SCID（Server Combined Immune-Deficiency，重度联合免疫缺陷）小鼠。

1.实验材料

1.1 实验动物

SCID小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

1.2 主要实验仪器

Nikon光学显微镜

BIO-RAD电泳仪

Tanon电泳槽

Tanon数码凝胶图像处理系统

Incucell恒温培养箱温控

TAITEC振荡箱

Eppendorf 离心机

Eppendorf 移液器

2.实验操作规程和动物处理伦理

模型制作中涉及动物的操作程序已获得首都医科大学附属北京胸科医院实验动物伦理委员会的批准，批准号为XK2023-117，简要步骤如下：

2.1 脓肿分枝杆菌的感染

将SPF级6‐8周龄雌性SCID小鼠（质量16-20g）随机分为5组，每组5只。感染剂量为2×10⁴CFU，感染方式为雾化感染，感染时长28天。

2.2 标本的收集

动物安乐死后摘眼球取血，解剖取肺、脾组织样本。肺组织用剪刀剪碎，加胶原酶在37摄氏度摇床中消化20-30 min。用筛网过滤后加PBS洗一遍，离心后加红细胞裂解液处理5 min，若细胞沉淀仍有红色，可再裂解一次。加PBS重悬细胞，计数。将脾组织倒在筛网上，用注射器的尾部研磨，加PBS冲洗筛网，离心后加红细胞裂解液处理5min，加PBS重悬细胞，计数。

2.3 小鼠肺脏、脾脏内菌落计数

小鼠处死后在无菌的条件下取部分肺脏和脾脏用于组织病理学观察。对剩余的肺脏和脾脏用研磨器研磨后，用无菌的生理盐水分别按照1：10，1:100，1:1000，1:10000，1:100000五个梯度进行稀释，每份稀释液涂布两块７Ｈ１０平板，涂布完毕后将平板包好装袋，置于37°Ｃ培养箱培养3-4周至长处肉眼可见的清晰菌落。观察结果，选择合适的浓度梯度（菌落数在30-300个之间）进行计数。

1.脓肿分枝杆菌感染SCID小鼠动物模型的建立

我们通过雾化感染的方法对SCID小鼠进行攻毒实验，评估SCID小鼠动物模型是否适用于研究脓肿分枝杆菌感染。三组脓肿分枝杆菌(WT, Δmab2806-07, Δmab2806-07::mab2806-07)感染小鼠1天、21天和28天后，每组随机挑选3只小鼠进行解剖并对肺和脾进行脓肿分枝杆菌菌落计数，计算定殖菌落数。与野生株相比，突变株在肺部及脾脏中均被清除，说明该模型可以用于评估脓肿分枝杆菌的毒力基因（图1-2）。

图1. 脓肿分枝杆菌感染SCID小鼠模型

图2. 脓肿分枝杆菌清除检测

通过我们的模型发现脓肿分枝杆菌突变株毒力减弱，21天基本被完全清除，而野生型持续感染，这说明SCID小鼠可以作为动物模型研究脓肿分枝杆菌的毒力。同时我们发现：随着感染时间的延长，脓肿分枝杆菌感染能力逐渐下降，这说明我们的模型不太适用于脓肿分枝杆菌长期感染的评价，需要进一步优化。