条件性Pde4d-Floxp基因敲除小鼠模型-

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标识符

CSTR:16397.09.0C01000194

资源中文名称

条件性Pde4d-Floxp基因敲除小鼠模型

资源英文名称

Pde4d-Floxp conditional knockout mouse model

疾病概述

Pde4d基因编码多个涉及环磷酸腺苷(cAMP)信号切割的亚型，编码的蛋白属于磷酸二酯酶家族，参与cAMP的水解，但不影响cGMP。在多种细胞类型中充当信号转导分子。该基因使用不同的启动子产生多个可选剪接的转录变异，编码功能蛋白。PDE4D已被发现在多种人类癌症中促进肿瘤的发展，包括肺癌、前列腺癌、黑色素瘤和胃癌等。PDE4D在心肌梗死的心肌细胞中发生过表达，而高表达的PDE4D可以促进心肌细胞凋亡。PDE4D也被发现可通过调节细胞凋亡增加缺血性卒中(IS)的发生风险，是导致脑I/R损伤的关键因素之一。

实验动物背景信息

C57BL/6J小鼠

模型制作方法

基因敲除构建设计。

模型表型数据

条件性Pde4d基因敲除小鼠采用PCR方式进行鉴定。

引物设计	引物名称	引物序列（5’-3’）	PCR 产物大小
跑胶检测L 端floxp 插入情况	F1	GTCAGATGAAATGCTTTGCTTTC	KI：210 bp WT：176 bp
跑胶检测L 端floxp 插入情况	R1	TATGTTATTCCAGAGCTGCCTG	KI：210 bp WT：176 bp
跑胶检测R 端 floxp 插入情况	F2	TCCGAGAGGAGGGCAGTTG	KI：238 bp
跑胶检测R 端 floxp 插入情况	R2	GAGAGCTCTGATGTCTGGGACC	WT：194 bp
测序检测两端floxp 插入情况	F	TCCCTCCAGCATTATTGAGG	KI：1082 bp WT：1014 bp
测序检测两端floxp 插入情况	R	GATCTCTACCATCCCTTACAATCC

1）F1+R1 引物PCR 检测L 端floxp 插入情况：

①纯合子（f/f）：只有一条KI：210 bp 带

②杂合子（f/w）：两条带，一条为KI：210 bp，一条为WT：176 bp

③野生型（wt）：只有一条WT：176 bp 带

2）F2+R2 引物PCR 检测R 端floxp 插入情况：

①纯合子（f/f）：只有一条KI：238bp 带

②杂合子（f/w）：两条带，一条为KI：238 bp，一条为WT：194 bp

③野生型（wt）：只有一条WT：194 bp 带

3）F+R 引物PCR 检测两端floxp 插入情况：

需要测序判断，测序引物为F(或R1)和F(或F2)

①纯合子（f/f）：测序峰型为单峰，比对与Donor 序列一致，插入两个floxp 序列

②杂合子（f/w）：测序峰型为双峰，能读出含有floxp 序列的套峰

③野生型（wt）：测序峰型为单峰，比对与野生型序列一致

（2）PCR结果：见图7#、9-10#小鼠PCR结果符合要求，需进一步测序鉴定。

测序结果：将F/R 引物扩增的PCR 产物测序确认小鼠为两端精确插入floxp 序列的杂合子，具体见图3。黑色箭头代表野生型序列，红色箭头代表插入的序列，L 端和R 端测序的峰形分析，都可确认在小鼠floxp 序列（ATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTAT）精确插入指定位置。

L 端flxop 插入分析（测序引物：F）

R 端flxop 插入分析（测序引物：R）

图3. F/R 引物扩增的PCR 产物测序结果

动物模型的评价与验证

PDE4D已被发现在多种人类癌症中促进肿瘤的发展，包括肺癌、前列腺癌、黑色素瘤和胃癌等。PDE4D在心肌梗死的心肌细胞中发生过表达，也是导致脑I/R损伤的关键因素之一。

保存方式

活体

合作方式

不限定

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