| 标识符 | CSTR:16397.09.0I01000696 |
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| 资源中文名称 | 肠道CCKBR基因条件性敲除小鼠模型 |
| 资源英文名称 | CCKBRflox/flox, Villin Cre Mouse Model |
| 疾病概述 | 高血压是一种由环境因素、遗传因素和行为因素相互作用产生的复杂心血 管症状，其中高盐摄入是最重要的环境因素之一。所谓血压的盐敏感性是指相 对高盐摄入所引起的血压升高，它带来的危害不仅仅是升高血压，还能够引发 脑卒中、心衰、动脉粥样硬化等并发症，并可加重胰岛素抵抗等。研究表明， 盐敏感性高血压病人并发心脑血管事件的风险远远高于盐耐受性高血压病人 [2]。西方发达国家一般人群中血压盐敏感者约 26%，而原发性高血压群体中血 压盐敏感者约 51%；我国一般人群中血压盐敏感者 20%-30%，而原发性高血 压群体中血压盐敏感者占 50-60%。因此，有效控制盐敏感性高血压对于改善 我国人群健康具有重要的意义。 盐敏感性高血压的病理机制表现为钠离子吸收增多或者肾脏重吸收异常导 致钠水潴留。目前抗高血压药物主要通过舒张血管和利尿改善钠水代谢的机制 降低机体血压，并且利尿药物作为临床用药的首选药物，但仍有一定比例的患 者没能达到控制目标。机体钠代谢的调节包括机体通过消化系统对钠的吸收和 通过肾脏对钠的排出，目前高血压治疗的临床药物和对高血压与钠水代谢的研 究主要集中在肾脏对钠水代谢的调节，而通过消化系统抑制机体钠的吸收可能 是从根本上解决盐敏感性高血压的重要手段。本动物模型将在前期研究结果的基础上，探索胃泌素抑制肠道对钠的吸收，及其在调节钠水代谢及盐敏感性高血压 中的重要作用，为盐敏感高血压的防治提供可靠的新模型和行之有效的新思路。 |
| 实验动物背景信息 | C57BL/6小鼠 |
| 模型制作方法 | 一、模型设计原理： GRNA介导Cas9蛋白剪切目标外显子两端的内含子DNA，同时提供同源模板Donor，基因组两端通过同源重组修复方式进行DNA修复，在特定外显子两端插入FloxP。CCKBR-FloxP小鼠与组织特异性表达Cre小鼠交配，从而实现CCKBR基因条件性敲除的目的。实验采用最新的spCas91.1进行注射，减少了基因组中的off-Target。 根据CCKBR基因组结构和蛋白功能保守区分析在Exon1的两边定点插入FloxP位点，实现将Exon1条件性敲除。 二、模型设计过程： 1)CCKBR基因GRNA靶点设计及活性检测
在要删除的Exon1外显子两端，设计gRNA靶点如下： Cckbr-L1: GCTTAGTTGGAGCTGAGTGGG Cckbr-L2: TGCTGGAGCTAGCTTAGTTGG Cckbr-L3: AGCAGGTGGAACCGGTGCTGG Cckbr-L4: CGCGGGAGCAGGTGGAACCGG Cckbr-R1: GGACCTAGGTGGGAGCTGAGG Reverse Complement: CCTCAGCTCCCACCTAGGTCC Cckbr-R2: GAGGGGAGGGACCTAGGTGGG Reverse Complement: CCCACCTAGGTCCCTCCCCTC Cckbr-R3: TTGGAGTCAGGAGAGCTTGGG Reverse Complement: CCCAAGCTCTCCTGACTCCAA Cckbr-R4: TGTGAAGGTGTTGGAGTCAGG Reverse Complement: CCTGACTCCAACACCTTCACA
使用Cas9/gRNA靶点效率检测试剂盒（货号：VK007）进行gRNA体外活性检测，结果如下： gRNA靶点活性检测结果分析如下：
2）CCKBRflox/flox,villin Cre小鼠设计
3）CCKBRflox/flox,villin Cre小鼠模型的繁育及鉴定结果： CCKBRfloxp/flox小鼠与Cre 的小鼠（villin Cre）杂交，对后代自交获得的小鼠进行基因型鉴定，成功获得CCKBR肠道上皮细胞条件性基因敲除小鼠CCKBRflox/flox,villin Cre）。见下图
经鉴定12#: CCKBRflox/flox,villin Cre |
| 模型表型数据 | CCKBRfl/fl; Villin Cre小鼠结果分析
1、生理生化指标分析：
2、肠道CCKBR检测结果：
3.小鼠有创及清醒状态血压结果：
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| 动物模型的评价与验证 | 基于模型制备三原则（表观效度、预测效度以及结构效度）对模型指标进行评价，其中包括整体行为特征、组织器官、细胞和分子等在内的指标评价体系。 评价方法包括以整体实验为主，涵盖行为、影像、生理生化和组织切片等技术方法进行详细介绍。采用的仪器设备、试剂应满足模型评价的要求，指标完善，条件稳定。 评价指标包括核心指标（如特异的基因改变、特异的染毒病原株或高载量病毒核酸、特异性免疫抗体）；主要指标（模拟人类疾病临床症状和体征、易感器官的特征性改变和特异性生物标志物）；重要指标（模拟疾病某些方面的改变的指标）和辅助指标 |
| 保存方式 | |
| 合作方式 | |
| 相关文章 | |
| 备注 |
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