ICR小鼠毛色白化。适应性强，体格健壮，繁殖力强，生长速度快，实验重复性较好，雌鼠自发性畸胎瘤和管状腺瘤发病率为0%~1%，用氨基甲酸乙酯诱发时，11~16天胚胎期畸胎瘤和管状腺瘤发病率为5.9%，离乳个体管状腺瘤和囊瘤发生率为30%，孕鼠为3%。是国际通用的封闭群小鼠。外周血项和骨髓细胞，具有较好的稳定性，是良好的血液学实验用动物。10日龄以内的ICR乳鼠对手足口病原较为敏感，由于CA10病毒具有嗜肌性，乳鼠感染后常表现出竖毛、单肢瘫痪、双肢瘫痪、甚至死亡的病症，是进行是手足口病原研究的理想动物。

（1）细胞病毒培养操作：

RD细胞经常规传代培养接种到T75细胞培养瓶，培养至融合度约80%；感染前弃去原培养基，细胞用含2%双抗的PBS 洗2遍，吸出PBS后加入无血清DMEM培养基。接种适量的CA10病毒后，置于37℃ 5% CO₂培养箱孵育1~2h；之后弃去无血清培养基，加入完全培养基继续培养。接种病毒后2~3d细胞病变CPE达到+++～++++，将T75细胞瓶置封口袋中，-80℃超低温冰箱冻化3次。然后将培养液转移至50mL离心管中，4℃ 2000rpm离心20min，沉淀细胞碎片。吸取病毒上清，分装后冻存，并测定病毒滴度TICD₅₀。

（2）组织病毒培养操作：

将CA10病毒以肌肉点注方式感染10日龄ICR乳鼠，三天后取肌肉组织置于适量PBS中研磨均匀，3000rpm离心30min，上清即为病毒液，分装后置于-80℃冰箱保存。

病毒感染：根据预实验确定的感染剂量，即10⁷ TCID₅₀ CA10病毒，将病毒经灌胃途径感染小鼠，感染剂量为100μl。对照组灌胃同等量的PBS。

1. 临床症状表型：

7日龄ICR小鼠感染CA10病毒5天后，开始出现不同程度的临床症状，症状由轻到重包括：驼背或炸毛，后肢无力，单后肢瘫痪，双后肢瘫痪，严重的直至死亡。第7天感染小鼠出现死亡，此后临床症状评分持续升高，持续出现小鼠死亡现象。到观察期结束（感染后12天）时平均临床评分为4分，存活率为20%（图1A，1B）。不过，感染小鼠体重增加未出现显著减缓，尤其是前10天基本与正常小鼠一致（图1C）。

2. 血液和组织中病毒复制情况：

感染后第1天血液和肌肉组织中病毒载量都低于检测阈值。到第3天血液中病毒载量均值达到4.6 X 10⁶ copies/μl，第5天时则下降至4X10⁵copies/μl（图2A）。后肢肌肉的病毒载量在感染后第3天为1.9X10⁷ copies/mg，第5天继续上升至1.1X10⁸ copies/mg（图2B）。除肌肉组织外，在其他组织样本中也都能检测到CA10病毒RNA，其中肝脏中的病毒载量最高，最高值可达10⁵ copies/mg（图2C）。心脏、肾脏、小肠和大脑中的病毒载量都超过了10⁴ copies/mg；脾脏、肺和胸腺病毒复制比较少，都低于10⁴ copies/mg。

图2. ICR 7日龄乳鼠灌胃感染CA10病毒后血液和组织中病毒载量情况。A，感染后第3天和第5天血液中病毒载量情况； B，感染后第3天和第5天后肢肌肉组织中病毒载量情况；C，感染后第5天心、肝、脾、肺、肾、小肠、胸腺和脑组织中病毒载量情况。

3. 病理变化情况：

    CA10病毒具有明显的嗜肌性，感染小鼠后肢肌肉中的病毒载量最高，且感染后的临床症状也表现为后肢的瘫痪症状，病理结果分析发现：骨骼肌病理损伤严重，具体表现为骨骼肌细胞变性坏死、大量炎细胞浸润（图3A）。除后肢肌肉外，在脾脏、胸腺和脑组织中也能观察到明显的病理变化：脾脏中能观察到白髓萎缩，伴有巨噬细胞吞噬凋亡淋巴细胞形成的星空现象（图3B）；胸腺组织切片出现皮质变薄，淋巴细胞凋亡及坏死等病理损伤（图3C）；脑组织局部神经元周五和网状神经毡可见空泡，少数神经元发生固缩现象（图3D）。其他组织，包括心脏、肝脏、肺、肾、小肠组织均未见明显病理损伤。

图3. ICR 7日龄乳鼠感染CA10病毒后组织病理变化情况。A-D，感染后第5天后肢骨骼肌、脾脏、胸腺、脑组织病理切片情况； E-H，正常小鼠的后肢骨骼肌、脾脏、胸腺、脑组织正常对照。（HE染色，A&E标尺=100μm，B-D&F-H标尺=200μm）