| 标识符 | CSTR:16397.09.0I01001026 |
|---|---|
| 资源中文名称 | 辐射诱导长期小鼠造血系统损伤模型 |
| 资源英文名称 | Irradiatoin-induced long-term injury model of hematopoietic system in mouse |
| 疾病概述 | 随着科学技术的进步，核电设施使用增多，人类太空活动能力提升使辐射暴露的可能性不断增加。另外临床接受放射性治疗癌症患者也在不断上升。造血系统和免疫系统对电离辐射（Ionizing Radiation，IR）具有高度的敏感性。受照后不仅会引起急性骨髓抑制，对远期造血免疫功能也会有影响。受到亚致死剂量照射后会出现造血免疫系统急性损伤性变化。随着时间延长机体各项免疫指标逐步恢复，但也会出现一些持久性改变，从而影响机体的健康状态。 |
| 实验动物背景信息 | C57BL/6J小鼠，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供。 |
| 模型制作方法 | 实验材料
1.实验动物
10~12周龄的SPF级雄性健康C57BL/6J小鼠，体重22~24g，共24只，购于北京华阜康生物科技股份有限公司[SCXK（京）2014-0004]。小鼠饲养于中国医学科学院放射医学研究所动物房屏障环境[SYXK(津)2014－0002]。本实验经过中国医学科学院放射医学研究所IACUC的批准，批准号为1402。并根据3R原则对实验动物的使用和饲养给予人道关怀。
2.试剂与仪器
荧光标记抗体NK1.1-FITC购于Biolegend公司；CD11b-APC，购于Invitrogen公司；B220-percp、F4/80-PE、CD4-PE-cy7、CD8a-APC-cy7购于BD公司；B220-percp-cy5.5、CD3-APC购于biolegend公司。EDTA-K3购于sigma公司。红细胞裂解液购于Invitrogen公司。大鼠脾脏单个核细胞分离液试剂盒购于索莱宝公司。EasySep™ Mouse T Cell Isolation Kit购于STEMCELL Technologies公司。全自动血液分析仪MEK-7222K（日本光电）；BD流式分析仪（BD FACSAria II cell sorter，BD Bioscience ）。铯源伽马射线辐照仪（Gammacell-40，加拿大原子能有限公司）。
实验方法 1.小鼠分组和照射 小鼠均分为三组：对照组（假照射组），4Gy IR组（4Gy组），6Gy IR组（6Gy组）,照射剂量率为1Gy/min。小鼠于SPF级动物房中饲养，照射后每天观察记录体重变化。 2 小鼠外周血常规检测 小鼠TBI 后6 m小鼠眼眶静脉丛取血，抗凝管收集外周血，全自动血液分析仪测定外周血中白细胞数（WBC）、红细胞数（RBC）、血红蛋白含量（HGB）和血小板（PLT）等指标。 3 小鼠胸腺、脾脏指数测定 小鼠TBI 后6 m称重安乐死，取胸腺、脾脏并称重，计算脏器指数，脏器指数=脏器(mg)/体重(g)。 4 外周血免疫细胞和脾脏淋巴细胞分型检测 小鼠TBI后6 m，将分离的小鼠脾脏研磨制备脾细胞悬液。分别取外周血和细胞悬液50 μL，各加入1 mL 1×红细胞裂解液，室温条件下裂解8min（期间混匀两次），1500 r/min离心5 min，4℃。弃上清，保持每个样本100 μL体系，加入对应的混合抗体，冰上避光孵育30 min。2 mL PBS洗一遍，离心条件不变。加入300 μL PBS过滤到流式管中，上机检测。 5 脾脏T细胞分离及P16 mRNA表达量检测 小鼠TBI后6 m，按索莱宝ficoll试剂盒和STEMCELL Technologies的T细胞阴选试剂盒说明书方法进行分离。将收集的细胞重悬计数，按每1~5 × 106个细胞加入1 mL trizol保存，送至上海欧易生物医学科技有限公司检测P16 mRNA表达量。 6 统计学方法 采用GraphPad Prism 6软件(San Diego，CA，USA)处理数据、作图，计量资料数据用均数±标准差（x ̅± s）表示，组间差异采用ANOVA检验和卡方检验。以P< 0.05 为差异有统计学意义。 |
