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标识符 CSTR:16397.09.0C01000749
资源中文名称 病毒性肺炎小鼠感染模型
资源英文名称 Viral pneumonia infection mouse model
疾病概述 呼吸道感染可引起肺炎。人类儿童常见的合胞体病毒(respiratory syncytial virus ,RSV)感染导致儿童肺部疾病,是一种广泛流行的感染性疾病。病毒的感染进行抗病毒治疗多无疗效,使用糖皮质激素的对症处置在很多情况下也没有很好的疗效。
实验动物背景信息

各品系小鼠对PVM的易感性不同,文献报道和我们自己的研究表明,BALB/c小鼠在新生期可出现典型的感染症状,优于其他品系。

模型制作方法

实验材料

实验动物为SPF级BALB/c小鼠,感染症状等与性别无明显关系,感染优选3周龄小鼠。

实验使用毒株为ATCC来源PVM毒株(VR-25)。

实验环境

ABSL-2实验室,

使用负压IVC饲养动物

使用AII型生物安全柜更换动物垫料,并进行感染等操作。

实验操作规程

病毒扩增:在BSL-2实验室进行病毒扩增,并使用TCID50法测定病毒滴度

使用1,000TCID50/只动物进行滴鼻感染

监测动物临床表征变化

监测动物死亡率

动物处理伦理:

动物感染实验,动物的痛苦不可避免,应按照伦理审查确定研究的科学性,并根据研究需要减少动物的使用。

模型表型数据

包括:

1.鉴定、病原学检查信息

使用肺组织定量PCR的方法可以进行组织病毒滴度的评价。测定方法参考团体标准《实验动物PVM的核酸检测方法》,或使用文献支持的下列引物:

PVM -F 5′-GCCTGCATCAACACAGTGTGT- 3′;

PVM -R 5′-GCCTGATGTGGCAGTGCTT- 3′

测试需和组织内参基因表达做均一化处理,如使用GAPDH做内参。

表达水平的结果如下图所示:

图示:小鼠感染PVM7天后肺组织PVM RNA水平(参比GAPDH做均一化处理)。

C:未感染对照,IN-C:感染对照,IN-A,IN-F:两个处理组。

 

表达水平还可经免疫组化进行分析,使用PVM大鼠免疫血清进行小鼠肺组织PVM免疫组化染色,和上图对应的示例图如下:

小鼠感染PVM病毒后组织PVM免疫组化。

A:未感染对照,B:感染对照,C,D:两个处理组。

2.表型分析

3周龄BALB/c小鼠感染PVM后,可见体重较对照组体重下降,如下图所示:

图示:BALB/c 3周龄小鼠感染PVM体重变化

Control:未感染动物;NS:生理盐水处置感染动物;GL:某药物治疗组。

 

感染动物在感染3日后出现竖毛,弓背等症状。严重者体重下降,出现行动迟缓,耳及尾部可见紫绀,震颤。如下图所示:

3.病理表型

动物感染3~7日,肺组织可见充血水肿,组织病理可见肺间隔增宽,肺组织内血管充血,出血,偶见炎细胞浸润。如下图所示。

动物模型的评价与验证 总结该模型鉴定和评价的技术方法和指标体系;分析该模型与国内外现有模型的异同;讨论该模型的技术关键点及难点、创新性和比较医学应用价值。 进行人类RSV 肺炎感染研究,国内外推荐使用PVM做替代实验。PVM的毒株不同,实验动物的品系不同,动物的临床表型也会存在差异。本模型的表型与国外进行的模型研究表型相似,在急性期的死亡率较低,有较长的临床治疗的窗口,可用于免疫治疗的疗效评价。
保存方式 冷冻
合作方式
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