Prkra小耳小鼠(B6.Cg-Prkralear)

1. Prkra小耳小鼠繁殖

小鼠饲养条件是按照普通常规鼠笼饲养,每个笼不超过5只小鼠。繁殖方式：用同窝的1只雄性和1只雌性交配获得杂合小鼠，饲养到可以生育的成年鼠后,然后杂合与杂合再交配，得到没有表型的杂合雌、雄小鼠。

2. Prkra 小耳小鼠的基因点突变检测

DNA 测序:设计引物进行Sanger法测序，应用试剂盒法裂解鼠尾提取DNA，洗脱出的DNA 于-20 ℃ 保存。通过引物3 在线平台( http:/ /primer3.ut.ee/ )设计候选变异引物，Prkra 正向引物为TTCAGTAGCGAGCCAGCAC,反向引物为ACAACTGTCCGCTCTGTCG。聚合酶链式反应(PCR)反应体系:金牌Mix(green)27 μl，正向引物1 μl,反向引物1 μl，模板DNA 1 μl。

Prkra 小耳小鼠野生型(上)、杂合型(中)和纯合型(下)的测序峰图，突变位点为在2 号染色体76、643、218 bp(GRCm38)上的G向A的突变,该突变位点位于第3 外显子之后。

1. Prkra 小耳小鼠外耳表型

通过饲养繁育得到5只有表型的纯合型Prkra小耳小鼠,其耳廓结构都非常短小，发育明显较其正常同胞耳廓小，失去正常小鼠耳廓亚结构形态，其耳廓形态与人先天性小耳畸形比较类似，外耳道也比正常同胞窄小，小鼠外耳发育的差异在2 周龄时就很明显。

2.Prkra 小耳小鼠骨骼阿利新蓝染色

选取发育到40d的小耳小鼠和正常小鼠，剥皮处理,放入75%乙醇固定2周,然后放入阿利新蓝工作液中进行软骨染色2d(根据样品大小调整染色时间)，再放入茜素红工作液中染色1d，放入1.5%双氧水溶液中进行漂白(肉眼可见色素去除为标准),脱色后依次放入20%、40%、60%、80%的甘油进行梯度透明各2周，最后放入100%纯甘油中进行保存。

Prkra 小耳纯合型突变小鼠骨骼发育受到明显影响，体型较正常野生型小，四肢骨发育基本正常，但较细短，后肢表现尤为明显。Prkra 小耳小鼠胸廓、肋骨数目基本正常，畸形小鼠肋骨发育较细小，尾骨发育较细短，头颅发育略小。