实验用恒河猴在实验室内传代三次以上，遗传背景明确，年龄为1-3岁。实验前进行血清学检查证明抗SARS-CoV-2抗体阴性。恒河猴在生物安全三级（BSL-3）实验室内饲养，并按国家动物生物安全标准操作规程进行操作。

实验材料

1.1  SARS-CoV-2（Omicron毒株），由中国医学科学院医学实验动物研究所提供。

1.2 实验动物

选用SPF级1-3岁恒河猴，2.5-3.5kg，来自中国医学科学院医学实验动物研究所（IACUC 批准号：DW21007）

1.3实验环境

所有涉及的病毒实验操作全部在中国医学科学院医学实验动物研究所ABSL-3实验室完成，该实验室已经具备相关实验室和福利伦理资质。

1.4病原培养鉴定

将新型冠状病毒接种到Vero细胞进行分离和储存。Vero细胞培养在DMEM（英潍捷基, 美国）添加10%胎牛血清，100 IU/ml 青霉素和100 μg/ml链霉素的培养基中，环境为37°C，5%CO2。新型冠状病毒的病毒滴度用标准的半数细胞感染率（a standard 50% tissue culture infection dose，TCID50）进行分析。

1.5实验操作规程

（1） 感染途径：经气管感染；

（2） 感染剂量：1×10⁶ TCID₅₀ 只；

（3） 感染体积：1ml/只；

（4） 对照组：等体积 PBS。

1.6 动物模型分析

（1）症状观察：感染后，每天观察动物一般症状，记录体重和体温等。

（2）病毒载量：定时收集各组动物脏器，进行RNA抽提，利用RT-PCR技术，检测组织中病毒载量。RT-PCR所用的新型冠状病毒引物如下：上游为5’-TCGTTTCGGAAGAGACAGGT-3’ 下游为5’-GCGCAGTAAGGATGGCTAGT-3’。

（3）病毒分离：肺组织在 DMEM 溶液中研磨制备成匀浆，离心分离上清后，接种于Vero细胞分离病毒并观察细胞病变。

（4）病理学观察 用新鲜的组织福尔马林固定，制备石蜡切片，用HE，免疫组化或荧光染色，镜下观察。

1.7数据统计处理方法

所有的数据用GraphPad Prism 6.0 软件分析，感染组小鼠和其他对照组小鼠用T 检验方法分析差异，显著性差异用*p ﹤ 0.05, **p﹤0.01 或者 #p﹤0.05, ##p﹤0.01

Omicron感染后恒河猴的体重变化和直肠温度在正常范围内波动。感染后7 dpi时实施安乐死和尸检。收集单个肺叶以估计病毒载量。在模型组猴肺的大部分肺叶中检测到高水平的病毒RNA，范围从10^4.33到10^6.49 copies/ml。相比之下，BV组只有一只猴子的下肺出现病毒，病毒拷贝数较低(10^4.89/ml)。与对照组相比，BV动物肺部平均病毒载量显著降低 (P < 0.05)。Omicron感染后，2/3加强免疫组动物鼻咽拭子载量在感染后5、7天完全清除，平均肺组织病毒载量显著下降。

图1 恒河猴感染Omicron后体温、体重、病毒载量改变

在样本的组织病理学检查中，感染SARS-CoV-2 Omicron变体的猴子出现了与Delta变体相似的弥漫性肺泡损伤，而所有接种过SARS-CoV-2 Omicron变体的猕猴(3/3)在很大程度上受到了保护，表现出几乎正常到局灶性和轻度的组织学病变，没有任何血栓形成、血管炎或血管周围炎。其他组织未见明显异常。免疫组化染色结果与H&E观察结果一致。

图2 恒河猴感染Omicron后不同组病理学改变

1、临床表征评价指标体系：体温、体重、肺指数

2、病毒学评价指标体系：病毒载量、中和抗体滴度测定

3、病理学评价指标体系：HE染色、免疫组化