SHIV-1157ipd3N4直肠途径感染恒河猴模型-

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标识符	CSTR:16397.09.0G16000436
资源中文名称	SHIV-1157ipd3N4直肠途径感染恒河猴模型
资源英文名称	Rhesus Macaques intrarectally infected with SHIV-1157ipd3N4
疾病概述	艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至2015年5月31日，全国历年累计报告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题，艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。
实验动物背景信息	恒河猴又名孟加拉猴、猕猴或广西猴。学名为（Macaca mulatta），英文名rhesus macaque。分类所属为哺乳纲(Mammalia)，灵长目(Primates)，人猴猿亚目(Anthopoidea)，猴科(Cercopithecidae)，猕猴属(Macaca)。月经周期为28(1-4)天，发情期为11-12个月，怀孕期163天，产仔期3-6个月，胎产仔1-2只，出生重250-380g，哺乳期3-7个月。猕猴属中，恒河猴使用最广。因分子生物学进展，栗色猕猴用于生理、生化、遗传、血型及免疫等方面的研究更多，病理研究也不少，常用于医疗和药物实验等。在生物学研究方面可用于生理学、心理学、遗传学的各种研究。在生理学研究方面可用于脑功能、血液循环、呼吸生理、生殖生理、内分泌和老年学等各项实验。在医学研究方面可用于感染人类所特有的传染病，特别是其他动物不能复制的传染病药物学研究方面，预防小儿麻痹的糖丸，恒河猴是唯一的试验对象，人类避孕药物的研究，用恒河猴作试验是极为理想的，此外，恒河猴还常用于放射病出血和骨髓移植的实验。（一）传染病学研究（二）药理学和毒理学研究（三）生殖生理研究（四）口腔医学研究（五）行为学和高级神经活动研究（六）营养、代谢研究（七）老年病研究（八）器官移植和眼科研究（九）内分泌病和畸胎学研究（十）肿瘤学和环保研究 20世纪60年代出版的《猕猴文献录》中，涉及论文的多达五百余篇；在12种猕猴中，使用栗色猕猴的几乎占一半；试加分析，解剖文章占半数，生理学和生态学其次，再次是分类、地理分布、胚胎、进化、遗传和生化病理各有二十余篇，最少的是古生物和畜养、管理的文章。
模型制作方法	1、实验用病毒：感染毒株SHIV-1157ipd3N4，病毒原液滴度为1×10⁶ TCID₅₀/mL（TZM-bl细胞滴定）。 2、感染动物：选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A01、Mamu-A02、Mamu-B08、Mamu-B17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、感染方法：将麻醉好的实验猴放在操作台上，动物采取俯卧位以保证直肠粘膜充分暴露，缓慢将SHIV-1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株的稀释液注入肛窦处，实验猴保持此姿势30min。 4、 SHIV-1157ipd3N4直肠感染猴样品采集和指标测定：感染采取小量多次的方法，共接种13次，前3次接种的病毒浓度为10TCID₅₀/mL，然后20TCID₅₀/mL接种5次，再50TCID₅₀/mL接种4次，最后对仍未感染的G1023R 100 TCID₅₀/mL接种1次，每次接种间隔4-7d。在每次感染前及13次感染结束后定期采EDTA抗凝血3ml，分别测定CD348及血浆病毒载量。 5、 SHIV-1157ipd3N4直肠感染猴血浆病毒载量的测定：提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SHIV-1157ipd3N4直肠感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+T细胞绝对数
模型表型数据	1、SHIV-1157ipd3N4直肠感染恒河猴外周血病毒载量结果小剂量多次感染使直肠组10只猴感染SHIV-1157ipd3N4后检出血浆病毒RNA载量和载量峰值的时间点各不相同，G1015R、G1016R、G1019R和G1022R早在感染后14d检出，G1018R出现在18d，G1017R出现在21d，G1020R、G1021R和G1024R出现在35d，G1023R最后出现在56d。