EV71 MP10 灌胃感染ICR小鼠模型-

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标识符	CSTR:16397.09.0C01000185
资源中文名称	EV71 MP10 灌胃感染ICR小鼠模型
资源英文名称	EV71 intragastrically infected ICR mice model
疾病概述	手足口病（hand, foot, and mouth disease, HFMD）是由肠道病毒引起的，以发热和手、足、口腔、臀部等部位出现皮疹、疱疹或疱疹性咽峡炎为主要特征的一种常见于小儿的急性传染病。手足口病多发生于入学前儿童，尤其是3岁以内的婴幼儿，少数患者会发展为重症，并发无菌性脑膜炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿、急性弛缓性麻痹和心肌炎等，死亡率和致残率较高。人肠道病毒71型（EV71）是手足口病的主要病原体之一，属于微小RNA病毒科，肠道病毒属，主要通过粪口传播，引发婴幼儿手足口病及疱疹性咽峡炎，严重并发症包括无菌性脑膜炎，而神经源性的肺水肿或肺出血是导致婴幼儿死亡的原因之一。EV71病毒最初定植于鼻咽部或胃肠道粘膜，侵入淋巴组织并在其中繁殖，进而引起第一次病毒血症。若机体免疫力差，病毒可扩散至全身组织器官，大量繁殖后再次入血，引起第二次病毒血症，最终侵犯靶器官，如脑、脑膜、脊髓、心肌和横纹肌以及皮肤黏膜组织，引起重症病变，主要病变为神经元坏死等。
实验动物背景信息	ICR小鼠
模型制作方法	（1）病毒准备：使用的小鼠适应株为MP10，为FY0805a在小鼠体内连续传代10次后的小鼠适应株，GenBank存储号为HQ712020。（2）实验动物：使用SPF级别的7日龄ICR乳鼠，母鼠自然哺乳，在动物生物安全二级实验室内独立饲养。ICR小鼠毛色白化。适应性强，体格健壮，繁殖力强，生长速度快，实验重复性较好。是国际通用的封闭群小鼠。外周血项和骨髓细胞，具有较好的稳定性，是良好的血液学实验用动物。是进行手足口病原研究的理想动物。（3）病毒感染：根据预实验确定感染剂量，7日龄乳鼠，经口灌胃感染10⁷ TCID₅₀ 的EV71 MP10病毒,攻毒体积为100微升/只，空白对照组注射等量RD细胞上清。
模型表型数据	1.动物症状观察动物自感染EV71 MP10后第5天开始出现症状，表现为体重增长变缓、弓背竖毛、后肢行动迟缓至瘫痪等症状（图1）。感染后第7天时，有动物出现死亡，观察12天后存活率为40%。图1. EV71 MP10灌胃感染小鼠的体重变化、临床评分、生存率变化 2. 组织内病毒复制情况检测血液中病毒载量变化发现：感染后第3天和第5天的病毒载量基本持平，均为10⁶copies/μl。感染小鼠后肢肌肉中的病毒载量3天时为10⁸copies/mg，到5天时上升到10⁹copies/mg，表明了病毒感染引发病毒血症后，病毒经血液向组织扩散，并在肌肉组织内复制。在其他组织中，小鼠心脏和肝脏中病毒载量较高，病毒载量均超过10⁴copies/mg（图2）。图2. EV71 MP10灌胃感染7日龄ICR乳鼠后，血液、后肢肌肉组织和其他组织中病毒载量情况。注：D，感染后第3天和第5天血液中EV71 MP10病毒载量情况；E，感染后第3天和第5天后肢肌肉组织中EV71 MP10病毒载量情况；F，感染后第5天其他组织EV71 MP10病毒载量情况。（n=5-6） 3. 病理改变根据临床症状发现EV71 MP10感染后小鼠后肢出现明显瘫痪症状，且已检测到多种组织中有大量的病毒核酸，证明病毒已进入各组织并进行扩增复制，进一步取感染后第5天时各组织进行病理检测发现。与临床症状类似，后肢骨骼肌病理损伤最为严重，表现为骨骼肌细胞变性坏死，炎细胞大量浸润（图3）。在脾脏中出现脾脏髓外造血，部分动物出现白髓萎缩现象，并伴有巨噬细胞吞噬凋亡的淋巴细胞形成的星空现象。部分感染动物的胸腺组织出现胸腺皮质淋巴细胞凋亡及坏死，胸腺皮质变薄，淋巴细胞减少等病理损伤。脑组织也发生病变，局部神经元周围和网状神经毡可见空泡，少数神经元固缩（图3）。图3. EV71 MP10灌胃感染7日龄ICR乳鼠组织病理变化情况
动物模型的评价与验证	EV71 MP10 灌胃感染ICR小鼠模型采用病毒滴度为107 TCID50/ml病毒灌胃感染7日龄ICR乳鼠，可引起乳鼠后肢瘫痪，严重者可导致死亡。在感染乳鼠的血液和后肢骨骼肌中能检测到大量EV71的复制，在心、肝、脾、胸腺、小肠、大脑等组织中也能检测到病毒核酸。在病理上：后肢骨骼肌细胞大量坏死，炎性细胞大量浸润；脑组织中的部分神经元周围可见空泡、固缩；脾和胸腺也有部分病变。灌胃感染模型相对于腹腔注射模型临床症状相似，但症状出现较晚（第5天），且成活率有明显提高，为40%。灌胃感染模式模拟了EV71病毒
保存方式	活体
合作方式	不限定
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