低表达与iASPP mRNA的高表达共存，同时在ASPP1和ASPP2的5＇端非编码区发现异常高甲基化现象，提示表观遗传信号的异常可能与ASPP1和ASPP2在肿瘤细胞中的表达下调有关，iASPP mRNA表达水平在急性白血病患者细胞中比正常者和急性白血病完全缓解者高。