| 模型表型数据 | 1. 受照小鼠受照后外周血计数检测 C57小鼠接受4Gy和6Gy TBI，6 m后全自动血液分析仪测定外周血，发现白细胞数（WBC）、红细胞数（RBC）、血红蛋白含量（HGB）、淋巴细胞百分比（LY%）下降，与假照射组小鼠有明显差异。中性粒细胞百分比（NE%）（图1）。
注：A.白细胞计数B.红细胞计数C.血红蛋白浓度D.血小板计数E.中性粒细胞百分比F.淋巴细胞百分比。*：P＜0.05，**：P＜0.01，***：P＜0.001。 图1. 受照组小鼠与对照组小鼠外血计数比较
2.免疫脏器系数
与对照组小鼠相比，4Gy组和6Gy组小鼠胸腺系数降低，。其中6Gy组与对照组差异有显著性（P＜0.05），脾脏系数略有增加，差异无显著性，结果见图2。
注：A.胸腺系数B.脾脏系数。*：P＜0.05。 图2. 受照组小鼠与对照组小鼠脏器系数比较
3.外周血免疫分型
相对于对照组，4Gy组和6Gy组CD4+均有上升，从分别从12.49±1.16%上升到14.6±0.51%和16.48±2%，均具有显著性差异（P＜0.05）。CD8a+细胞三个组别之间未见明显变化。CD4/CD8比值分别为对照组：1.16±0.10，4Gy照射组1.28±0.17，6Gy照射组1.46±0.26，6Gy组CD4/CD8比值与对照组比较有明显上升（P＜0.05）。B220+细胞从对照组62.89±2.33%降低到4Gy照射组55.63±3.61%和6Gy照射组54.2±3.54%，差异均具有极显著性（P＜0.001）。NK1.1+细胞与B220+细胞变化趋势一样，分别从8.44±0.7%降低到6.81±1.58%和6.6±0.65%。上述三组4Gy和6Gy之间差异均无显著性区别。单核细胞三个组别之间未见到明显差异。结果见图3。
注：A. CD4+ B. CD8+ C. B220+ D. NK1.1+ E. CD11b&F4/80+ F. CD4+/CD8+。*：P＜0.05，**：P＜0.01，***：P＜0.001。 图3. 老年小鼠与年轻小鼠外周血免疫细胞分型比较
4.脾脏免疫细胞分型
相较于对照组，照射组CD3+细胞有上升的趋势，但无显著性差异。B220细胞，照射组均有明显下降，4Gy组和6Gy组相较于对照组有极显著差异（P＜0.01），两组之间未见明显差异。见图4。
注：A. CD3+ B. B220+。**：P＜0.01。 图4.受照组小鼠与对照组小鼠脾脏免疫细胞分型比较
5.脾脏T细胞P16 mRNA表达量检测
结果显示，与对照组相比，6Gy组有个别数据p16 mRNA明显升高，采用卡方检验，未见显著性差异。结果见图5。
图5.受照组小鼠与对照组小鼠脾脏T细胞的P16 mRNA表达比较 |
| 动物模型的评价与验证 | 该模型利用亚致死性剂量x全身照射诱导造血系统远期辐射损伤，对外周血计数、免疫脏器系数、外周血免疫分型、脾脏免疫细胞分型、脾脏T细胞P16表达量等各项指标检测进行模型评价。 |
| 保存方式 | |
| 合作方式 | |
| 相关文章 | 1.管博文，卢延华，苏路路，等. 亚致死剂量全身照射对小鼠造血免疫功能远期影响[J]. 中国比较医学杂志, 2019:00-00 |
| 备注 |
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