| 标识符 | CSTR:16397.09.0J01000711 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 资源中文名称 | Galetin-7基因沉默小鼠 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 资源英文名称 | Galectin-7 Silencer BALB/c Mouse | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 疾病概述 | 众所周知，哮喘等过敏性疾病都具有复杂的病因，是环境和遗传共同作用的结果。长期外来刺激影响下，诱导患者某些基因的表达发生改变，引发支气管上皮细胞异常损伤，然后出现细胞凋亡，最后导致气道慢性炎症和哮喘的发生[7-11]。这些外来刺激包括环境烟雾、大气污染物、吸入变应原（如屋尘螨）、化学刺激物、病毒等。在相同的外界刺激下，如即使是在空气严重污染的重工业城市，也是只有少部分人发展成为哮喘患者，这就说明个人的遗传基础，即内因（哮喘易感性）是哮喘发生的关键因素。目前认为哮喘是一种有明显家族聚集倾向的多基因遗传性疾病，即哮喘的发生有患者的遗传基础。哮喘患者亲属发病率高于群体平均发病率。通过对比家族群间的遗传差异可以筛选出哮喘易感候选基因，为哮喘的早期预防和治疗提供依据。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 实验动物背景信息 | BALB/c Mouse |
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| 模型制作方法 | （1）将galectin-7CDNA序列输入网上的基因沉默片断选择软件，选择沉默的发夹DNA。DEFINITION Mus musculus lectin, galactose binding, soluble 7 (Lgals7)CDNA C A G C G A C T G G C C A C A T T G T GATGGAAAGGGAGGAGCTGAACCACTACCTTGCCTTTACTTAAGGTCCCCTCCCACAGCGACTGGCCACATTGTTGCTGTATTGCTGTGCCCGCCATGTCTGCTACCCAGCACAAGACCTCCCTGCCTCAGGGCGTCCGCGTGGGCACTGTCATGAGAATTCGAGGCATGGTCCCTGACCAGGCTGGCAGGTTCCATGTAAACCTGCTATGCGGTGAGGAGCAAGGAGCAGATGCCGCCTTGCACTTTAACCCGAGGCTGGACACTTCCGAGGTTGTCTTCAACACCAAAGAACAAGGCAAATGGGGCCGTGAGGAGCGAGGCACCGGCATCCCCTTCGAGCGTGGGCAGCCCTTTGAAGTGCTCCTCATCGCCACAGAGGAAGGCTTCAAGGCTGTGGTCGGGGATGACGAATATCTCCACTTCCACCACCGGATGCCGCCCGCGCGCGTGCGCTTGGTGGAGGTGGGCGGAGACGTGCAGCTGCATTCAGTGAAGATCTTCTAAGCAAGGACCCAAGGGCGTGGCGGGTAGGGGTGGGGGTGTAGGATCGCAGAGGAGGGTTTTGGATGGCGAATAAAGTGTAGCTGTAGTTCTG （2）分别合成3个不同位置galectin-7CDNA的正义和反义发夹DNA。 （3）将正义和反义序列退火，并通过连接酶与基因沉默载体p-silencer5.1连接。
（4）通过酶切确定沉默载体构建完成 （5）通过细胞培养和基因沉默载体转染，检测不同发夹的基因沉默效率
基因沉默效率细胞水平上的Western检测 （6）选择沉默效果高的发夹，通过核基因注射把p-silencer5.1中的启动子和发夹基因转入小鼠的核基因（7）首建鼠仔代基因鉴定，利用PCR引物鉴定发夹基因是否转入。
基因沉默首建鼠PCR检测 上游引物5’ATCCTCCCTTTATCCAGC 3’ 下游引物 5’ GAGGGCCTATTTCCCATG 3’ 退火温度51度，产物大小392 BP （8）首建鼠仔代Western Blot鉴定基因的沉默效果。
沉默鼠Western Blot检测 |
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| 模型表型数据 | 我们对该基因修饰小鼠进行质谱分析，注：野生BALB/c小鼠（114#），galectin-7沉默小鼠（115#），galectin-7转基因小鼠（116#）。差异倍数≥1.2或差异倍数≤0.833，所得结果进入分析。共筛选出1009个差异蛋白。两两比较，已知蛋白如下表。发现Galectin-7的相关蛋白：细胞骨架类：肌球蛋白轻链3（Myosin light chain 3）、肌球蛋白（Myosin-1）、肌动蛋白（Actin 1）、肌钙蛋白C（Troponin C）、中间丝相关蛋白（Repetin）、角蛋白4（Keratin-4）,角蛋白13（Keratin-13）,肌集钙蛋白（Calsequestrin）、肌浆/内质网ATP酶钙（Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase）；物质转运：二磷酸甲羟戊酸脱羧酶（Diphosphomevalonate decarboxylase）；急性时相蛋白：α1-酸性糖蛋白2（Alpha-1-acid glycoprotein 2）或血清淀粉样蛋白A（Serum amyloid A protein）。 野生BALB/c小鼠（114#），galectin-7沉默小鼠（115#），galectin-7转基因小鼠（116#）差异蛋白。
免疫共沉淀结果：发现在野生BALB/c小鼠，galectin-7转基因小鼠和galectin-7干扰小鼠中都存在Galectin-7，且在3组间都发现Galectin-7与肌球蛋白轻链-3，肌钙蛋白C，肌动蛋白-1，角蛋白-13和中间丝相关蛋白有相互作用。
野生BALB/c小鼠，galectin-7转基因小鼠和galectin-7沉默小鼠中gactin-7相互关联蛋白质 注：野生BALB/c小鼠（阴性组），galectin-7转基因小鼠（SPC组）和galectin-7干扰小鼠（Anti组）。 |
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| 动物模型的评价与验证 | 评价方法包括以整体实验为主，涵盖行为、影像、生理生化和组织切片等技术方法进行详细介绍。采用的仪器设备、试剂应满足模型评价的要求，指标完善，条件稳定。 评价指标包括核心指标（如特异的基因改变、特异的染毒病原株或高载量病毒核酸、特异性免疫抗体）；主要指标（模拟人类疾病临床症状和体征、易感器官的特征性改变和特异性生物标志物）；重要指标（模拟疾病某些方面的改变的指标）和辅助指标。 应包括阳性药物对其指标的证实效应。 应说明重复验证的批数。 中医药模型应有体现中医药特点的评价指标。 PCR和Western Blo | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 保存方式 | 冷冻保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 合作方式 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 相关文章 | Jing Tian, Ruxuan He, Yimu Fan, Qianqian Zhang, BaolinTian, Chunju Zhou, Chunyan Liu, Mingjing Song*, Shunying Zhao* Galectin-7 overexpression destroy airway epithelial barrier in transgenic mice. Integrative Zoology 2020; doi: 10.1111/1749-4877.124632 (1区 2.5). | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 备注 |
京公网安备 11010502043083号