所有实验猴的血浆病毒RNA载量峰值都在阳转后1w内出现，G1015R和G1016R在21d峰值过后，35d时出现约105 copies/ml的反弹；G1017R和G1023R都只出现了2个大小相近的小高峰，21d时G1017R峰值约10⁵ copies/ml而56d时G1023R峰值约10⁴ copies/ml；G1019R、G1020R和G1022R存在10⁵-10⁶ copies/ml水平的大小相近的数据点，峰值不明显；G1018R、G1021R和G1024R分别在21d、35d和35d出现10⁵ copies/ml以上的明显峰值。10只感染猴载量峰值的范围是2.89×10⁴-2.38×10⁶ copies/ml。在全部13次小剂量感染结束后，10只感染猴都进入10³-10⁴ copies/ml平台期（图1）。图1 SHIV-1157ipd3N4小剂量多次直肠途径感染中国恒河猴血浆病毒载量结果 Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected intrarectally with repeated low dose of SHIV-1157ipd3N4 2、SHIV-1157ipd3N4直肠感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值结果 10只感染猴外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞比值在小剂量多次感染过程中呈现多次小幅度波动，总体保持稳定，其中G1016R、G1018R、G1020R、G1021R、G1023R和G1024R出现明显一过性下降，随后迅速恢复。随感染时间延长，G1016R、G1019R和G1021R外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞比值逐渐下降至0.43-1.0并维持倒置，而G1015R始终徘徊在1.0，其它感染猴稳定在1.0以上（图2）。图2 SHIV-1157ipd3N4小剂量多次直肠途径感染中国恒河猴外周血CD4+/CD8+比值 Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaques infected intrarectally with repeated low dose of SHIV-1157ipd3N4 3、SHIV-1157ipd3N4直肠感染恒河猴外周血CD4+T细胞绝对数结果 10只感染猴外周血CD4+T淋巴细胞绝对数在小剂量多次感染过程中基本保持稳定，存在小幅度的波动。56d后明显升高并维持在这一相对高水平，其中G1018R、G1020R和G1022R在63d时升高约1000/μL，幅度较大，其余感染猴升高约500/μL（图3）。图3 SHIV-1157ipd3N4小剂量多次直肠途径感染恒河猴外周血CD4+T细胞绝对数变化 Fig.3 The CD4+ T cell counts (per l blood) in Chinese-original rhesus macaques infecte intrarectally with repeated low dose of SHIV-1157ipd3N4
动物模型的评价与验证	将病毒缓慢注入猴直肠内，建立同性性传播动物模型，用于艾滋病研究。
保存方式
合作方式	合作研究
相关文章	1. 赵长城，高锡强，吴芳新，张伟伦，薛婧，魏强，秦川. 白细胞介素21对SHIV 感染的恒河猴外周血CD8+T 细胞分泌γ干扰素的影响[J]. 中国比较医学杂志. 2012.22(4): 5-9. 2. 赵长城，高锡强，薛婧，丛喆，张伟伦，苏爱华，陈霆，魏强，秦川. IL-21对恒河猴SHIV 特异性CD8+ T细胞毒性效应的影响[J]. 中国实验动物学报. 2012. 20(5): 29-34. 3. Yue Li，Qiang Liu，Zhenwu Luo，Yan meng Feng，Zhe Li，Qiang Wei and Y iming Shao. Partial Protection of SHIV-Infected Chinese Rhesus Macaques Against Super-Infection with Heterologous SHIV Isolate. Current HIV Research,2012,10,627-635. 4. Zhao CC, Xue J, Cong Z, Gao XQ, Zhang WL, Chen T, Wu FX, Xiong J, Ju B, Su A, Wei Q, Qin C. Circulating IL-21 levels increase during early simian-human immunodeficiency virus infection in macaques. Arch Virol. 2013 Apr;158(4):853-8.
备注	所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。
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