C57BL/6J

使用含有新霉素抗性和单纯疱疹病毒胸苷激酶基因的靶向载体破坏编码该基因的大部分外显子2以及所有外显子3和4的2.8kb序列。 将构建体电穿孔到129P2 / OlaHsd衍生的E14胚胎干（ES）细胞中。 将正确靶向的ES细胞注射到C57BL / 6胚泡中。

Icosl基因敲除小鼠纯合子表现出T细胞依赖性B细胞免疫反应严重受损，缺陷的B细胞同种型转换为IgG1和IgE，以及T细胞产生的IL-4和IL-10受损。 在突变小鼠中基础IgG1血清水平降低。 在诱发哮喘的实验模型过敏性气道疾病（AAD）之后，IgE水平仍低于野生型水平。 抗原挑战导致脾生发中心的大小和数量减少。

a，在胚胎干细胞中的基因靶向。顶部，显示相关限制位点的基因组小鼠ICOS基因座的一部分。 E，EcoRI； X，XbaI。外显子显示为灰色框。显示了pTVneo poly（A）靶向载体的结构（中）和靶向的ICOS基因座（下）。指出了用于Southern分析的短臂杂交探针。 b，来自ICOS-/-小鼠的尾部活组织检查的Southern印迹分析。用XbaI消化基因组DNA，并与a中所示的短臂侧翼探针杂交。 c，活化的ICOS-/-T细胞缺乏ICOS表达（请参见方法：“体外刺激”）。在门控T细胞上显示了ICOS的表达（B7RP1配体；实线）和无关的Fc嵌合蛋白的背景染色（虚线）。与野生型（WT）细胞（MF = 73.7）相比，来自ICOS +/-小鼠的活化T细胞显示出较低的ICOS表达水平（平均荧光，MF = 51.9），这表明杂合动物具有基因剂量效应。 d，ICOS-/-T细胞的增殖反应受损。用抗CD3和B7RP1-Fc刺激来自ICOS-/-（黑条； n = 2）和野生型（白条； n = 2）同窝小鼠的T细胞富集。数据代表三个独立实验之一。 e，活化的ICOS-/-T细胞上活化标记的表达降低。用抗CD3 / B7RP1-Fc刺激ICOS-/-T细胞，并在24小时后通过高前向散射CD4 + T细胞门控的流式细胞术分析评估ICOS-/-T细胞。