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标识符 CSTR:16397.09.0I01001193
资源中文名称 高表达M-CSF选择性剪接体的MLL-AF9诱导的小鼠髓细胞白血病模型
资源英文名称
疾病概述 急性髓细胞性白血病(Acute myeloid leukemia,AML)是髓系造血干/祖细胞恶性疾病。以骨髓与外周血中原始和幼稚髓性细胞异常增生为主要特征,临床表现为贫血、出血、感染和发热、脏器浸润、代谢异常等
实验动物背景信息

SPF级6-8周龄鼠,C57BL/6J小鼠(CD45.2), B6.SJL-PtprcaPepcb/BoyJ小鼠(B6.SJL,CD45.1)。

模型制作方法
1.病毒准备

细胞:293T

表达载体:MSCV- MLL-AF9 -IRES-GFP,MSCV- M-CSF -IRES-BFP。

2.实验动物

可使用SPF级别的6-8周龄鼠, C57BL/6J小鼠(CD45.2), B6.SJL-PtprcaPepcb/BoyJ小鼠(B6.SJL,CD45.1)。

3.细胞准备:

取B6.SJL小鼠的骨髓细胞,利用C-kit+磁珠,富集C-kit+造血干祖细胞

4.病毒感染

富集的小鼠C-kit+造血干祖细胞,体外感染表达MSCV- MLL-AF9 -IRES-GFP的逆转录病毒,感染后培养48h。

5.细胞回输

感染后的C-kit+造血干祖细胞利用流式细胞仪分选出GFP+的细胞,通过尾静脉注射到致死剂量照射的C57BL/6J小鼠体内,每周检测GFP+细胞的比例。

6.病毒二次感染及回输

当检测到小鼠外周血GFP+细胞的比例超过50%,处死小鼠,取小鼠骨髓细胞,
分选出GFP+细胞,体外感染表达MSCV- M-CSF -IRES-BFP的逆转录病毒,感染后培养48h, 通过尾静脉注射到C57BL/6J小鼠体内,每周检测GFP+ BFP+细胞的比例。

7.模型分析指标
(1)症状观察

细胞回输后小鼠症状表现为:竖毛、弓背。

(2)流式检测

在细胞回输后的一周后,每周检测外周血GFP+ BFP+细胞的比例,有出现GFP+ BFP+细胞,即为模型成功。

模型表型数据
1.动物症状观察

表现为体重减轻、弓背竖毛,在回输后的一个月后死亡。

2.细胞表型

流式检测结果显示,细胞免疫表型为CD3-B220-Gr-1+CD11b+

动物模型的评价与验证
保存方式
合作方式
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