条件性Ddit4-Floxp基因敲除小鼠模型-

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标识符

CSTR:16397.09.0C01000193

资源中文名称

条件性Ddit4-Floxp基因敲除小鼠模型

资源英文名称

Ddit4-Floxp conditional knockout mouse model

疾病概述

Ddit4也称为Redd1，编码的蛋白参与调控发育以及DNA损伤反应，是一种保守的应激反应基因；在缺氧、糖皮质激素、DNA损伤等多种细胞应激作用下表达量显著增加。DDIT4参与多种病理过程，包括氧诱导视网膜病变、肺气肿、帕金森病、抑郁症、糖尿病和癌症。许多疾病都与骨骼肌功能损害有关，即肌肉质量下降和疲劳能力增加。DDIT4可通过调节细胞生存和增殖整合上游反应，消减因刺激造成的组织损伤，DDIT4也与ROS的产生有关。另一方面，DDIT4通过调节促凋亡和抗凋亡基因的表达，提高细胞活力和生长速度。还有研究表明DDIT4参与脂多糖诱导的炎症反应。

实验动物背景信息

C57BL/6J小鼠

模型制作方法

基因敲除构建设计。

模型表型数据

条件性Ddit-4基因敲除小鼠采用PCR方式进行基因敲除的鉴定。

1.引物信息：见表1

表4. 鉴定引物序列

引物设计	引物名称	引物序列（5’-3’）	PCR 产物大小
跑胶检测L 端floxp 插入情况	F1	CCAGCACGAAAAAACAGATTAC	KI：235 bp WT：201 bp
跑胶检测L 端floxp 插入情况	R1	GACACCCCATCCAGGTATGAG	KI：235 bp WT：201 bp
跑胶检测R 端floxp 插入情况	F2	GGTGGGGGAAGGAAGTGTTC	KI：177 bp WT：143 bp
跑胶检测R 端floxp 插入情况	R2	CATGCTACATACACATCCAGCC	KI：177 bp WT：143 bp
测序检测两端floxp 插入情况	F	ATGCCTAGCCTCTGGGATCG	KI：1421 bp WT：1353 bp
测序检测两端floxp 插入情况	R	GGCCAGTGCAGACCAGCTG	KI：1421 bp WT：1353 bp

1）F1+R1 引物PCR 检测L 端floxp 插入情况：

①纯合子（f/f）：只有一条KI：235 bp 带

②杂合子（f/w）：两条带，一条为KI：235bp，一条为WT：201 bp

③野生型（wt）：只有一条WT：201bp 带

2）F2+R2 引物PCR 检测R 端floxp 插入情况：

①纯合子（f/f）：只有一条KI：177bp 带

②杂合子（f/w）：两条带，一条为KI：177 bp，一条为WT：143 bp

③野生型（wt）：只有一条WT：143 bp 带

3）F+R 引物PCR 检测两端floxp 插入情况：

需要测序判断，测序引物为F(或R1)和F(或F2)

①纯合子（f/f）：测序峰型为单峰，比对与Donor 序列一致，插入两个floxp 序列

②杂合子（f/w）：测序峰型为双峰，能读出含有floxp 序列的套峰

③野生型（wt）：测序峰型为单峰，比对与野生型序列一致

测序结果：将F/R 引物扩增的PCR 产物测序确认5#小鼠为两端精确插入floxp 序列的杂合子，具体见图3。黑色箭头代表野生型序列，红色箭头代表插入的序列，L 端和R 端测序的峰形分析，都可确认在小鼠floxp 序列（ATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTAT）精确插入指定位置。

L 端flxop 插入分析（测序引物：R1）

R 端flxop 插入分析（测序引物：R2）

图3. F/R 引物扩增的PCR 产物测序结果

动物模型的评价与验证

DDIT4参与多种病理过程，包括氧诱导视网膜病变、肺气肿、帕金森病、抑郁症、糖尿病和癌症。许多疾病都与骨骼肌功能损害有关，即肌肉质量下降和疲劳能力增加。

保存方式

活体

合作方式

不限定

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